與腦膜炎奈瑟菌血清交叉的落菲不動(dòng)桿菌的鑒定

李曲文，陳愛(ài)平，謝芳?xì)J，林震宇

(1、福建省疾病預(yù)防控制中心，福建350001；2、福建省人獸共患病研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建350001)

?

·病例報(bào)告·

與腦膜炎奈瑟菌血清交叉的落菲不動(dòng)桿菌的鑒定

李曲文，陳愛(ài)平，謝芳?xì)J，林震宇

(1、福建省疾病預(yù)防控制中心，福建350001；2、福建省人獸共患病研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建350001)

關(guān)鍵詞：腦膜炎奈瑟菌；洛菲不動(dòng)桿菌；血清交叉

不動(dòng)桿菌屬（Acinetobacter）歸于奈瑟菌科，不動(dòng)桿菌屬為一群不發(fā)酵糖類、氧化酶陰性、硝酸鹽還原陰性、不能運(yùn)動(dòng)的革蘭陰性桿菌。菌體多為球桿狀，常成雙排列，看似雙球菌[1]。有時(shí)臨床易于腦膜炎奈瑟菌混淆。本文對(duì)一株與腦膜炎奈瑟菌有血清交叉的洛菲不動(dòng)桿菌的鑒定報(bào)告如下。

1　材料與方法

1.1菌株來(lái)源醫(yī)院從一個(gè)8個(gè)月幼兒腦脊液培養(yǎng)分離到一株疑似腦膜炎奈瑟菌。（上機(jī)VITEK 2奈瑟菌（NH）鑒定卡：鑒定編碼：3237400000，提示腦膜炎奈瑟菌，鑒定率93%）。

1.2實(shí)驗(yàn)材料血平板、巧克力平板購(gòu)自環(huán)凱有限公司；乳膠凝集試劑購(gòu)自英國(guó)OXOID公司；流腦診斷血清購(gòu)自天津生物芯片公司，PCR反應(yīng)試劑、DL 2000 Marker、購(gòu)自Takara公司；瓊脂糖、溴化乙錠(10mg/m1)等購(gòu)自上海生工公司。Gel Doc XR+凝膠成像系統(tǒng)，Basic電泳儀，PCR擴(kuò)增儀為G-Storm（英國(guó)GeneTech公司）。

1.3基因引物本研究所用的基因引物（參考文獻(xiàn)[2]），全長(zhǎng)16S RNA基因（參考文獻(xiàn)[3])，寡核苷酸和測(cè)序均由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成。

1.4模板的制備分純的細(xì)菌菌落，直接刮取適量于300μl的純水制備成菌懸液，100℃煮沸裂解10min，10000r/min離心5min，取上清做為PCR檢測(cè)的DNA模板。

1.5PCR反應(yīng)條件PCR反應(yīng)均采用20μl的反應(yīng)體系，各組成成分的終濃度分別為：rTaq DNA聚合酶0.5U，dNTP 200μmol/L，上游引物0.4μmol/L，下游引物0.4μmol/L，DNA模板3μl。

1.6測(cè)序按照按天根技術(shù)有限公司細(xì)菌基因組提取說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，常規(guī)PCR后，由上海生工生物工

2　結(jié)果

⑴革蘭染色：革蘭陰性球桿菌。

⑵氧化酶：陰性。

⑶生化鑒定情況：①上機(jī)VITEK-2革蘭陰性（GN）鑒定卡：鑒定編碼：0040000100100003，提示洛菲不動(dòng)桿菌，鑒定率98%。②API20 NE編碼為0000002提示洛菲不動(dòng)桿菌，鑒定率98.9%。

⑷流腦乳膠凝集：A群（+++）、B群（+++）、C群（-）、W135群（-）。

⑸流腦血清凝集：A群（+++）、B群（-）、C群（-）、W135群（-）。

（6)實(shí)時(shí)熒光PCR：流行性腦膜炎雙球菌核酸測(cè)定為陰性。

⑺常規(guī)PCR檢測(cè)結(jié)果：CrgA-，Orf-2(A)-，SiaD (B)-，SiaD(C)-，SiaD(D)-，SiaD(W135)-，排除流腦。

⑻全長(zhǎng)16S RNA基因測(cè)序結(jié)果：為不動(dòng)桿菌屬，鑒定率99.9%

3　討論

不動(dòng)桿菌屬為一類非發(fā)酵糖革蘭陰性桿菌，臨床主要以鮑曼不動(dòng)桿菌和洛菲不動(dòng)桿菌為主，其廣泛分布于自然界、醫(yī)院、人體體表以及人體的上呼吸道內(nèi)，是一種引起的機(jī)會(huì)性感染包括皮膚傷口感染，泌尿生殖道感染，肺炎，肺膿腫，還可引起敗血癥，心內(nèi)膜炎，腦膜炎，腦膿腫等[4-6]。洛菲不動(dòng)桿菌，專性需氧菌，營(yíng)養(yǎng)要求不高，普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好。在血平板平板上經(jīng)35℃~37℃培養(yǎng)18h~24h后，可形成圓形、灰白色、光滑、濕潤(rùn)、邊緣整齊、直徑2~3mm的菌落，無(wú)色素形成；菌落較小，直徑為1~1.5mm；菌體多為球桿狀，常成雙排列，看似雙球菌，有時(shí)不易脫色，可單個(gè)存在，無(wú)芽胞、無(wú)鞭毛，黏液型菌株有莢膜。

而腦膜炎奈瑟菌專性需氧，5% CO2條件下生長(zhǎng)更佳。35℃培養(yǎng)18~24h后可見(jiàn)圓形、灰褐色、濕潤(rùn)、光滑、邊緣整齊、直徑1~2mm的小菌落。鏡檢一般為腎形或豆形革蘭陰性雙球菌，兩菌接觸面平坦或略向內(nèi)陷，直徑0.6~0.8μm。該菌鑒定主要通過(guò)氧化酶、糖類發(fā)酵和血清學(xué)等試驗(yàn)以及培養(yǎng)生長(zhǎng)特點(diǎn)進(jìn)行[7，8]。奈瑟菌為氧化酶陽(yáng)性，葡萄糖、麥芽糖陽(yáng)性。

兩者鑒別要點(diǎn)，培養(yǎng)物經(jīng)涂片、染色，如為革蘭陰性成雙排列的球桿菌，形態(tài)似奈瑟菌；KIA底層及斜面均不變色、無(wú)動(dòng)力；氧化酶陰性，硝酸鹽還原試驗(yàn)陰性，可初步確定為不動(dòng)桿菌[9，10]。

本文中的洛菲不動(dòng)桿菌，與流腦乳膠凝集：A群（+++）、B群（+++）和流腦A群（+++）血清凝集，但經(jīng)實(shí)時(shí)熒光PCR、常規(guī)PCR、全長(zhǎng)16S RNA基因排除腦膜炎奈瑟菌，這提醒我們?cè)诮窈蟮臋z驗(yàn)工作中應(yīng)該注意不動(dòng)桿菌屬與奈瑟菌屬的鑒別。

參考文獻(xiàn)

[1]Turton JF，Shah J，Ozongwu C，et al．Incidence of Acinetobacter species other than A. baumannii among clinical isolates of Acine-

中圖分類號(hào)：R446.5，R378.1+5

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1674-1129(2016)03-0402-02

DOI：10.3969/j.issn.1674-1129.2016.03.049

基金項(xiàng)目：福建省衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)青年科研課題（2014-1-26）程技術(shù)服務(wù)有限公司進(jìn)行測(cè)序后在NCBI網(wǎng)站進(jìn)行Blast。