IFCC促甲狀腺激素國際溯源和檢測一致性系列研究

閆玉峰，張　娟，李　可，曾　偵，余枝廣

(深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司免疫試劑開發部，廣東深圳 518057)

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·論著·

IFCC促甲狀腺激素國際溯源和檢測一致性系列研究

閆玉峰，張娟，李可，曾偵，余枝廣△

(深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司免疫試劑開發部，廣東深圳 518057)

摘要:目的考察邁瑞促甲狀腺激素(TSH)測定試劑盒(化學發光免疫分析法)精密度、最低檢測限、功能靈敏度、抗類似物干擾、抗內源性干擾和校準一致性等性能。確認各項性能均符合國際臨床化學甲狀腺功能檢測標準化委員會(IFCC)促甲狀腺激素一致性研究的基本要求。方法參照相關EP文件等性能評估指導，使用邁瑞全自動化學發光免疫檢測系統CL2000i，對TSH試劑盒的最低檢測限、功能靈敏度、線性、抗類似物干擾、抗內源性物質干擾、精密度以及校準一致性進行測試。結果最低檢測限為0.001 5 μIU/mL，功能靈敏度為0.013 μIU/mL，在0～98.95 μIU/mL范圍內梯度稀釋，線性相關系數r=0.999。終濃度500 mIU/mL的促黃體生成素、500 mIU/mL的促卵泡生成素及200 000 mIU/mL的人絨毛膜促性腺激素分別加入TSH空白校準品(C0)中，TSH測定結果均不大于0.2 μIU/mL。三酰甘油(1 800 mg/dL)、膽紅素(10 mg/dL)、血紅蛋白(500 mg/dL)或人血清清蛋白(10 g/dL)對TSH測試結果的干擾介于-6.91%～8.60%。使用兩個濃度水平的質控和3個濃度水平的血清樣本測得TSH總不精密度介于3.24%～5.34%。使用兩個濃度水平的質控測得校準一致性介于-6.58%～5.26%。結論邁瑞全自動化學發光免疫檢測系統CL2000i測定TSH的基礎性能均滿足行業標準，具備進行IFCC國際溯源和檢測一致性評估的條件。

關鍵詞:促甲狀腺激素；化學發光免疫分析法；性能評估

邁瑞全自動化學發光免疫檢測系統CL2000i應邀參加甲功標準化委員會(C-STFT)發起的促甲狀腺激素(TSH)試劑盒檢測一致性研究。按照Van Uytfanghe提出的“分步”策略[1]，參與一致性研究的試劑首先要保證基礎性能,包括最低檢測限、功能靈敏度、線性、分析特異度、抗內源性干擾、不精密度及校準一致性等滿足臨床檢驗要求(第1期)，然后開展檢測系統方法學比對研究(第2期)。為此，對邁瑞TSH測定試劑盒進行性能評估。

1資料與方法

1.1儀器與試劑深圳邁瑞全自動化學發光免疫檢測系統CL2000i以及配套的TSH試劑盒(批號：20131001、20140601和20140901)、校準品(批號：20140701和20141201)和低、高值甲狀腺功能復合質控品(批號：20131101和20140801)。

1.2方法

1.2.2功能靈敏度使用7例處理過的混合血清樣本(濃度范圍：0.006～0.095 μIU/mL)，在一臺儀器上使用兩批TSH試劑盒，每批試劑對每例樣本各測10次，實驗共進行5周。對兩批試劑測得的混合數據使用Variance Function Program12.0進行擬合，得到以各樣本TSH濃度均值為橫坐標，以批間不精密度[CV(%)]為縱坐標的擬合曲線。計算CV為20%對應的濃度，即為TSH功能靈敏度。

1.2.3線性參照臨床和實驗室標準化協會(CLIS)的方案EP-6A，使用TSH空白校準品(C0)與接近測量范圍上限的TSH高值血清樣本按照4∶1、3∶2、2∶3、1∶4的比例梯度混合，得到4個稀釋樣本。對6個樣本分別重復測試3次，計算濃度均值。將實測結果與理論結果進行擬合，得到擬合方程及線性相關系數r。

1.2.4抗類似物干擾向TSH的校準品C0中，分別加入終濃度為500 mIU/mL的促黃體生成素(LH)，500 mIU/mL的促卵泡生成素(FSH)或200 000 mIU/mL的人絨毛膜促性腺激素(HCG)，制成3種干擾樣本。每個樣本重復測定2次，計算TSH濃度均值。

1.2.5抗內源性干擾參照CLIS EP7-A2，制備低、高值兩個濃度的TSH混合血清樣本，分別添加終濃度為1 800 mg/mL的三酰甘油，10 mg/dL的膽紅素，500 mg/dL的血紅蛋白或10 g/dL的人血清清蛋白，制成內源性干擾樣本。空白對照樣本則分別添加相同體積生理鹽水(對內酯和血紅蛋白干擾樣本)、0.1 mol/L NaOH(對膽紅素干擾樣本)或無添加(對人血清清蛋白干擾樣本)。將空白對照樣本和對應的干擾樣本各測試3次，計算樣本濃度均值，并計算干擾樣本與空白對照樣本的濃度偏差。

1.2.6精密度參照CLIS EP 5-A3，分別對3個水平的混合人血清和2個質控品進行檢測。每天測試2批，2批間隔時間不少于2 h，每批重復測試2次，持續20 d。計算TSH 試劑盒的精密度。

1.2.7校準一致性使用2批試劑、2批校準品和3臺分析儀組成3個組合，分別對邁瑞低值、高值甲功復合質控品(靶值分別為0.76和39.09 μIU/mL)各重復測試3次，計算質控均值及其與靶值的偏差。

1.3統計學處理使用Excel 2007及Variance Function Program12.0進行數據處理及分析。

2結果

2.1最低檢測限測試結果見表1(見《國際檢驗醫學雜志》網站主頁“論文附件”)。測得TSH最低檢測限為0.001 5 μIU/mL。

2.2功能靈敏度 結果見圖1，TSH試劑盒功能靈敏度為0.013 μIU/mL。

圖1　　TSH功能靈敏度

2.3線性測試結果見表2，擬合方程為Y=0.986X+0.195，線性相關系數r=0.999。

表2　　TSH 線性測試結果

表4　　TSH血清干擾測試結果

表5　　TSH精密度測試結果

2.4抗類似物干擾將表3濃度的TSH類似物分別加入TSH校準品C0中，測得的TSH濃度均小于0.2 μIU/mL，結果見表3(見《國際檢驗醫學雜志》網站主頁“論文附件”)。

2.5抗內源性干擾血清內源物對TSH測定結果的干擾介于-6.91%～8.60%。測試結果見表4。

2.6精密度使用TSH試劑盒測試3個混合血清樣本和2個質控品，每天在2個不同時間段分別測試2次，持續20 d后共得到80個測試數據，測試結果見表5。TSH總不精密度介于3.24%～5.34%。

2.7校準一致性使用2批試劑盒、2批校準品和3臺分析儀組成3個組合，測定低、高值質控的結果見表6(見《國際檢驗醫學雜志》網站主頁“論文附件”)，3個組合的校準一致性介于-6.58%～5.26%。

3討論

TSH的檢測通常是臨床診斷甲狀腺功能紊亂的首選指標。血液中游離甲狀腺激素含量的輕微改變，都會通過負反饋引起TSH的較大變化。因此，TSH的檢測可以靈敏、特異地反映甲狀腺功能，是評估下丘腦-垂體-甲狀腺軸動態平衡的重要早期參數[2-5]。

臨床檢驗過程中，為采用通用指南對疾病進行診斷和治療，理想情況下要求不同檢測系統對臨床樣本檢驗結果一致并具有可比的參考范圍。實現檢測結果一致性，對逐步推行臨床檢驗結果互認，提高醫療服務質量具有重要價值。2005年，IFCC成立甲狀腺功能標準化工作組。2012年，該組織升格為甲狀腺功能標準化委員會，并在全球召集更多參與者推動一致性研究[4]。IFCC開展TSH一致性研究已達數年，目前正采用盡可能多的檢測系統測試具有互換性的真實人血清樣本，用所有檢測結果的均值(APTM)替代參考測量程序實行一致性檢測[6-8]。

對于TSH這樣具有重要臨床價值的待測物，開展一致性研究必須獲取可靠臨床樣本。這要求樣本臨床背景信息清晰可查，濃度分布涵蓋特定范圍并包含對臨床判斷有意義的點。樣本要包括健康人樣本、患者樣本及相關的可能影響測試結果的干擾樣本[9]。有研究曾使用9個制造商的16種TSH免疫試檢測劑盒，對40個血清樣本進行檢測[7-10]。結果表明，16種試劑盒的批內精密度和總精密度分別為1.5%～5.5%和2.5%～7.7%。其中13種試劑盒檢測結果與APTM相差小于10%，在中間濃度范圍(0.05～5.00 mIU/L)，大部分試劑盒比對較好。但也有少數TSH試劑盒在低濃度范圍(0.03～0.05 mIU/L)相對于APTM有明顯負偏差。在有臨床價值的濃度范圍(<0.05 mIU/L和>5.00 mIU/L)，一種試劑盒表現出高達-21%～-33%的負偏差，另一種試劑盒則表現出8%～12%的正偏差。這一結果表明，不同的TSH檢測試劑盒間測試結果差異明顯。通過重新校準，不同檢測系統的TSH測值分布離散性減少，中間濃度范圍的精密度由9.1%改善到5.9%。由此可見，不同TSH檢測試劑盒可通過一組患者血清樣本進行校準，實現檢測一致性。

通過對邁瑞全自動化學發光免疫檢測系統CL2000i TSH試劑盒的測定，其最低檢測限、功能靈敏度、線性、分析特異度、抗內源性干擾、精密度和校準一致性均滿足行業標準和臨床使用需求，滿足IFCC檢測系統方法學比對第1期研究的性能要求，為TSH項目的IFCC檢測系統國際溯源一致性第2期研究奠定了基礎。

參考文獻

[1]Van Uytfanghe K,Linde A,Thienpont LM.A “Step-Up” approach for harmonization[J].Clin Chim Acta,2014,432(1):62-67.

[2]Surks MI,Chopra IJ,Mariash CN,et al.American thyroid association guidelines for the use of laboratory tests in thyroid disorders[J].JAMA,1990,263(1):1529-1532.

[3]Keffer JH.Preanalytical considerations in testing thyroid function[J].Clin Chem,1996,42(1):125-135.

[4]Ladenson PW.Optimal laboratory testing for diagnosis and monitoring of thyroid nodules,goiter and thyroid cancer[J].Clin Chem,1996,42(1):183-187.

[5]Nicoloff JT,Spencer CA.The use and misuse of the sensitive thyrotropin assays[J].J Clin Endocrinol Metab,1990,71(1):553-558.

[6]Van Houcke SK,Van Aelst S,Van Uytfanghe K,et al.Harmonization of immunoassays to the all-procedure trimmed mean-proof of concept by use of data from the insulin standardization project[J].Clin Chem Lab Med,2013,51(5):103-105.

[7]Thienpont LM,Van Houcke SK.Traceability to a common standard for protein measurements by immunoassay for in-vitro diagnostic purposes[J].Clin Chim Acta,2010,411(23):2058-2061.

[8]Thienpont LM,Van Uytfanghe K,Van Houcke S.Standardization activities in the field of thyroid function tests:a status report[J].Clin Chem Lab Med,2010,48(11):1577-1583.

[9]Van Houcke SK,Thienpont LM.“Good samples make good assays” the problem of sourcing clinical samples for a standardization project[J].Clin Chem Lab Med,2013,51(5):967-972.

[10]Thienpont LM,Van Uytfanghe K,Beastall G,et al.Report of the IFCC Working Group for Standardization of Thyroid Function Tests;part 1:thyroid-stimulating hormone[J].Clin Chem,2010,56(6):902-911.

Performance evaluation of Mindray TSH assay on CL2000i system-pre-requisite for IFCC standardization and harmonization of thyroid function tests

YanYufeng，ZhangJuan，LiKe，ZengZhen，YuZhiguang△

(ImmunoassayReagentResearchandDevelopmentDepartment,ShenzhenMindrayBio-MedicalElectronicsCO.,LTD,Shenzhen,Guangdong518057,China)

Abstract:ObjectiveTo evaluate the performance of Mindray TSH chemiluminescence immunoassay,including imprecision,limit of detection,functional sensitivity,interference,cross-reaction,and calibration consistency.The purpose was to confirm Mindray TSH assay meets the criteria of IFCC standardization and harmonization of thyroid functional tests.MethodsThe CLSI guidelines defined in EP documents have been followed to measure the limit of detection,functional sensitivity，specificity,imprecision and calibration consistency of Mindray TSH immunoassay on CL2000i system.ResultsLimit of detection was 0.001 5 μIU/mL，functional sensitivity was 0.013 μIU/mL,the correlation coefficient of linearity was 0.999 in the range of 0-98.95 μIU/mL.Mindray TSH calibrator C0spiked with luteinizing hormone (LH) up to 500 mIU/mL,follicle stimulating hormone (FSH) up to 500 mIU/mL,or human chorionic gonadotropin (HCG) up to 200 000 mIU/mL detected no cross reactivity (detected TSH was less than 0.2 μIU/mL).Hemoglobin up to 500 mg/dL,bilirubin up to 10 mg/dL,triglycerides up to 1 800 mg/dL,and protein up to 10 g/dL showed -6.91%～8.60% bias in TSH measurement.The total imprecision of two controls (high and low levels) and three serum specimens were in the range of 3.24% and 5.34%.Calibration consistency which had been demonstrated with high and low controls were measured between -6.58% and 5.26%.ConclusionThe performance of Mindray thyroid-stimulating hormone assay meets the criteria for IFCC standardization and harmonization of thyroid function tests.

Key words:thyroid stimulating hormone;chemiluminescent immunoassay;performance evaluation

(收稿日期：2015-11-02)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.04.027

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)04-0496-03

作者簡介：閆玉峰，女，試劑開發工程師，主要從事化學發光免疫分析法測定試劑盒的開發。△通訊作者，E-mail:yanyufeng@mindray.com。