一種新型生物振蕩培養箱

曹　恒,李建杰,王　婷,袁旭軍,劉　麗

(1.上海理工大學 上海市現代光學重點實驗室,上海　200093;

2.上海科源電子科技有限公司,上海　201101)

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一種新型生物振蕩培養箱

曹恒1,李建杰1,王婷1,袁旭軍2,劉麗2

(1.上海理工大學 上海市現代光學重點實驗室,上海200093;

2.上海科源電子科技有限公司,上海201101)

摘要：鑒于傳統生物振蕩培養箱無法獲知被培養物質的實時生長狀況,在濁度法的基礎上設計出了以光電傳感器為檢測單元,以ADS8320為數據采集和傳輸單元,實現在線光密度(optic density,OD)檢測的新型生物振蕩培養箱。該新型振蕩培養箱不僅可用于生物培養,還能對被培養物質的生長狀況進行實時監測。實驗驗證了該系統的穩定性及準確性,測量誤差在2%左右,能夠準確地反映當前被培養物質的OD值。

關鍵詞：生物振蕩培養箱; 實時生長狀況; 濁度法; OD檢測電路

引言

生物振蕩培養箱也稱為搖床,是一種實驗室常用的液體搖勻和微生物、細菌和細胞培養設備。它是一種生化儀器,在對于溫度和振蕩頻率有較高要求的細菌培養、發酵、雜交、生物化學反應以及酶和組織研究等方面具有廣泛的應用。

隨著時代的發展,要求搖床具有經濟環保,更好的振蕩特性、溫度特性以及可操作性,現有的搖床已經不能滿足人們的需求。Yang等[1]在對現有搖床研究后發現,目前用于微生物培養的搖瓶多為玻璃或一次性硬質塑料制成。玻璃制品每次實驗前后均需清洗和消毒,既浪費人力,又容易造成交叉污染。塑料制品雖然克服了前者的缺點,可也由于不易處理而產生大量廢物,而且經濟上也不是很合算。為此他們在這二者的基礎上提出了一種新型的一次性柔性生物反應器,這種生物反應器不但克服了上述兩種物品的缺點,而且在細菌培養和氧氣傳輸速率上也有了顯著的提高。此外,古磊等[2]、謝清華等[3]、陳培強[4]則針對當前搖床技術的不足之處做出了改進,改善了搖床的振蕩性能、溫度均勻性及可操作性,使得搖床結構緊湊、性能可靠、振蕩性好。

以上所做的改進雖然使得搖床更加的完善,可也僅僅只是在搖床原有的框架內做出了改進。現有的搖床存在著一個很大的局限性,雖然其可以用來進行細胞培養,可是卻無法得知細胞生長的實時情況,只有將經過培養的細胞溶液取出置于酶標儀等工具上測量后,才能得知當前的細胞生長情況。在這一過程中由于環境的改變以及人為操作等因素,使結果與實際的搖床內部的細胞生長結果不一致,從而導致結論錯誤。因此,本文提出的振蕩培養箱集成了細胞培養和細胞檢測功能,在原有的搖床基礎上添加了光密度(optic density,OD)檢測功能,使得我們能夠在培養細胞的過程中實時檢測細胞溶液的OD值,進而監視細胞的生長情況。

1OD檢測原理

吸光度又稱為光密度(OD),是指光線通過溶液或某一物質前的入射光的強度I0與該光線通過溶液或物質之后的透射光強度I1的對數比值(即lg(I0/I1)),吸光度受溶劑、濃度、溫度等因素的影響。

細胞是不透光的,光束通過細胞懸浮液時,由于散射或被吸收而降低透過率,因此懸浮液細胞濃度與光密度(OD)成正比,與透光率成反比。測量前將樣品適當稀釋或加酸處理,在波長450~660 nm處測光密度。有時直接以OD值代替細胞濃度,有時需預先用已知濃度的懸浮液測出吸光度-細胞濃度的標準曲線,再根據所測OD值,從標準曲線上查出細胞濃度值[5-6]。因此,我們便可以通過實時檢測溶液的OD值來監控細胞生長狀況。

2系統硬件設計和軟件設計

如圖1所示,本系統采用STM32處理器作為主控芯片來控制振蕩電路、OD檢測電路、勻光板控制電路以及溫濕度控制電路的運行。圖中振蕩電路[7]包含電機測速電路和電機調速電路,通過調節電機旋轉的速度來帶動托盤,以達到搖勻溶液的目的。OD檢測電路是通過光電傳感器來測量入射光光強在經過溶液后的衰減值,入射光光強的大小是通過調節電位器阻值來控制流經發光二極管的電流大小來調節的,而入射光的周期和頻率則是通過脈沖寬度調制(PWM)來控制的[8]。勻光板控制電路是通過改變PWM波的占空比來控制勻光板光強的大小。溫濕度控制電路中溫度控制是通過PT100來檢測振蕩箱箱內溫度,將其與設置溫度做對比,通過比例、積分、微分(PID)控制算法來達到精準控溫的目的。濕度控制則是通過PWM來控制加濕或者抽濕的量度。

圖1　控制電路框圖Fig.1　Block diagram of Control circuits

軟件設計中主要解決了液晶顯示器(LCD)與STM32處理器之間的通訊以及ADS8320和STM32之間的通訊等問題。LCD通過串口協議控制STM32處理器以此來完成電機轉速測定和調控,溫濕度檢測及調控,勻光板光強調控及OD數據采集和傳輸等任務。軟件設計的原理圖見圖2。

圖2　系統軟件流程圖

3結果與分析

為驗證這種新型生物振蕩培養箱是否達到了設計要求,進行了下面的驗證實驗。

將OD標準板分別置于搖床的8個托盤區域上,然后運行搖床進行檢測,記錄數據并分析。其中標準板分為12行8列共96孔,每一行的OD值均為同一數值。理論值除第一行為透光孔以外,其余各行OD值分別為3.00、0.30、0.57、1.10、2.00、3.00、3.00、0、0、0、0。實際測試時的記錄數據如圖3所示,其中X軸的孔位表示第x行的孔,1~8分別對應這一行的8個孔,Y軸的OD值表示吸光度值。

本文選取了6行具有不同OD值的孔位分別與標準板對應行孔位的OD值做對比,從圖3中我們可以看出實際測得的OD值與標準值雖然不是完全吻合,但是差異不大,數據顯示實際偏差在2%左右,由此說明本文中所設計的OD測量模塊是可信的,能夠準確地測量出OD值。

圖3　不同孔位對應的OD值

4結論

針對目前生物振蕩培養箱不能觀察培養液內細胞生長過程的特點,本文在研究了細胞生長測定方法與研究進展后,采用光電傳感器和ADS8920設計出了一種新的基于濁度法的在線OD檢測生物振蕩培養箱。通過實驗驗證后,發現該系統能夠在振蕩培養細胞的過程中實現在線測量,測量精度在2%左右,能夠較好地用于觀測細胞培養過程中的生長趨勢和過程。

參考文獻：

[1]YANG T,HUANG Y,HAN Z Q,et al.Novel disposable flexible bioreactor forEscherichiacoilculture in orbital sharking incubator [J].Journal of Bioscience and Bioengineering,2013,116(4):452-459.

[2]古磊,李愛東,張兆平,等.一種可在線操作的高速細胞培養振蕩器:CN103320325A[P].2013-09-25.

[3]謝清華,徐永光,甘宜梧.生物安全恒溫振蕩培養箱:CN102586108A[P].2012-07-18.

[4]陳培強.振蕩搖床:CN203955116U[P].2014-11-26.

[5]赫冬霞,劉本發,吳兆亮.細胞生長測定方法與研究進展[J].微生物學通報,2001,28(6):82-85.

[6]閻博,趙林,譚欣,等.濁度法快速測定培養液中的生物量[J].天津化工,2003,17(1):45-46.

[7]宰文姣.無刷直流電動機驅動控制電路的設計和實現[J].微特電機，2013，41(1):54-56.

[8]周明昱,嚴惠民.分光光度計光強采樣電路設計[J].光學儀器，2003，25(4):67-72.

(編輯:劉鐵英)

A novel biological incubator shaker

CAOHeng1,LIJianjie1,WANGTing1,YUANXujun2,LIULi2

(1.Shanghai Key Laboratory of Modern Optical System,University of Shanghai for Science and Technology,Shanghai 200093, China;2.Shanghai Cohere Electronics Technology Co.,Ltd.,Shanghai 201101, China)

Abstract：Traditional biological incubator can’t culture cells and observe real-time cell growth at the same time. An optic density(OD) detection circuit based on turbidity method has been designed, which uses photo-electric sensor for detection and ADS8320 for data acquisition and transmission. This new shaker can be used for not only cultivation, but also observation of the growth in real time. The experiment has been set up to verify the stability and accuracy of the system. Comparing with the average value, the error of the OD value detected by OD detection circuit is no more than 2%. It is demonstrated that the circuit could reflect the OD value of the cultured materials in real time accurately.

Keywords：biological incubator shaker; real-time growth; turbidity method; OD detection circuit

中圖分類號：TP 274

文獻標志碼：A

doi：10.3969/j.issn.1005-5630.2016.01.019

作者簡介：曹恒(1990—),男,碩士研究生,主要從事生物振蕩培養箱的研究與改進。 E-mail:caoheng90@163.com通信作者： 李建杰(1981—),男,講師,主要從事電磁場與微波技術的研究。 E-mail:lijianjie-972023@163.com

收稿日期：2015-05-21