基于代謝組學的茵陳蒿湯及組分配伍對大鼠酒精性肝損傷的保護作用研究＊

閆廣利，周小航，孫 暉，王揚陽，王玉影，王玉美，張愛華，王喜軍

（黑龍江中醫藥大學國家中醫藥管理局中醫方證代謝組學研究中心/國家中醫藥管理局中藥血清藥物化學重點研究室/中美中醫方證代謝組學技術合作中心 哈爾濱 150040）

基于代謝組學的茵陳蒿湯及組分配伍對大鼠酒精性肝損傷的保護作用研究＊

閆廣利，周小航，孫 暉，王揚陽，王玉影，王玉美，張愛華，王喜軍＊＊

（黑龍江中醫藥大學國家中醫藥管理局中醫方證代謝組學研究中心/國家中醫藥管理局中藥血清藥物化學重點研究室/中美中醫方證代謝組學技術合作中心 哈爾濱 150040）

目的：利用代謝組學技術，結合臨床生化檢測和組織病理學，評價茵陳蒿湯及其組分配伍對長期過量攝入酒精誘導肝損傷的保護作用。方法：對Wistar大鼠進行“白酒—玉米油—吡唑”混合溶液灌胃和飼喂高脂飼料12周制備酒精性肝損傷大鼠模型，茵陳蒿湯及其組分配伍組分別于造模開始每日灌胃給予茵陳蒿湯和6,7-二甲氧基香豆素、京尼平苷、大黃酸配伍組合，12周末測定血清ALT、AST、ALP、TG、T-BIL、TP、ALB、CHOL、HA、LN、PCIIINP、CIV濃度和肝臟組織HYP、γ-GT、MDA、TBA、SOD和GSHPX含量，觀察肝左葉HE和Masson染色病理組織切片，并利用UPLC-Q/TOF-MS技術采集尿液代謝輪廓數據，提取各組樣品中酒精性肝損傷生物標記物信息，分析空白對照組、模型對照組、茵陳蒿湯組及茵陳蒿湯組分配伍組之間大鼠代謝輪廓及生物標記物的變化。結果：茵陳蒿湯及其組分配伍均能顯著抑制酒精性肝損傷大鼠血清ALT、AST、ALP、TG、T-BIL、TP、ALB、CHOL、HA、LN、PCIIINP、CIV濃度和肝臟組織HYP、γ-GT、MDA、TBA、SOD和GSH-PX含量的變化，減少肝臟細胞炎性浸潤和肝纖維化，并使肝損傷大鼠整體代謝輪廓遠離模型對照組而靠近正常對照組，使10個生物標記物趨于正常水平。結論 茵陳蒿湯對大鼠酒精性肝損傷具有顯著的保護作用，其3個組分6,7-二甲氧基香豆素、京尼平苷和大黃酸的配伍組合能夠有效表達茵陳蒿湯的生物效應，是其主要有效組分，為茵陳蒿湯防治酒精性肝損傷疾病的創新藥物開發奠定了基礎。

茵陳蒿湯 6,7-二甲氧基香豆素 京尼平苷 大黃酸 酒精性肝損傷 干預作用 代謝組學

酗酒損害人的身體機能，甚至引起一系列的肝臟病變，例如酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝纖維化和酒精性肝硬化等肝損傷疾病[1]。隨著經濟的發展，酒精消耗量在逐年上升，酒精性肝損傷疾病的發病率隨之不斷上漲，且已成為僅次于傳染性肝病的第二大類肝病。因此，亟待開發用于防治長期過量攝入酒精而誘導肝損傷疾病的有效藥物[2]。中醫學認為酒為濕熱有毒之品，長期過量飲酒引起濕熱蘊結之證，治以清熱利濕為主[3，4]。茵陳蒿湯出自漢代張仲景《傷寒論》，具有清熱、利濕、退黃的功用，是治療濕熱黃疸的經典方劑，臨床常用于治療病毒性肝炎、膽囊炎、膽石癥、鉤端螺旋體病等所引起的黃疸等證屬濕熱內蘊者[5]。文獻報道，臨床以茵陳蒿湯為基礎方治療酒精性肝病[6，7]，相關藥效學研究表明：茵陳蒿湯能夠有效干預和治療長期酒精攝入誘導的大鼠肝損傷[8，9]，而且認為酒精性肝病與茵陳蒿湯存在方證對應關系[10]。

本課題組前期利用代謝組學技術結合肝功能檢測評價了茵陳蒿湯對酒精誘導的急性肝損傷的保護作用[11]，并結合中藥血清藥物化學方法，確證了6,7-二甲氧基香豆素、京尼平苷、大黃酸為茵陳蒿湯保肝作用的主要有效組分[12]。本研究制備慢性酒精性肝損傷大鼠模型，進一步利用代謝組學技術，結合肝膽功能、肝臟脂肪病變、肝纖維化等相關臨床生化指標和組織病理變化，評價茵陳蒿湯及其組分配伍對大鼠長期過量酒精攝入誘導肝損傷的保護作用，促進茵陳蒿湯在防治酒精性肝損傷疾病中的應用，以及為基于茵陳蒿湯的防治酒精性肝病創新藥物開發奠定基礎。

1 材料

1.1 儀器

Acquity UPLC超高效液相色譜儀（美國Waters公司）；Micromass Q/TOF micro四級桿串聯飛行時間質譜儀（美國Waters公司）；ULTRA-TURRAX T25 Basic高速勻漿機（德國IKA公司）；KDC-160HR型高速冷凍離心機（中國科大創新股份公司）；電子分析天平（上海梅特勒·托利多有限公司）；SECOMAN BASIC半自動生化分析儀（法國SECOMAN公司）；UV MINI-1240型紫外分光光度計（日本SHIMADZU公司）；VX-II型多管渦旋振蕩器（北京踏錦科技有限公司）；Rotavapor R-3水浴加熱器（瑞士Buchi公司）。

1.2 藥品與試劑

茵陳蒿湯凍干粉：準確稱取18 g茵陳蒿，加1.40 L水，煮沸，保持沸騰煎煮至700 mL，再加入9 g梔子和6 g大黃，再保持沸騰煎煮10 min，煎煮液紗布過濾，濾液濃縮至約1 g·mL-1，制成凍干粉。6,7-二甲氧基香豆素（純度達98%）、京尼平苷（純度達95%）、大黃酸（純度達95%），均為自制。

色譜級乙腈、色譜級甲酸（美國迪馬公司，批號分別為70121、12117）；蒸餾水（廣州屈臣氏食品飲料公司，批號：20130208）。60℃紅星二鍋頭酒（北京紅星股份有限公司，批號：20121130），玉米油（黑龍江興貿食品公司，批號：20120421），吡唑（美國阿拉丁公司，批號：S33638-326），生理鹽水（哈爾濱三聯藥業有限公司，批號：20130131D1），烏拉坦（上海山浦化工有限公司，批號：20121011）。堿性磷酸酶（Alkaline Phosphatase，ALP）測定試劑盒、總膽紅素（Total Bilirubin，T-BIL）測定試劑盒、白蛋白（Albumin，ALB）測定試劑盒、總膽固醇（Cholesterol，CHOL）測定試劑盒、甘油三酯（Triglyceride，TG）測定試劑盒、丙氨酸氨基轉移酶（Alanine Aminotransferase，ALT）測定試劑盒、天門冬氨酸氨基轉移酶（Aspartate Amino Transferase，AST）測定試劑盒（中生北控生物科技股份有限公司，批號分別是130571、130961、130871、130261、130771、130370、131171）；羥脯氨酸（Hydroxyproline，HYP）試劑盒、超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase，SOD）試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶（Glutathion Peroxidase，GSH-PX）試劑盒、丙二醛（Malondialdehyde，MDA）試劑盒、γ-谷氨酰轉肽酶（γ-glutamyl transpeptidase，γ-GT）試劑盒、總膽汁酸（Total Bile Acid，TBA）試劑盒、考馬斯亮藍總蛋白（KMAS）試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號分別是20130512、20130315、20130612、20130423、230130202、20130325、20130421）；透明質酸（Hyaluronic Acid，HA）試劑盒、Ⅲ型前膠原肽（Procollagen III N-termi，PIIINP）試劑盒、Ⅳ型膠原（Collagen IV，CIV）試劑盒，層粘連蛋白（Laminin，LN）試劑盒（北京北方生物工程研究所，批號分別是130420、130420、130420、130420）。

1.3 實驗動物

Wistar大鼠（清潔級），雄性，體重200±20 g，北京維通利華實驗動物技術有限公司提供。飼養溫度25±3℃，濕度65%-75%，12 h蔽光，12 h光照，自由飲水飲食，適應一周后開始實驗。

2 實驗方法

2.1 茵陳蒿湯及其組分配伍灌胃溶液的制備

取凍干粉適量，用0.3%CMC-Na溶液混懸，制成含生藥1.2 g·mL-1的溶液，作為茵陳蒿湯灌胃溶液。

精密稱取6,7-二甲氧基香豆素180 mg、京尼平苷90 mg、大黃酸60 mg，加少量甲醇制成真溶液，再用60 mL 0.3%CMC-Na溶液稀釋，研磨均勻，即得茵陳蒿湯組分配伍灌胃溶液。

2.2 動物分組及給藥

取預適應的Wistar大鼠，按體重隨機分為空白對照組、模型對照組、茵陳蒿湯給藥組、組分配伍給藥組，每組12只。模型對照組、茵陳蒿湯給藥組和組分配伍給藥組大鼠每天灌胃給予“白酒-玉米油-吡唑”按6、2、24 g·kg-1的濃度組合混合成溶液（劑量為8 mL·kg-1），及飼喂高脂飼料（基礎飼料∶膽固醇∶豬大油=79∶1∶20），進行造模[13]；同時，茵陳蒿湯給藥組和組分配伍組分別以10 mL·kg-1的劑量每天灌胃給予大鼠茵陳蒿湯灌胃溶液和3個組分配伍灌胃溶液，干預肝損傷病變過程。另外，空白對照組及模型對照組大鼠每天灌胃加入少量甲醇的0.3%CMC-Na溶液，并且空白對照組大鼠給予普通飼料喂養。各組大鼠于開始試驗后12周末，收集尿液、血液、肝組織，進行臨床生化、組織病理和代謝組學評價。

2.3 樣品采集與處理

各組大鼠于末次給藥后禁食，收集夜晚12 h尿液，-80℃貯存；分析前水浴解凍，在4℃，13 000 r·min-1離心10 min，過0.22 μm濾膜，供UPLC-MS分析。收集尿液后，經麻醉處理，腹主動脈采集血液樣本，室溫靜置30 min后，在4℃條件下5 000 rpm離心10 min，分離上層血清，按試劑盒說明操作，檢測血清ALT、AST、ALP、TG、T-BIL、ALB、CHOL、HA、LN、PCIIINP、CIV。大鼠取血后，用0.9%生理鹽水灌流1 min左右，至肝臟無色后摘取肝左葉按照HE和Masson染色方法制備病理組織切片，在200倍鏡下采集照片；其余肝臟組織制備成勻漿，按試劑盒說明操作，測定HYP、γ-GT、MDA、TBA、SOD和GSH-PX及蛋白定量。

2.4 代謝組學數據采集

2.4.1 色譜條件

色譜柱：ACQUITY UPLCTMHSS T3（100 mm×2.1 mm i.d.，1.8 μm）（美國Waters公司）；流動相：流動相A為0.1%甲酸乙腈，流動相B為0.1%甲酸水，線性梯度洗脫，0-2.5 min，1%-11%A；2.5-4.5 min，11%-21%A；4.5-7.0 min，21%-40%A；7.0-7.5 min，40%-50%A；7.5-10.0 min，50%-99%A；柱溫：45 ℃；流速：0.4 mL·min-1；進樣量：3 μL。

2.4.2 質譜條件

正、負離子掃描模式。電噴霧離子源；毛細管電壓3 000V；樣品錐孔電壓正離子模式25 V，負離子模式30 V；提取錐孔電壓正離子3.0 V，負離子模式2.5 V；脫溶劑氣溫度300℃；錐孔氣流量50 L·h-1；脫溶劑氣流量500 L·h-1。準確質量測定采用亮氨酸-腦啡肽（Leucine-Enkephalin，[M+H]+=556.277 1， [M-H]-=554.261 5）溶液為鎖定質量溶液。質量掃描范圍：m/z 50-1 000 Da。

2.5 數據統計與分析

組間數據用統計學軟件SPSS 18.0中的單因素方差分析（One-way ANOVA）進行分析，以均值±標準差（±s） 表示，兩組均數間的比較采用t檢驗，P＜0.05認為差異有統計學意義。

尿液樣品UPLC-MS數據導入Markerlynx軟件，設置參數提取每個樣品的“保留時間_質荷比_峰面積”信息，經標準化處理后利用嵌套的EZinfo 2.0模塊對各組數據進行非監督的主成分分析（Principle Components Analysis，PCA），得到反映各組聚類程度的得分圖（Scores Plot），對模型組與空白對照組大鼠的尿液代謝輪廓數據進行正交偏最小二乘判別分析（Orthonal Partial Least Square-Discriminate Analysis，OPLS-DA），獲得反映變量貢獻度大小的VIP-plot圖，選取VIP＞1.5且組間t檢驗P＜0.05的變量離子，作為潛在生物標記物集合，進一步利用二級質譜信息及結合HMDB、KEGG、METLIN等組學數據庫進行結構鑒定，確定酒精性肝損傷的生物標記物，并利用MetPA數據庫構建內源性生物標記物的關聯代謝通路。觀察各給藥組對生物標記物的回調程度，選取能夠顯著回調的生物標記物作為各組的效應生物標記物，評價茵陳蒿湯及其組分配伍對酒精性肝損傷的干預作用。

3 實驗結果

3.1 對臨床生化指標的影響

按照試劑盒說明書操作，測定各組大鼠臨床生化指標，包括肝功能指標血清AST、ALT濃度，肝纖維化指標血清HA、LN、CIV、PIIINP濃度和肝組織HYP含量，肝臟氧化損傷指標肝臟中SOD、GSH和MDA含量，脂代謝指標血清TG、CHOL濃度，膽功能指標血清ALP、TBA、ALB濃度和肝臟中γ-GT、TB含量，結果見表1、表2、表3。與空白對照組比較，模型對照組中各測定指標均有極顯著差異（P＜0.01），表明大鼠長期攝入酒精并結合高脂飲食，其肝膽多種功能出現顯著損傷，并出現肝脂代謝紊亂和肝纖維化病變。與模型對照組比較，茵陳蒿湯組除了血清CHOL濃度的變化無顯著差異（P＞0.05）外，血清GSH濃度的回調具有顯著差異（P＜0.05），其它指標的回調均具有極顯著差異（P＜0.01）；組分配伍組血清γ-GT、GSH、MDA濃度的回調具有顯著差異（P＜0.05），其它指標的回調均具有極顯著差異（P＜0.01），表明茵陳蒿湯及其組分配伍均顯著抑制了大鼠肝膽功能損傷、肝臟氧化損傷、肝臟脂代謝紊亂及肝纖維化，具有顯著的保護酒精性肝損傷的作用。

表1 茵陳蒿湯及其組分配伍對酒精性肝損傷大鼠肝纖維化指標的影響

表2 茵陳蒿湯及其組分配伍對酒精性肝損傷大鼠肝功能及膽功能指標的影響

表3 茵陳蒿湯及其組分配伍對酒精性肝損傷大鼠血清白蛋白、脂代謝及肝臟氧化損傷指標的影響

3.2 對組織病理學指標的影響

各組大鼠肝左葉典型HE染色圖見圖1（A-D），圖中可見空白組大鼠肝小葉結構完整，肝細胞以中央靜脈為中心呈放射狀排列，染色均勻；模型組大鼠肝細胞排列紊亂，匯管區可見炎性細胞浸潤及肝竇充血；茵陳蒿湯組和組分配伍組均見大鼠肝小葉結構趨于正常，肝細胞呈放射狀排列，肝竇無充血。

各組大鼠肝左葉典型Masson染色圖見圖1（EH），圖中可見膠原纖維呈藍色，空白組大鼠有含量很少且規則排布的膠原纖維；模型組大鼠藍色區域成片，顯示有大量的膠原纖維；茵陳蒿湯組和組分配伍組大鼠與模型組大鼠相比，藍色區域均明顯減少。

3.3 對整體代謝輪廓及生物標記物的影響

上述臨床生化及組織病理學觀察結果表明，結合高脂飲食，大鼠灌胃酒精12周誘導了肝膽功能損傷、肝氧化損傷、肝脂肪變及肝纖維化等肝損傷病變，酒精性肝損傷大鼠模型制備成功。利用UPLC-Q/TOF-MS技術采集12周末正常對照組、模型對照組、茵陳蒿湯組、茵陳蒿湯組分配伍組大鼠尿液的代謝輪廓數據，標準化處理后PCA分析的得分圖（見圖2），圖中可見各組數據聚類明顯，其中空白對照組與模型對照組偏離最遠，茵陳蒿湯組和組分配伍組交織在一起，接近空白對照組，表明茵陳蒿湯和組分配伍組能夠抑制酒精性肝損傷大鼠代謝網絡的紊亂，并且具有相似的保護作用。

對空白對照組和模型對照組大鼠尿液UPLC-MS數據進行OPLS-DA分析，提取對組間分類貢獻度較大且t檢驗P＜0.05的變量離子進行鑒定，結果確定了21個長期攝入酒精誘導大鼠肝損傷的生物標記物[14]。從空白對照組、模型對照組、茵陳蒿湯組、組分配伍組經標準化處理后的尿液UPLC-MS數據中，提取這21個肝損傷生物標記物的峰面積信息，作為它們在各大鼠體內的相對表達水平，經組間t檢驗分析，選取茵陳蒿湯組、組分配伍組分別與模型對照組比較具有顯著差異（P＜0.05）的標記物作為效應生物標記物，結果發現在21個肝損傷生物標記物中，茵陳蒿湯及其3個組分配伍均對其中10個生物標記物具有顯著回調作用，見圖3。利用MetPA數據庫構建生物標記物的關聯代謝通路，主要涉及牛磺酸和亞牛磺酸代謝通路，纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸生物合成通路，丙酮酸酯代謝，苯基丙氨酸代謝，表明6,7-二甲氧基香豆素、京尼平苷、大黃酸的配伍組合有效表達了茵陳蒿湯對酒精性肝損傷的保護作用，是茵陳蒿湯的主要有效組分。

圖1 茵陳蒿湯及其組分配伍對長期攝入酒精誘導肝損傷大鼠的肝臟組織病理學影響

圖2 茵陳蒿湯及其組分配伍對長期攝入酒精誘導肝損傷大鼠尿液代謝輪廓的影響

圖3 茵陳蒿湯及其組分配伍保護長期攝入酒精誘導大鼠肝損傷的效應生物標記物相對表達強度的比較

4 討論

長期過量飲酒引起的肝臟損傷涉及多個連續的病理變化，在啟動期及發展期依次出現酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝纖維化的病理過程，而肝纖維化進一步發展可引起肝小葉結構改建、假小葉及結節形成，即肝硬化。早期肝纖維化具有可逆性，但到后期有再生結節形成出現肝硬化時則不可逆，故酒精性肝纖維化的預防和逆轉對酒精性肝病的治療起著決定性作用[15]。本研究參考文獻[13]，采用白酒-玉米油-吡唑混合液灌胃結合喂飼高脂飲食的造模方法制備了伴有肝纖維化病變的酒精性肝損傷大鼠模型，在3個月的模型制備過程中，動態觀察了4周、7周、12周大鼠血清及肝組織的生化、病理變化，確定在第12周末造模大鼠出現肝纖維化病變，并伴有局部肝細胞脂肪變性和炎性浸潤的脂肪肝、肝炎病變，以及肝膽功能損傷和肝氧化損傷，表明典型酒精性肝損傷模型制備成功[14]。

茵陳蒿湯和6,7-二甲氧基香豆素、京尼平苷、大黃酸三個組分配伍組合均能夠抑制肝功能標志物血清AST、ALT濃度的升高和ALB濃度的降低，抑制肝纖維化標志物血清HA、LN、CIV、PIIINP濃度和肝組織HYP含量的升高，增加肝臟SOD、GSH含量和減少MDA含量，抑制脂代謝標志物血清TG、CHOL濃度的升高，抑制膽功能指標血清ALP、TBA濃度和肝臟中γ-GT、TB含量的升高，抑制肝細胞炎癥浸潤和纖維組織增生，表明茵陳蒿湯及其組分配伍能夠降低長期過量攝入酒精導致的肝膽功能損傷、肝臟脂質過氧化損傷，并抑制肝纖維化和炎性病變，對酒精性肝損傷具有顯著的保護作用。而且，茵陳蒿湯與其三個組分的配伍組合對酒精性肝損傷的保護作用無顯著差異，表明6,7-二甲氧基香豆素、京尼平苷、大黃酸配伍組合有效表達了茵陳蒿湯對酒精性肝損傷的保護作用。

長期過量攝入酒精對機體的損傷是多方面的，其中肝損傷是主要病理變化。代謝組學從機體整體代謝表型的變化中表征外源性擾動對機體功能的影響，并探索與代謝表型變化相關的分子機制。本研究在成功制備酒精性肝損傷大鼠模型基礎上，利用代謝組學技術鑒定了21個關聯的生物標記物，對酒精性肝損傷具有顯著保護作用的茵陳蒿湯能夠抑制其中10個生物標記物的變化，使其趨于正常水平。文獻報道[10]，酒精性肝損傷大鼠模型病機為脾氣不足、濕熱內蘊，而茵陳蒿湯能夠調控10個模型相關生物標記物的變化，從以方測證角度分析認為這10個生物標記物可能反映了酒精性肝損傷大鼠模型濕熱內蘊的生物學本質。茵陳蒿湯10個效應生物標記物主要涉及牛磺酸和亞牛磺酸代謝通路，纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸生物合成通路，丙酮酸酯代謝通路，苯基丙氨酸代謝通路，其中，苯丙氨酸代謝通路中馬尿酸合成的減少與肝損傷存在密切相關關系，長期過量攝入酒精能夠減少體內馬尿酸的合成，減低尿液中馬尿酸的濃度[16]；牛磺酸和亞牛磺酸代謝通路中牛磺酸可轉化為2-羥基乙烷磺酸，而牛磺酸對肝臟具有保護作用[17]；纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸生物合成通路和丙酮酸酯代謝通路的紊亂表明酒精性肝損傷造成機體氨基酸和糖類代謝的異常，這與文獻報道一致[18，19]。另外，值得注意的是，2-羥基乙烷磺酸、辛二酸在急性酒精性肝損傷大鼠模型中也發生代謝異常[20]。因此，茵陳蒿湯的10個效應生物標記物在多個代謝通路上反映了酒精性肝損傷濕熱內蘊的生物學本質。

綜上所述，茵陳蒿湯和6,7-二甲氧基香豆素、京尼平苷、大黃酸的配伍組合均能抑制肝膽功能損傷、肝臟脂質過氧化損傷及肝纖維化和炎性病變，并均能使10個酒精性肝損傷生物標記物趨于正常水平，對酒精性肝損傷具有相似的保護作用，6,7-二甲氧基香豆素、京尼平苷和大黃酸有效表達了茵陳蒿湯的生物效應，是其保肝作用的主要有效組分。

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A Metabonomic Study on the Protective Effects of Yin Chen Hao Decoction and Its Component Group on Rats with Alcoholic Liver Injury

Yan Guangli, Zhou Xiaohang, Sun Hui, Wang Yangyang, Wang Yuying, Wang Yumei, Zhang Aihua, Wang Xijun
(Research Center of Chinmedomics-State Administration of TCM-Laboratory of Metabolomics / National TCM KeyLaboratory of Serum Pharmacochemistry / Sino-US Chinmedomics Technology Cooperation Center, Heilongjiang University of Chinese Medicine, Harbin 150040, China)

The present investigation was designed to evaluate the protective effects of Yin Chen Hao Decoction (YCHD) and its component group consisting of scoparone, geniposide and rhein on rats with liver injury induced by long-term excessive intake of alcohol using metabonomic technologies and typical pharmacodynamics indexes. Wistar rats had been administered with the mixed solution of alcohol, corn oil and pyrazole and high fat diet for 12 weeks to establish the alcoholic liver injury rat model. At the start day of modeling, rats were intragastricly administered with YCHD and its component group involving scoparone, geniposide and rhein. At the end of the 12thweek, the serum concentrations of ALT, AST, ALP, TG, T-BIL, TP, ALB, CHOL, HA, LN, PCIIINP and CIV were detected and so were the contents of HYP, γ-GT, MDA, TBA, SOD and GSH-PX in the liver. Meanwhile, the pathological examinations of left lobe of liver sections were implemented with HE and Masson staining. Finally, urine endogenic metabolites profiling data and vital biological information of alcoholic liver injury were gleaned using UPLC-Q/TOF-MS-based metabonomic technology. The regulations of biomarkers in the control group, the model group, the YCHD group and the component group were quantified with the pattern recognition and statistics technology. As a result, YCHD and its component group successfully suppressed the changes of ALT, AST, ALP, TG, T-BIL, TP, ALB, CHOL, HA, LN, PCIIINP, CIA, Hyp, γ-GT, MDA, TBA, SOD and GSH-Px with the long-term excessive intake of alcohol. Liver inflammatory cell infiltration and liver fibrosis were improved, while the metabolic profile was far from the model group but close to the control group. Among the 21 biomarkers of alcoholic liver injury rats, 10 biomarkers recovered to normal levels. In conclusion, YCHD presented favorable effects on liver injury rats induced by the long-term excessive intake of alcohol. The combination of scoparone, geniposide and rhein played a representative biological role in the treatment of YCHD, which laid a foundation for the development of some innovative drugs of alcohol liver injury.

Yin Chen Hao decoction, scoparone, geniposide, rhein, alcoholic liver injury, therapeutic effect, metabonomics

10.11842/wst.2016.10.014

R285.5

A

（責任編輯：馬雅靜，責任譯審：朱黎婷）

2016-09-19

修回日期：2016-10-12

＊ 國家自然科學基金委重點項目（81430093）：中藥體內藥效物質基礎的系統分析方法學——中醫方證代謝組學研究，負責人：王喜軍；科學技術部“重大新藥創制”國家科技重大專項（2015ZX09101043-011）：中藥經典名方整合作用機制關鍵技術研究，負責人：王喜軍。

＊＊ 通訊作者：王喜軍，本刊編委，教授，博士生導師，主要研究方向：中藥血清藥物化學及中醫方證代謝組學研究。