2019 年河南省獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)結(jié)果分析

袁淑萍 劉敏 靳冬 閆若潛

（河南省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 471000）

為進(jìn)一步加強(qiáng)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室管理,提高獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力和水平,按照《農(nóng)業(yè)農(nóng)村部辦公廳關(guān)于開展2019 年省級(jí)獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)工作的通知》[1]和《河南省畜牧局關(guān)于開展2019 年獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)工作的通知》的有關(guān)要求[2],河南省畜牧局在2019 年6 月組織開展了市、縣級(jí)及第三方獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)工作。

1 比對(duì)計(jì)劃

本次比對(duì)依據(jù)河南省畜牧局關(guān)于2019 年獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)工作的文件要求,省轄市、直管縣/市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室和第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室共設(shè)置7 個(gè)比對(duì)項(xiàng)目,分別是H7亞型禽流感病毒抗體（AIV Ab）HI 試驗(yàn)、豬偽狂犬病gB 抗體（PRV gB Ab）ELISA 試驗(yàn)、布魯氏菌病抗體（BRU Ab）試管凝集試驗(yàn),非洲豬瘟病毒（ASFV）核酸熒光PCR 試驗(yàn)、口蹄疫病毒（FMDV）核酸熒光RT-PCR 試驗(yàn)、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV) 核酸熒光RT-PCR 試驗(yàn)、新城疫病毒(NDV) 核酸熒光RT-PCR 試驗(yàn)；縣區(qū)級(jí)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室共設(shè)置4 個(gè)比對(duì)項(xiàng)目,分別是H7亞型禽流感病毒抗體（AIV Ab）HI 試驗(yàn)、豬偽狂犬病gB 抗體（PRV gB Ab）ELISA 試驗(yàn)、布魯氏菌病抗體（BRU Ab）試管凝集試驗(yàn)、非洲豬瘟（ASFV）或新城疫病毒(NDV) 核酸熒光RT-PCR 試驗(yàn)。

2 比對(duì)方法

2.1 試驗(yàn)方法與標(biāo)準(zhǔn)

本次實(shí)驗(yàn)室能力比對(duì)試驗(yàn)共涉及7 個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目,均采用國(guó)家獸醫(yī)參考實(shí)驗(yàn)室或?qū)I(yè)實(shí)驗(yàn)室推薦的方法和試劑,HI 試驗(yàn)和試管凝集試驗(yàn)所用試劑由參與比對(duì)的各級(jí)實(shí)驗(yàn)室自行準(zhǔn)備,但要求HI 試驗(yàn)的抗原和陰陽(yáng)性血清購(gòu)于哈爾濱維科生物,試管凝集試驗(yàn)抗原和陰陽(yáng)性血清購(gòu)于中國(guó)獸藥監(jiān)察所,其余試劑由河南省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心統(tǒng)一配備,詳見表1。

2.2 比對(duì)樣品的準(zhǔn)備

除PRV gB Ab 檢測(cè)樣品委托不參加此次比對(duì)的第三方實(shí)驗(yàn)室提供外,其余均由河南省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心自行準(zhǔn)備。

2.2.1 H7亞型AIV Ab 檢測(cè)樣品

由哈爾濱維科生物技術(shù)有限公司購(gòu)入該項(xiàng)目標(biāo)準(zhǔn)陰性血清、陽(yáng)性血清,稀釋得到雞血清樣品5 份,標(biāo)定參考值分別為6log2、3log2、0log2,各參考值樣品數(shù)目不定。

2.2.2 BRU Ab 檢測(cè)樣品

由中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所購(gòu)入該項(xiàng)目標(biāo)準(zhǔn)陰性血清、陽(yáng)性血清,稀釋得到牛血清樣品5 份,標(biāo)定參考值分別為強(qiáng)陽(yáng)性（1：400）、陽(yáng)性（1：100）、陰性,各參考值樣品數(shù)目不定。

2.2.3 PRV gB Ab 檢測(cè)樣品

由河南洛陽(yáng)萊普生生物公司制備豬血清樣品5 份,標(biāo)定參考值分別為強(qiáng)陽(yáng)性、弱陽(yáng)性、陰性,各參考值樣品數(shù)目不定。

2.2.4 ASFV 核酸檢測(cè)樣品

由中國(guó)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心購(gòu)入質(zhì)粒稀釋得到樣品5份,標(biāo)定參考值分別為陽(yáng)性、陰性,各參考值樣品數(shù)目不定。

2.2.5 FMDV 核酸檢測(cè)樣品由中國(guó)蘭州獸醫(yī)研究所的抗原稀釋得樣品5 份,標(biāo)定參考值分別為陽(yáng)性、陰性,各參考值樣品數(shù)目不定。

表1 比對(duì)試驗(yàn)的方法、標(biāo)準(zhǔn)和主要試劑

2.2.6 PRRSV 核酸檢測(cè)樣品

由疫苗稀釋得到樣品5 份,標(biāo)定參考值分別為陽(yáng)性、陰性,各參考值樣品數(shù)目不定。

2.2.7 NDV 核酸檢測(cè)樣品

由疫苗稀釋得樣品5 份,標(biāo)定參考值分別為陽(yáng)性、陰性,各參考值樣品數(shù)目不定。

2.3 比對(duì)樣品的保存和傳遞

為保證比對(duì)樣品良好的生物學(xué)活性,樣品均存放于-20 ℃以下的冰柜中。分發(fā)時(shí)將樣品和試劑放入帶有冰袋的泡沫箱中保存,由參加比對(duì)的省轄市實(shí)驗(yàn)室派專人在規(guī)定時(shí)間內(nèi)統(tǒng)一領(lǐng)取,并在12h 內(nèi)送達(dá)參加比對(duì)的實(shí)驗(yàn)室[3]。

2.4 評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)

2.4.1 H7亞型AIV Ab 檢測(cè)評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)

6log2、3log2、0log2 的樣品檢測(cè)結(jié)果應(yīng)分別與參考值一致,與參考值偏差不超過1 個(gè)滴度可視為合格。

2.4.2 BRU Ab 檢測(cè)樣品評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)

強(qiáng)陽(yáng)性樣品檢測(cè)結(jié)果為1：400,陽(yáng)性樣品結(jié)果為1：100,強(qiáng)陽(yáng)性和陽(yáng)性結(jié)果與參考值偏差不超過1 個(gè)滴度可視為合格,陰性樣品檢測(cè)結(jié)果為＜1：50。

2.4.3 PRV gB Ab 檢測(cè)樣品評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)

強(qiáng)陽(yáng)性和弱陽(yáng)性樣品檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性,陰性樣品的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為陰性,同時(shí)報(bào)告樣品檢測(cè)OD 值。

2.4.4 核酸檢測(cè)樣品評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)

陽(yáng)性樣品檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性,陰性樣品的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為陰性；除FMDV 核酸檢測(cè)樣品外報(bào)告樣品檢測(cè)CT 值。

3 比對(duì)結(jié)果與分析

3.1 總體結(jié)果

根據(jù)比對(duì)結(jié)果評(píng)判標(biāo)準(zhǔn),在參加比對(duì)試驗(yàn)的18 個(gè)省轄市、10 個(gè)省直管縣、114 個(gè)縣區(qū)級(jí)和3 個(gè)第三方獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室中共有12 個(gè)省轄市、1 個(gè)省直管縣、43 個(gè)縣區(qū)級(jí)和2 個(gè)第三方獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室比對(duì)結(jié)果全部正確。詳見表2、3。

3.2 省轄市獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室

12 個(gè)實(shí)驗(yàn)室所有比對(duì)項(xiàng)目的檢測(cè)結(jié)果100%正確,所有比對(duì)項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果平均正確率為96.98%,同時(shí)2018 年平均正確率為97.30%[4],2017 年平均正確率為94.88%[5],保持了較高的檢測(cè)水準(zhǔn)。其中不同比對(duì)項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果平均正確率見表3。這說明各省轄市實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)體系比較穩(wěn)定,獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力比對(duì)在提升實(shí)驗(yàn)室能力建設(shè)方面發(fā)揮了重要作用。

3 個(gè)實(shí)驗(yàn)室所有比對(duì)項(xiàng)目的檢測(cè)結(jié)果100%正確,6 個(gè)實(shí)驗(yàn)室所有血清學(xué)檢測(cè)項(xiàng)目結(jié)果100%正確；2 個(gè)實(shí)驗(yàn)室所有病毒核酸檢測(cè)項(xiàng)目結(jié)果100%正確,所有比對(duì)項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果平均正確率為95.56%。其中不同比對(duì)項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果平均正確率見表3、附圖。有1 個(gè)直管縣實(shí)驗(yàn)室H7亞型AIV Ab 檢測(cè)結(jié)果正確率為0。僅有3 個(gè)直管縣/市的實(shí)驗(yàn)室具備非洲豬瘟檢測(cè)能力,有1個(gè)直管市尚不具備病毒核酸檢測(cè)能力。無論是從比對(duì)結(jié)果的正確率上還是實(shí)驗(yàn)室自身能力建設(shè)上,多數(shù)直管縣/市明顯弱于省轄市。同時(shí)H7亞型AIV Ab HI 和BRUAb 試管凝集試驗(yàn)的正確率為明顯較低,表明直管縣/市檢測(cè)能力在定量或半定量的血清學(xué)檢測(cè)項(xiàng)目中較為薄弱,需要進(jìn)一步加強(qiáng)訓(xùn)練和質(zhì)量控制,提高準(zhǔn)確率。

3.3 縣區(qū)級(jí)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室

43 個(gè)實(shí)驗(yàn)室所有比對(duì)項(xiàng)目的檢測(cè)結(jié)果100%正確,占縣區(qū)級(jí)參賽實(shí)驗(yàn)室的37.72%；100 個(gè)實(shí)驗(yàn)室BRUAb 檢測(cè)項(xiàng)目結(jié)果100%正確,占縣區(qū)級(jí)參賽實(shí)驗(yàn)室的87.72%；101 個(gè)實(shí)驗(yàn)室H7亞型AIV Ab 檢測(cè)項(xiàng)目結(jié)果100%正確,占縣區(qū)級(jí)參賽實(shí)驗(yàn)室的88.60%；105 個(gè)實(shí)驗(yàn)室PRVgB Ab 檢測(cè)項(xiàng)目結(jié)果100%正確,占縣區(qū)級(jí)參賽實(shí)驗(yàn)室的92.10%；30 個(gè)實(shí)驗(yàn)室ASFV 核酸檢測(cè)項(xiàng)目結(jié)果100%正確,占縣區(qū)級(jí)參賽實(shí)驗(yàn)室（36 個(gè)）的83.33%；21 個(gè)實(shí)驗(yàn)室NDV 核酸檢測(cè)項(xiàng)目結(jié)果100%正確,占縣區(qū)級(jí)參賽實(shí)驗(yàn)室（27 個(gè)）的77.78%。所有比對(duì)項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果平均正確率為91.66%,其中不同比對(duì)項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果見表3。

表2 各級(jí)實(shí)驗(yàn)室正確數(shù)比對(duì)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

表3 各級(jí)實(shí)驗(yàn)室正確率比對(duì)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

個(gè)別實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果的正確率較低,3 個(gè)實(shí)驗(yàn)室PRVgB Ab、4 個(gè)實(shí)驗(yàn)室BRUAb 和2 個(gè)實(shí)驗(yàn)室ASFV 核酸檢測(cè)結(jié)果平均正確率均低于60%,檢測(cè)能力有待提升。

3.4 第三方獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室

比對(duì)項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果平均正確率為94%,2018 年平均正確率為97.14%[4],2017 年平均正確率為91.3%[5]。不同比對(duì)項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果平均正確率如下：H7亞型AIV Ab 100%、BRUAb 87.00%,PRVgB Ab 100%、O/A 型FMDV 核酸100%、PRRSV核酸93.00%、NDV 病毒核酸86.67%。但此次比對(duì)試驗(yàn)結(jié)果選取的第三方實(shí)驗(yàn)室數(shù)量較少,并不能完全反映河南省第三方實(shí)驗(yàn)室的整體水平,僅用于為與其合作提供部分參考。

4 結(jié)論和展望

獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室是做好獸醫(yī)工作的基礎(chǔ)條件,獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室能力比對(duì)是評(píng)價(jià)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)水平的重要手段,也是加強(qiáng)獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的有效方法。本次比對(duì)試驗(yàn)項(xiàng)目涉及禽流感、口蹄疫、高致病性豬藍(lán)耳病、非洲豬瘟、新城疫等重大動(dòng)物疫病,又涉及布病等人畜共患病；比對(duì)方法涉及HI、試管凝集、ELISA、熒光PCR、熒光RT-PCR 等,河南省各級(jí)實(shí)驗(yàn)室和第三方實(shí)驗(yàn)室均展現(xiàn)了較高水平,但也暴露了個(gè)別檢測(cè)項(xiàng)目的不足。希望各地認(rèn)真總結(jié)本次比對(duì)工作,并以此為契機(jī),深入分析查找問題,研究制定改進(jìn)措施,強(qiáng)化實(shí)驗(yàn)室日常監(jiān)管,完善實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系和生物安全管理體系建設(shè),加強(qiáng)監(jiān)測(cè)設(shè)備的補(bǔ)充與更新,加強(qiáng)對(duì)實(shí)驗(yàn)室專業(yè)技術(shù)人員的業(yè)務(wù)培訓(xùn),不斷提升專業(yè)技術(shù)隊(duì)伍素質(zhì),全面提升檢測(cè)能力和水平。