冷凝集現(xiàn)象對血常規(guī)多項參數(shù)檢測結(jié)果的干擾及處理對策

竇心靈,樊玉蘭,柴鳳霞,柴　麗,許　麗

(酒泉市人民醫(yī)院檢驗科，甘肅酒泉 735000)

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冷凝集現(xiàn)象對血常規(guī)多項參數(shù)檢測結(jié)果的干擾及處理對策

竇心靈,樊玉蘭,柴鳳霞,柴麗,許麗

(酒泉市人民醫(yī)院檢驗科，甘肅酒泉 735000)

摘要:目的探討冷凝集現(xiàn)象對血常規(guī)多項參數(shù)檢測結(jié)果的干擾及其消除方法。方法將4例有冷凝劑現(xiàn)象的血常規(guī)標本，分別于37 ℃水浴前、后在Sysmex XN-1000全自動血細胞分析儀上進行全血細胞計數(shù)，記錄檢測結(jié)果并分析細胞分布圖及儀器報警信息。結(jié)果冷凝集現(xiàn)象可導(dǎo)致紅細胞計數(shù)(RBC)、紅細胞比容(Hct)結(jié)果假性減低，RBC、Hct與血紅蛋白濃度(Hb)的關(guān)系嚴重不符，紅細胞平均體積(MCV)、平均紅細胞血紅蛋白含量(MCH)、平均紅細胞血紅蛋白濃度(MCHC)結(jié)果假性增高，同時造成白細胞計數(shù)(WBC)、血小板計數(shù)(PLT)結(jié)果減低，但Hb結(jié)果無明顯變化，并出現(xiàn)直方圖、散點圖異常，儀器報警提示RBC凝集及雙峰RBC分布。標本經(jīng)37 ℃水浴20 min后，冷凝集現(xiàn)象消除，上機檢測時血常規(guī)各項參數(shù)檢測結(jié)果均恢復(fù)正常，直方圖及散點圖恢復(fù)正常，無儀器報警提示。結(jié)論冷凝集現(xiàn)象可導(dǎo)致血常規(guī)多項參數(shù)檢測結(jié)果嚴重失真，因此，在檢測血常規(guī)標本時應(yīng)及時發(fā)現(xiàn)冷凝集標本，對其進行37 ℃水浴20 min后可以解除標本凝集，從而使血常規(guī)各參數(shù)的檢測結(jié)果得以校正，為臨床提供正確有效的檢驗報告。

關(guān)鍵詞:冷凝集素;血細胞分析儀;細胞計數(shù)；干擾；對策

自動化血細胞分析儀是臨床醫(yī)學檢驗最常用的儀器之一，而血細胞分析結(jié)果的準確性直接影響臨床對疾病的診斷和治療。在日常工作中，發(fā)現(xiàn)某些干擾因素可導(dǎo)致血細胞分析儀的計數(shù)結(jié)果及分布圖出現(xiàn)異常，尤其是有冷凝集現(xiàn)象的血常規(guī)標本，對血液分析儀的檢測參數(shù)、散點圖和直方圖有顯著干擾作用，導(dǎo)致多項參數(shù)檢測結(jié)果與實際不符。現(xiàn)將工作中遇到的4例冷凝集現(xiàn)象導(dǎo)致血細胞分析儀多項參數(shù)檢測結(jié)果嚴重失真的典型病例及處理方法報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料從本院2013年11～12月期間住院患者的靜脈血常規(guī)檢驗結(jié)果中篩選出有RBC冷凝集的標本4例，其中男性3例，女性1例，年齡23～56歲，其中例1為全身多處軟組織挫傷，例2為系統(tǒng)性紅斑狼瘡，例3為肝破裂，例4為肺癌。所有標本冷凝集試驗均為陽性。

1.2儀器與試劑日本Sysmex公司生產(chǎn)的XN-1000全自動血細胞分析儀及原裝配套試劑和質(zhì)控物；瀏陽市醫(yī)用儀具廠生產(chǎn)的乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝負壓采血管；37 ℃恒溫水浴箱。

1.3方法用EDTA-K2抗凝負壓采血管抽取靜脈血2 mL，并及時充分混勻。標本于采集后0.5～4 h內(nèi)，先在室溫條件下用XN-1000血細胞分析儀對該4例標本進行全血細胞計數(shù)，記錄檢測結(jié)果并分析細胞分布圖及儀器報警信息。然后將該4例標本置于37 ℃恒溫水浴箱加溫20 min，迅速取出標本并充分混勻后立即上機檢測，記錄檢測結(jié)果并分析細胞分布圖及儀器報警信息。

1.4質(zhì)量控制XN-1000血細胞分析儀使用前已做過校準，每日檢測標本之前均做室內(nèi)質(zhì)控，且結(jié)果均在靶值允許的范圍內(nèi)。

2結(jié)果

選取受冷凝集現(xiàn)象影響較大的參數(shù)紅細胞計數(shù)(RBC)、紅細胞比容(Hct)、紅細胞平均體積(MCV)、平均紅細胞血紅蛋白含量(MCH)、平均紅細胞血紅蛋白濃度(MCHC)、白細胞計數(shù)(WBC)及血小板計數(shù)(PLT)等進行室溫和37 ℃水浴20 min后的檢測結(jié)果比較，其中水浴前儀器報警信息均為RBC凝集，水浴后均無儀器報警信息。結(jié)果見表1。通過對上述4例有冷凝集現(xiàn)象的血常規(guī)標本，在37 ℃水浴前、后血常規(guī)多項參數(shù)的檢測結(jié)果的對比分析顯示，冷凝集現(xiàn)象可導(dǎo)致RBC、Hct結(jié)果假性減低，RBC、Hct與血紅蛋白濃度(Hb)的關(guān)系嚴重不符，MCV、MCH、MCHC結(jié)果假性增高，同時造成WBC、PLT結(jié)果減低，但Hb結(jié)果無明顯變化，從而導(dǎo)致血常規(guī)多項參數(shù)檢測結(jié)果嚴重失真，并出現(xiàn)直方圖、散點圖異常，儀器報警提示RBC凝集及雙峰RBC分布，影響臨床對疾病的診斷和治療。標本經(jīng)37 ℃水浴20 min后，冷凝集現(xiàn)象消除，上機檢測時血常規(guī)各項參數(shù)檢測結(jié)果均恢復(fù)正常，直方圖及散點圖恢復(fù)正常，無儀器報警提示，表明對有冷凝集現(xiàn)象的血常規(guī)標本，進行37 ℃水浴20 min后可以解除標本凝集，從而使血常規(guī)各參數(shù)的檢測結(jié)果得到校正。

表1　　37 ℃水浴前、后血常規(guī)多項參數(shù)檢測結(jié)果比較

3討論

冷凝集是指由冷凝集素引起的RBC在低溫環(huán)境下凝集成團的現(xiàn)象。冷凝集反應(yīng)一般出現(xiàn)在31 ℃以下，在0～4 ℃時最強，尤以RBC凝集最為明顯[1]。冷凝集素是一種針對RBC膜抗原的IgM型自身抗體，是一種可逆性抗體，在低溫時可與自身RBC、“O”型RBC或其同型RBC發(fā)生冷凝集[2]，溫度提高后凝集則可消失。健康人血液中可存在低滴度的冷凝集素，其滴度多低于1∶16[3]，一般不引起RBC凝集，但當冷凝集素滴度增高時，則可引起比較嚴重的RBC凝集。自身免疫性疾病、支原體感染、非特異性炎癥、傳染性單核細胞增多癥及多發(fā)性骨髓瘤等疾病可引起冷凝集素滴度輕度增高，高滴度冷凝集素主要見于原發(fā)性冷凝集素綜合征[3]。冷凝集現(xiàn)象會干擾血細胞分析儀檢測，對血常規(guī)多項參數(shù)造成不同程度地影響[4]。

實驗結(jié)果顯示，通過對比分析4例有冷凝集現(xiàn)象的血常規(guī)標本在37 ℃水浴前、后各參數(shù)的檢測結(jié)果，可見RBC、Hct、MCV、MCH、MCHC等參數(shù)受冷凝集的影響最為敏感，冷凝集現(xiàn)象可引起RBC、Hct結(jié)果明顯減低，RBC、Hct與Hb的關(guān)系嚴重不符，MCV、MCH、MCHC結(jié)果顯著增高，并可引起WBC、PLT結(jié)果減低，但Hb結(jié)果無明顯變化。這種現(xiàn)象是由于冷凝集素可使多個RBC聚集在一起,形成大小不等的微粒,使得RBC在鞘液中不能形成單個細胞流，致使血液分析儀檢測時計數(shù)脈沖數(shù)量大幅減少[5]，使RBC遠遠低于實際濃度，造成RBC的假性減低；同時，成團的RBC在經(jīng)過計數(shù)小孔時被當成大RBC，引起脈沖振幅的增大，從而造成MCV假性增高及RBC分布圖異常等現(xiàn)象。但RBC凝集時以RBC減低為主要特征，使得Hct(Hct=RBC×MCV)結(jié)果仍然減低[4,6]。Hb的測定是RBC被溶血劑溶解后測得,因此該值的檢測結(jié)果不受冷凝集現(xiàn)象的影響。由于MCH、MCHC是以RBC、Hb和Hct通過公式由儀器自動計算得出,因此會造成MCH(MCH=Hb/RBC)、MCHC(MCHC=Hb/Hct)的計算值異常增高。 冷凝集素除對RBC有作用外，也可與中性粒細胞、淋巴細胞、單核細胞、巨噬細胞和PLT等發(fā)生凝集，使WBC、PLT的結(jié)果也假性減低[6]。WBC假性減低的原因可能為部分WBC被包裹在RBC凝集體中時，其體積會明顯擴大,從而超出血細胞分析儀在白細胞測定閾值上的范圍(一般為30～450 fL)，也超出白細胞散點圖分布的區(qū)域，從而將其排除在白細胞計數(shù)之外，造成漏檢而導(dǎo)致WBC減低[7]。PLT假性減低的原因可能為當部分PLT被包裹在RBC凝集體中以及PLT的自凝，使得PLT假性減低，同時可干擾RBC計數(shù)和分布[4]。

判斷血常規(guī)標本可能存在冷凝集現(xiàn)象依據(jù)如下。(1)血細胞分析儀檢測結(jié)果顯示：Hb正常或輕度減低，而RBC和Hct明顯減低，Hb/RBC的比值明顯增高(44.7～99.2)∶1，平均73.2∶1(健康人約為30∶1)；MCH明顯增高44.7～99.2 fL，平均 73.2 fL (健康人約為30 fL)；MCHC明顯增高440～940 g/L，平均696 g/L(健康人小于360 g/L)。(2)輕輕搖動血液時，肉眼可見管壁上有明顯的細砂粒狀的凝集顆粒；血液標本制作血涂片時，肉眼可見血膜上有許多細小顆粒；用低倍鏡及高倍鏡觀察，可見RBC凝集成團塊狀；血涂片瑞-姬氏染色油鏡觀察，可見成熟RBC凝集成不規(guī)則的片狀或團塊狀，但不同于漿細胞病時的RBC緡錢狀排列。(3)標本在37 ℃水浴20 min后，輕搖標本時管壁的凝集顆粒消失，涂片顯微鏡下觀察時RBC無凝集現(xiàn)象，上機檢測時血常規(guī)各項參數(shù)檢測結(jié)果均恢復(fù)正常，直方圖及散點圖恢復(fù)正常，儀器無報警提示。

為了盡可能完全消除冷凝集現(xiàn)象對血細胞分析儀檢測結(jié)果的影響，應(yīng)注意冷凝集標本從37 ℃水浴取出后到上機檢測前的保溫，尤其要注意冷凝集閾值溫度較高的標本，通常做法是將樣管握在掌心顛倒混勻，開蓋后立即吸樣檢測[4]。

綜上所述，為了防止冷凝集現(xiàn)象對血細胞分析儀計數(shù)結(jié)果的干擾，應(yīng)認真做好分析前的質(zhì)量控制工作，應(yīng)在血細胞檢測實驗室安裝恒溫裝置，尤其是沒有暖氣或空調(diào)的實驗室[4]。上機檢測前，應(yīng)仔細觀察每份血常規(guī)標本的外觀，當搖動血液時，仔細觀察管壁上是否有明顯的細砂粒狀的凝集顆粒。對懷疑有冷凝集的標本，應(yīng)將血常規(guī)標本置37 ℃水浴20 min，待冷凝集現(xiàn)象消除后，再立即上機檢測。重視和堅持做好分析后質(zhì)量控制工作是獲得準確實驗結(jié)果的重要環(huán)節(jié)[4]。因此，在日常工作中要自覺地按實驗要求對每份血細胞檢測結(jié)果仔細分析，在審核報告單時，除了重點審查WBC、RBC、Hb、PLT等主要指標外，千萬不可忽略MCV、MCH、MCHC，尤其是MCHC，當Hb/RBC的比值明顯增高(健康人約為30∶1)，MCHC異常增高(健康人小于360 g/L)時，同時注意觀察散點圖、直方圖異常及儀器報警提示，這些信息往往能幫助發(fā)現(xiàn)由于冷凝集現(xiàn)象等干擾因素導(dǎo)致的血細胞分析參數(shù)檢測結(jié)果的嚴重錯誤。對于發(fā)現(xiàn)的冷凝集標本，應(yīng)結(jié)合臨床，查明原因，通過37 ℃水浴20 min等方法排除干擾，防止發(fā)出錯誤的檢驗報告，影響臨床診斷和治療。

參考文獻

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(收稿日期：2015-11-14)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.04.061

文獻標識碼：B

文章編號：1673-4130(2016)04-0562-02