人參益智片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

雷明明，劉恬佳，李長(zhǎng)惠，于秀華*

(1.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，長(zhǎng)春 130117；2.吉林修正藥業(yè)集團(tuán)產(chǎn)業(yè)總公司，吉林 通化 134000)

?

人參益智片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

雷明明1，劉恬佳1，李長(zhǎng)惠2，于秀華1*

(1.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，長(zhǎng)春 130117；2.吉林修正藥業(yè)集團(tuán)產(chǎn)業(yè)總公司，吉林 通化 134000)

目的制定人參益智片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案，控制制劑成品質(zhì)量。方法采用薄層色譜法對(duì)制劑中的人參、補(bǔ)骨脂等進(jìn)行鑒別，采用HPLC法測(cè)定補(bǔ)骨脂中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素總含量。色譜條件:用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-2%冰乙酸溶液(30∶70)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為246 nm。結(jié)果TLC法對(duì)制劑中鑒別藥材專屬性強(qiáng)、斑點(diǎn)分離清晰、重現(xiàn)性好，陰性無(wú)干擾；HPLC測(cè)定補(bǔ)骨脂素在0．019～0．19 μg范圍、異補(bǔ)骨脂素在0．023～0．23 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回收率為97．50%，RSD為2．95%。結(jié)論質(zhì)量檢測(cè)方法簡(jiǎn)便易行，專屬性強(qiáng)，重復(fù)性好，可作為制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

人參益智片；薄層色譜法；高效液相色譜法；補(bǔ)骨脂素；異補(bǔ)骨脂素

人參益智片由人參、酸棗仁、益智仁、補(bǔ)骨脂、當(dāng)歸等中藥組成，具有補(bǔ)氣活血，安神益智的功效。主要用于認(rèn)知功能障礙等疾病的治療[1-3]。筆者采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)法、薄層色譜法、紫外分光光度法、紅外光譜法，對(duì)部分提取工藝參數(shù)進(jìn)行優(yōu)選和驗(yàn)證，并采用高效液相色譜法( HPLC)對(duì)制劑中補(bǔ)骨脂的活性成分補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素含量進(jìn)行測(cè)定，使制劑質(zhì)量可控。

1　材料

1．1儀器LC-2010A型高效液相色譜儀(日本島津)，SPD-10AVP檢測(cè)器，C18柱(4 mm×25 cm，5 μm)，Lambda25型紫外分光光度計(jì)(美國(guó)PE分析儀器廠)，CP225D型雙量程電子分析天平(德國(guó)Sartoris)，AMW220D型電子分析天平(日本島津)，CAMAG型薄層色譜成像儀(瑞士CAMAG公司),101-1A型數(shù)顯式電熱恒溫干燥箱(上海陽(yáng)光實(shí)驗(yàn)儀器有限公司),KQ-250DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1．2藥品補(bǔ)骨脂素對(duì)照品(110739-201115)，異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品(110738-201012)，人參皂苷Rb1(110704-201223)、人參皂苷Rg1(110703-201128)、人參皂苷Re(110754-201123)，購(gòu)于中國(guó)藥品生物檢定所，乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2　方法與結(jié)果

2．1薄層鑒別

2．1．1人參薄層色譜鑒別[4-5]取本品20片，研細(xì)，加水3 mL攪拌均勻，加水飽和的正丁醇30 mL，超聲處理30 min，放冷，吸取上清液，加3倍量氨試液洗滌2次，棄去堿液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL溶解，作為供試品溶液。另取人參對(duì)照藥材0．5 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re對(duì)照品加甲醇制成每1 mL含2 mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液1。照薄層色譜法[6]試驗(yàn)，吸取上述溶液各2 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。分別至日光和置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，分別顯相同顏色的斑點(diǎn)和熒光斑點(diǎn)。

2．1．2補(bǔ)骨脂薄層色譜鑒別[7]取本品20片,研細(xì)，加甲醇30 mL,加熱回流 1 h，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，用乙醚振搖提取3次，每次20 mL，合并乙醚提取液，揮干乙醚，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取補(bǔ)骨脂對(duì)照藥材0．5 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取補(bǔ)骨脂素對(duì)照品、異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品，加乙酸乙酯制成每1 mL各含2 mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法[6]試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯(4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%氫氧化鉀甲醇溶液，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

2．2含量測(cè)定[8-10]

2．2．1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-2%冰乙酸溶液(30∶70)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為24 nm。理論板數(shù)按補(bǔ)骨脂素峰計(jì)算應(yīng)不低于5 000。

2．2．2對(duì)照品溶液的制備分別取補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品約10 mg，精密稱定，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密0．1 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，即得。

2．2．3供試品溶液的制備取本品20片，精密稱定，研細(xì)，取約2．0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，稱定重量，放置過(guò)夜，超聲處理(功率250 W，頻率40 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2．2．4專屬性考查取不含木香的陰性對(duì)照液，依法測(cè)定，結(jié)果陰性對(duì)照液色譜在與對(duì)照品峰相應(yīng)的保留時(shí)間處無(wú)色譜峰，表明無(wú)干擾，方法可行。

2．2．5檢測(cè)波長(zhǎng)的確定根據(jù)對(duì)照品的紫外吸收?qǐng)D，最大吸收峰為246．56 nm，故確定檢測(cè)波長(zhǎng)為246 nm。

2．2．6方法學(xué)考察

2．2．6．1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別精密吸取對(duì)照品溶液2．0、4．0、8．0、10．0、15．0、20．0 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。補(bǔ)骨脂素回歸方程:Y=8 333 131．55X+11 025．82,r=0．999 9，線性范圍:0．019～0．19 μg。異補(bǔ)骨脂素回歸方程:Y=5 796 175．73X-4 3421．68,r=0．999 6，線性范圍:0．023～0．230 μg。

2．2．6．2中間精密度試驗(yàn)取同一對(duì)照品溶液，于不同時(shí)間、不同儀器、不同人員分布測(cè)定，進(jìn)樣量10 μL，結(jié)果RSD補(bǔ)骨脂素為0．8%、異補(bǔ)骨脂素為2．1%。試驗(yàn)結(jié)果表明精密度較好。

2．2．6．3穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液，分別于0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣，進(jìn)樣量10 μL，依法測(cè)定，RSD補(bǔ)骨脂素為1．54%、異補(bǔ)骨脂素為1．11%。表明補(bǔ)骨脂溶液在檢測(cè)時(shí)間內(nèi)較穩(wěn)定。

2．2．6．4重現(xiàn)性試驗(yàn)取樣品，獨(dú)立依正文方法測(cè)定6次，結(jié)果每片中補(bǔ)骨脂素與異補(bǔ)骨脂素的總量分別為0．63、0．64、0．64、0．63、0．63、0．64 mg，RSD為0．86%。

2．2．6．5回收率試驗(yàn)取已知含量的樣品20片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，取約1．0 g，精密稱定，加入對(duì)照品溶液，按2．2．3方法進(jìn)行測(cè)定，回收率平均值為97．5%，RSD值為2．95%，證明此方法可行。

3　小結(jié)

采用高效液相色譜法測(cè)定補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素的總和，實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行了系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)，包括不同色譜柱、不同流動(dòng)相、不同流速等條件，表明在一定實(shí)驗(yàn)條件下測(cè)定結(jié)果沒(méi)有顯著性差異，實(shí)驗(yàn)方法穩(wěn)定，可靠，能夠控制制劑的內(nèi)在質(zhì)量。

[1]肖姝云.輕度認(rèn)知功能障礙的中西醫(yī)研究進(jìn)展[J].甘肅中醫(yī),2009,22(5):73-76.

[2]中國(guó)防治認(rèn)知功能障礙專家共識(shí)專家組.中國(guó)防治認(rèn)知功能障礙專家共識(shí)[J].中華老年醫(yī)學(xué)雜志,2006,25(7):485-487.

[3]洪文.張景岳關(guān)于癡呆病的學(xué)術(shù)思想[J].河北中醫(yī),2000,22(7):551-552.

[4]鄭飛,戴雨霖,王一博,等.醒酒益肝顆粒處方工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[J].中成藥,2015,37(8):1708-1712.

[5]肖霞,曹俊凱.人參當(dāng)歸顆粒的薄層鑒別[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥,2012,7(9):249-250.

[6]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2015.

[7]遲明艷,何峰,黃勇,等.益腎養(yǎng)元顆粒的薄層鑒別方法研究[J].貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2014,39(1):43-45.

[8]黃霞,李振國(guó),王曉燕,等.益身靈丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中醫(yī)研究,2014,27(12):63-66.

[9]鄭楠,郭晏華,劉刈,等.補(bǔ)骨脂不同炮制品的指紋圖譜研究[J].遼寧中醫(yī)雜志,2015,42(4):823-825.

[10]趙婷,朱汀瀅,吳斌.補(bǔ)骨脂中補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素測(cè)定[J].中成藥,2015,37(5):1036-1040.

Quality standard of Renshenyizhi Tablets

LEI Mingming1，LIU Tianjia1，LI Changhui2,YU Xiuhua1*

(1.Changchun University of Chinese Medicine,Changchun 130117,China;2.Jilin Xiuzheng Pharmaceutical Group,Tonghua 134000,Jilin Province,China)

ObjectiveTo draft the quality standard of Renshenyizhi Tablets,control quality of finished product.MethodsTo study the Ginseng Radix and psoralen by TLC;To establish a RP-HPLC method for the determination of psoralen and isopsoralen in preparation.The chromatographic column was C18,the mobile phase was Acetonitrile- 2%glacial acetic acid (30:70) at a flow velocity,and the detection wave length was 246 nm.ResultsThe linear concentration range of Psoralen was within 0.019 μg-0.19 μg,isopsoralen was within 0.023 μg-0.23 μg;The average recovery rate was 97.50% (RSD=2.95%,n=6).ConclusionTLC and HPLC procedures are simple,rapid and accurate,and they can be used for the quality control of Renshenyizhi Tablets.

Renshenyizhi Tablets;TLC;RP-HPLC;psoralen;isopsoralen

10.13463/j.cnki.cczyy.2016.04.016

吉林省衛(wèi)生廳科研計(jì)劃項(xiàng)目(2013Z059)。

雷明明(1982-)，女，碩士研究生，主要從事中藥活性成分分離與鑒定。

于秀華，女，碩士研究生導(dǎo)師，電話-15843037288，電子信箱-50329313@qq.com

R284.3

A

2095-6258(2016)04-0706-02

2016-01-10)