病毒滅活新鮮血漿在不同時間段質(zhì)量分析*

陳素君，謝冬梅，廖麗梅，黃勇華，王艷清，田桂敏，黎文思，鄧啟健，朱敏捷

(1.清遠市中心血站，廣東清遠 511518；2.清遠市清城區(qū)源潭醫(yī)院檢驗科，廣東清遠 511533)

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·論著·

病毒滅活新鮮血漿在不同時間段質(zhì)量分析*

陳素君1，謝冬梅1，廖麗梅1，黃勇華1，王艷清1，田桂敏1，黎文思1，鄧啟健1，朱敏捷2

(1.清遠市中心血站，廣東清遠 511518；2.清遠市清城區(qū)源潭醫(yī)院檢驗科，廣東清遠 511533)

摘要:目的分析亞甲藍光化學法(MB-P)滅活處理新鮮血漿(簡稱病毒滅活新鮮血漿)與未經(jīng)滅活處理的新鮮血漿(簡稱新鮮血漿)在保存期內(nèi)不同時間段有效成分的變化，為臨床輸注提供參考依據(jù)。方法取20人份全血(每份400 mL)，按照標準操作規(guī)程制備成新鮮血漿(每份200 mL)后，將其一分為二，制備病毒滅活新鮮血漿和新鮮血漿，兩種血漿每份無菌分裝為5等份，立即放入速凍冰箱速凍，在0(制備后小于72 h)、3、6、9、12個月分別檢測Ⅴ因子、Ⅷ因子、纖維蛋白原(Fib)、亞甲藍殘留量、總蛋白、pH值、K+、Na+、Cl-水平。結(jié)果兩種血漿隨著保存期的延長，Ⅴ因子、Ⅷ因子、Fib、總蛋白、K+、Na+、Cl-水平呈下降趨勢，pH值呈上升趨勢，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結(jié)論經(jīng)過病毒滅活過程對血漿 Ⅴ因子、Ⅷ因子、Fib、總蛋白、pH值、K+、Na+、Cl-水平均有所影響，但能夠達到國家規(guī)定的臨床用血標準，采用病毒滅活可以在保留血漿基本成分的情況下提高臨床用血的安全性。

關(guān)鍵詞:新鮮血漿；病毒滅活；質(zhì)量；時間段

近年來，血漿用量有持續(xù)增長趨勢，為保障輸血安全，對血漿進行病毒滅活處理勢在必行。亞甲藍光化學法(MB-P)病毒滅活血漿是目前唯一獲準用于臨床的光化學血漿病毒滅活技術(shù)，其機制是亞甲藍可與病毒的基因組核酸(鳥嘌呤-胞核嘧啶)以及病毒的脂質(zhì)包膜相結(jié)合，在可見光氧化損傷的作用下，可使病毒的核酸斷裂，包膜破損，能使大多數(shù)的脂質(zhì)包膜病毒和部分非脂質(zhì)包膜病毒滅活，特別是對丙型肝炎、乙型肝炎、艾滋病等病毒滅活效果最理想[1]。研究者對MB-P滅活處理新鮮血漿與新鮮血漿在保存期內(nèi)不同時間段(0、3、6、9、12個月)分別檢測凝血因子Ⅴ(Ⅴ因子)、凝血因子Ⅷ(Ⅷ因子)、纖維蛋白原(Fib)、亞甲藍殘留量、總蛋白、pH值、K+、Na+、Cl-水平，現(xiàn)報道如下。

1材料與方法

1.1樣品來源取自本市中心血站2012年9月采集6 h內(nèi)保存于2～6 ℃ 20人份無償獻血者全血，血液保養(yǎng)液為枸櫞酸鈉-磷酸-葡萄糖-腺嘌呤(CPDA)，每份400 mL，獻血者符合GB18467-2011《獻血者健康檢查要求》。

1.2儀器與試劑一次性使用血袋[ACQ400B04 費森尤斯卡比(廣州)醫(yī)療用品有限公司]；一次性使用病毒滅活裝置配套用輸血過濾器(ZBKB01 山東中保康醫(yī)療器具有限公司)；血漿病毒滅活柜(ZBK-YBM-01,淄博中保康醫(yī)療器具有限公司)；大容量低溫離心機(RC-3BP+美國賽默飛世爾科技有限公司)；無菌接管機[費森尤斯卡比(廣州)醫(yī)療用品有限公司]；真空固相萃取裝置、隔膜真空泵(天津津騰實驗設(shè)備有限公司)，pH計(雷滋PHS-3C上海儀電科學儀器股份有限公司)；電解質(zhì)分析儀(AFT-500 梅州康立高科技有限公司)；分光光度計(722型 上海精密儀器儀表有限公司)。血凝儀(TECO COATRON M1)；檢測試劑：廠家均為TECO，Ⅴ因子檢測試劑盒(批號：9530115)、Ⅷ因子檢測試劑盒(批號：11081790)、Fib檢測試劑盒(批號：11095938)、通用凝血定標血漿(批號：98001758)。

1.3方法

1.3.1操作步驟(1)取待檢測血漿經(jīng)37 ℃水浴融化；(2)按要求復(fù)溶試劑；(3)用緩沖液將待測樣本稀釋5倍；(4)嚴格按照說明書進行操作，分別檢測定標血漿及樣本的凝固時間；(5)按照公式計算凝血因子水平；(6)每次檢測均制作標準曲線。

1.3.2兩種血漿的制備及留樣同一人份制備的新鮮血漿分成兩袋，每袋100 mL，一袋用于制備病毒滅活新鮮血漿，另一袋用于制備新鮮血漿。病毒滅活新鮮血漿：按標準操作規(guī)程將血漿加入含亞甲藍的光照袋及濾器放入醫(yī)用病毒滅活箱中作病毒滅活(光照強度30 000～38 000 Lx、溫度2～8 ℃、擺動頻率為每分鐘60次、光照時間30 min)，處理后的血漿即為病毒滅活新鮮血漿；新鮮血漿：未經(jīng)上述病毒滅活處理。將兩種血漿每份無菌分裝為5等份，制備完畢后立即放入速凍冰箱內(nèi)速凍，所有血液自采集至制備完畢均在小于8 h內(nèi)完成。

1.3.3檢測項目分別對病毒滅活新鮮血漿和新鮮血漿在保存期0(制備后小于72 h)、3、6、9、12個月時進行檢測，檢測Ⅴ因子、Ⅷ因子、Fib、總蛋白、pH值、K+、Na+、Cl-水平，病毒滅活新鮮血漿還需檢測亞甲藍殘留量。

2結(jié)果

2.1外觀比較兩種血漿均在37 ℃水浴融化后外觀呈淡黃色液體，無纖維蛋白析出。

2.2兩種血漿凝血因子和生化指標水平比較兩種血漿隨著保存期的延長，Ⅴ因子、Ⅷ因子、Fib、總蛋白、K+、Na+、Cl-水平呈下降趨勢，pH值呈上升趨勢，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

表1　　病毒滅活新鮮血漿與新鮮血漿在保存過程中各種指標水平變化(n=20)

*:P<0.05,與0個月比較。

3討論

病毒滅活作為降低輸血風險的新技術(shù)，除能有效地滅活血液中可能存在的病毒外，更重要的是對血液成分的功能無顯著影響，保證血液成分的足夠療效[2]。MB-P 滅活人血漿中的病毒早已被證實，而滅活后對血漿成分的影響國內(nèi)外也已有不少研究，如陳鎮(zhèn)周等[3]研究經(jīng)MB-P滅活的血漿，總蛋白的回收率為97.13%，F(xiàn)ib的回收率為82.1%，Ⅴ因子回收率為81.3%，Ⅷ因子回收率為82.9%。王飛等[4]測得的MB-P病毒滅活前后血漿Ⅷ因子回收率為80.8%、Fib回收率為74.9%，蛋白水平無明顯變化。但對MB-P病毒滅活前后在保存期內(nèi)不同時間段Ⅴ因子、Ⅷ因子、Fib、亞甲藍殘留量、總蛋白、pH值、K+、Na+、Cl-水平變化報道甚少。本研究資料顯示，兩種血漿在0、3、6、9、12個月各項指標自身前后相比，病毒滅活新鮮血漿和新鮮血漿Ⅴ因子開始明顯下降分別在第3個月和第6個月，Ⅷ因子分別在第6個月和第9個月，F(xiàn)ib分別在第6個月和第9個月，總蛋白、K+、Na+在第6個月，Cl-在第12個月，pH值呈上升趨勢，明顯上升在第3個月，亞甲藍殘留量無明顯變化。通過實驗研究證明，新鮮血漿經(jīng)MB-P病毒滅活處理后，除總蛋白、pH值、K+、Na+、Cl-水平無明顯變化外，Ⅴ因子、Ⅷ因子、Fib水平在保存期內(nèi)均明顯下降，F(xiàn)ib水平下降最為明顯，在12個月冰凍保存期內(nèi)不同時間段，病毒滅活新鮮血漿質(zhì)量下降要比新鮮血漿迅速。兩種血漿隨著保存期的延長，除pH值上升外，各種有效成分也隨之下降。

綜上所述，經(jīng)過病毒滅活過程對血漿 Ⅴ因子、Ⅷ因子、Fib、總蛋白、pH值、K+、Na+、Cl-水平均有所影響，但能夠達到國家規(guī)定的臨床用血標準，采用病毒滅活可以在保留血漿基本成分的情況下提高臨床用血的安全性[5]。目前我國對制備病毒滅活新鮮血漿有嚴格的時間要求，為保障病毒滅活新鮮血漿的質(zhì)量，需對整個制備流程作進一步的規(guī)范。因此，在日常工作中應(yīng)不斷地研究影響病毒滅活新鮮血漿相關(guān)因素，加強各環(huán)節(jié)質(zhì)量，以保證輸血安全的同時確保血漿成分的療效。本次研究為臨床使用病毒滅活新鮮血漿提供了信息和依據(jù)。

參考文獻

[1]肖樂宇，肖聲宇.亞甲藍光化學法血漿病毒滅活對血漿成分的影響[J].職業(yè)與健康，2008，24(8)：740-741.

[2]葛健民，柏則蓉，梁啟忠，等.亞甲藍光化學法病毒滅活前后血漿凝血因子等的質(zhì)量分析[J].中國輸血雜志，2012，25(8)：750-751.

[3]陳鎮(zhèn)周，肖明星，陳湘屏，等.亞甲藍光化學法病毒滅活對血漿質(zhì)量的影響[J].中國輸血雜志，2011，24(6)：490-491.

[4]王飛，路志浩，古醒輝，等.亞甲藍光化學法病毒滅活前后血漿成分的變化[J].臨床輸血與檢驗，2010，12(2)：97-98.

[5]宋飛峰，李竹蘭，楊瑩.病毒滅活過程對血漿成分影響的臨床研究[J].中華醫(yī)院感染學雜志，2015，25(9)：1943-1944.

Analysis of the quality in virus inactivated fresh plasma during different time period*

ChenSujun1,XieDongmei1,LiaoLimei1,HuangYonghua1,WangYanqing1,TianGuimin1,LiWensi1,DengQijian1,ZhuMinjie2

(1.QingyuanCityBloodCenter,Qingyuan,Guangdong511518,China;2.DepartmentofClinicalLaboratory,QingchengDistrictYuantanHospitalofQingyuanCity,Qingyuan,Guangdong511533,China)

Abstract:ObjectiveTo Analysis of the changes of the effective components of MB-P fresh plasma and fresh plasma in different time in the preservation period,provides the reference for the clinical infusion.MethodsTaken 20 doses of whole blood (400 mL/copy),in accordance with standard operating procedures preparation fresh plasma (200 mL/copy);Split them in two parts and divided into virus inactivated plasma and fresh plasma group,and divided this two kinds of plasmar in five equal parts in aseptic packaging each;immediately put them into a refrigerator for quick-frozen.Detected their Ⅴ factor,Ⅷ factor,Fib,methylene blue residues,total protein,pH value,the content of K+,Na+and Cl-after 0 (less than 72 h after preparation),3,6,9 and 12 months respectively.ResultsTwo kinds of plasma with the extension of the storage period,Ⅴ factor,Ⅷ factor,Fib,total protein,K+,Na+,Cl-levels were decreased,pH showed an upward trend,the difference was statistically significant (P<0.05).ConclusionAfter virus inactivation treatment,the level of plasma constituents have been changed,but to conform to the standard of blood for clinical use.Therefore,the virus inactivation treatment could be used to improve the safety of the effective components of plasma.

Key words:fresh plasma;virus inactivated；quality；time period

(收稿日期：2015-10-28)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.04.014

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)04-0465-03

基金項目：廣東省清遠市科技計劃課題項目(2013B010)。

作者簡介：陳素君，女，副主任護師，主要從事血液質(zhì)量檢測及管理研究。