松針提取物對大鼠血管內皮依賴性舒張的影響

●韋磊 李金玲 趙敏

松針提取物對大鼠血管內皮依賴性舒張的影響

●韋磊 李金玲 趙敏

據世界衛(wèi)生組織報告，目前全世界每年死于心血管疾病的人數已占發(fā)達國家的近50%，發(fā)展中國家的25%。心血管疾病已成為第二大死亡因素。心血管疾病的發(fā)生又與血管內皮功能障礙有關。當血管內皮受損時，血管舒張活性物質PGI2與NO的產生減少，縮血管因子增多，打破血管平衡穩(wěn)態(tài)，最終導致一系列心血管疾病的發(fā)生。而我們研究的松針提取物的主要成分為松針黃酮。

松針提取物；血管；影響

1 研究背景

松針黃酮，pineneedie flavonoid，是從松針中提取出來的。可用于擴張動脈血管，增加紅血球攜氧能力，促進血液循環(huán)，改善毛細血管的機能，提高免疫力，增加荷爾蒙的分泌，使身體的組織年輕化。且pinececdie flamnoid對心血管系統(tǒng)有很好的療效，如心臟功能方面，擴張血管、抑制ACEI酶和改善微循環(huán)，并有很強的抗炎作用。這些作用的機理表明松針黃酮具有消除氧和氮自由基作用。而我們研究的對松針提取物與血管內皮依賴性舒張作用的研究文獻甚少，所以通過我們的研究可以為臨床治療提供另一種方法。

2 研究目的和意義

心血管疾病一直是造成人類死亡的一大疾病因素，松針黃酮可通過誘導血管平滑肌松弛而產生舒張血管的作用，且本研究為擴大松針黃酮的臨床作用提供實驗依據。

通過本實驗能探明松針提取物對血管內皮舒張的影響。隨著中藥制劑的研發(fā)，將會為心血管疾病患者提供更多安全、有效、經濟的治療藥物。

3 研究方法

（1）建立血管環(huán)模型。

（2）設計對照實驗。

（3）通過BL-820s生物機能實驗系統(tǒng)采集數據，并進行結果分析。

4 研究方法與步驟

4.1 實驗前準備

（1）動物：健康SD大鼠（260-300g）20只，由張店實驗動物飼養(yǎng)中心提供，雌雄兼用。隨機分為內皮完整祖，去內皮組，每組10只。

（2）儀器及設備：手術操作器械（大小剪刀、組織剪、止血鉗、鑷子、縫合線、玻璃分針）、鼠板、注射器（1ml、2ml）、培養(yǎng)皿、恒溫灌流裝置、血管環(huán)連接裝置、脫脂棉

（3）藥品：松針黃酮，粉末狀，苯腎上腺素Phe（10-6mol/ L）、Krebs液（成分NaCl 118 mol/L， KCl 4.75 mol/L, KH2PO4 1.18 mol/L，MgSO4 1.18 mol/ L,， CaCl2 2.5 mol/L, NaHCO3 25 mol/L， glucose 11 mol/L，PH 7.4）、乙酰膽堿Ach（10-6mol/L）生理鹽水、烏拉坦。

（4）連接恒溫裝置，調節(jié)水溫為37℃，內置Krebs液5ml于恒溫水浴槽中，持續(xù)通入95%O2加5%CO2的混合氣體。

4.2 血管環(huán)模型建立

（1）用烏拉坦對大鼠進行腹腔麻醉，迅速取出胸主動脈，在Krebs液中分離結締組織。

（2）內皮完整組：將剝離后的血管剪成2-3mm的血管環(huán)，動作要輕柔，防止內皮損傷，血管環(huán)用兩根不銹鋼微型三角掛鉤貫穿血管管腔，懸掛在浴管中，下方固定，上方以一根細鋼絲連于張力換能器。

（3）接張力換能器與 BL-820s生物機能實驗系統(tǒng)后，初始張力調為2g，平衡1.5h，每15min更換Krebs液1次。

（4）用乙酰膽堿（Ach）10-6mol/L,舒張苯腎上腺素（Phe）所致的收縮反應以檢查內皮完整性。若加入Ach后，血管內皮舒張程度大于60%，則認為內皮基本完整，不產生舒張或者舒張幅度小于10%視為去內皮成功。符合條件的血管環(huán)用于實驗。檢查完畢后，將血管環(huán)沖洗至刺激前的狀態(tài)，再穩(wěn)定30min，每隔15min換液一次，然后進一步檢測藥物對血管環(huán)張力的影響。

（5）去內皮組：在制備去內皮血管環(huán)時，先用棉花簽插入動脈內，輕輕地向同一方向旋轉數圈，再將血管剪成2-3mm的血管環(huán)。血管環(huán)用兩根不銹鋼微型三角掛鉤貫穿血管管腔，懸掛在浴管中，下方固定，上方以一根細鋼絲連于張力換能器。重復之前步驟做實驗。

5 結果分析與討論

（1）松針黃酮對Phe引起的內皮完整胸主動脈環(huán)收縮張力的影響。以10-6mol/ L的Phe作用于血管環(huán)，引起血管收縮，作用約15min，收縮達穩(wěn)定后，將松針黃酮溶液分別加入到4個浴管中，使松針黃酮的最終濃度依次為10-4mol/L、10-5mol/L、10-6mol/L，最后一個加入生理鹽水，觀察血管環(huán)張力的變化。結果發(fā)現三種實驗濃度的松針黃酮對Phe引起的內皮完整胸主動脈環(huán)收縮均有舒張作用，且高濃度的松針黃酮抑制作用比低濃度的舒張作用強，而只加生理鹽水的血管環(huán)張力未變化。說明松針黃酮對血管內皮有依賴性舒張的作用。經方差分析處理，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

（2）松針黃酮對Phe引起的去內皮胸主動脈環(huán)收縮張力的影響以10-6mol/ L的Phe作用于血管環(huán)，引起血管收縮，作用約15min，收縮達穩(wěn)定后，將松針黃酮溶液分別加入到4個浴管中，使松針黃酮的最終濃度依次為10-4mol/L、10-5mol/L、10-6mol/L，最后一個加入生理鹽水，觀察血管環(huán)張力的變化。結果發(fā)現在加入松針黃酮后，血管環(huán)張力無明顯變化，說明松針黃酮對去內皮的血管環(huán)無明顯影響。經方差分析處理，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

6 結論與展望

松針黃酮對苯腎上腺素引起的大鼠內皮的收縮有一定的抑制作用，即松針黃酮對大鼠胸主動脈環(huán)有內皮依賴性舒張作用。且可以看出高濃度的松針黃酮抑制作用比低濃度的舒張作用強。

松針黃酮應用越來越引起人們的重視，人們對松針黃酮的研究越來越細化，也會逐步由器官到細胞以及分子水平去研究松針黃酮，若本驗可以達到預期目標，則松針黃酮可經過鑒定應用于臨床，對心血管疾病的治療更上一層臺階，會為人類的健康事業(yè)作出更大的貢獻。

（作者單位：齊魯醫(yī)藥學院）

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