草莓脫病毒及無病毒苗繁育

譚永軍　王際軒魏永祥　楊玉春　張　舵　孫　斌

（遼寧省果樹科學研究所，遼寧熊岳115009）

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草莓脫病毒及無病毒苗繁育

譚永軍王際軒*魏永祥楊玉春張舵孫斌

（遼寧省果樹科學研究所，遼寧熊岳115009）

摘要：本文闡述了草莓病毒病的危害，介紹了幾種脫除草莓病毒的方法及效果，包括熱處理、莖尖培養、熱處理結合莖尖培養、花藥培養，并提出了無病毒苗繁育技術和無病毒苗保存圃的建設要求等。

關鍵詞∶草莓；脫病毒技術；無病毒苗繁育

草莓（Fragaria ananassa Duchesns）是薔薇科（Rosaceae）草莓屬（Fragaria）多年生草本果樹，在栽培果樹中以植株矮小、結果快、繁殖容易、便于栽培管理、適應地區廣泛、宜鮮食又宜加工等多項優勢占據了世界小漿果類果樹栽培面積和產量的首位。然而，在草莓的多年生產栽培中為了保持優良品種的特有經濟性狀，一直采用埋壓匍匐莖、分株等營養繁殖途徑繁育種苗，造成病毒不斷傳播、積累，危害愈加嚴重。病毒病常常造成植株生長衰弱，花芽不能正常分化，開花期推遲，坐果率降低，果實品質劣化，產量大減。在保護地栽培中，連年重茬使病毒危害尤為突出，病毒造成絕產的草莓棚已不少見，成片死苗的草莓棚也時有發生。

我國草莓病毒病發生普遍，草莓斑駁病、鑲脈病、皺縮病及輕型黃邊病等幾種主要病毒的染病株率達80.2%［1］。草莓植株本身沒有對病毒的免疫能力，目前又沒有特效藥劑或方法治愈病毒病，實現草莓無病毒栽培的唯一有效途徑就是脫除其植株中的病毒，獲得無病毒原種母株，大量繁育無病毒苗，不斷滿足生產需求。

1　草莓脫病毒技術

在草莓脫病毒中應用效果較好的方法有以下幾種。

1.1熱處理脫病毒

通過熱療途徑脫除植物體中的病毒，是1種脫病毒的經典方法。用熱療法（即熱處理）獲得無病毒植物材料至今已有100多年歷史，而以此技術獲得草莓無病毒植株只有40多年［2～3］。對熱處理脫除植株病毒的機理至今尚不完全清楚，但在草莓脫病毒的應用中效果普遍較好。（1）熱處理苗的準備：選擇品種純正、長勢健壯的當年生苗先行盆栽，栽后加強管理，經1～2月培養，盆栽苗見有新葉發生便可用于熱處理。（2）熱處理：一般在特定的培養箱或培養室中進行。所用培養室（箱）應有自動調溫、調濕及調光照裝置。盆栽苗進入處理室后澆足水，而后室溫逐漸升至38～40℃，保持3～8周。處理室濕度保持70%以上，光照強度保持3000～5000Lx，每d光照14～16h。熱處理的濕度和時間常因病毒種類不同而異。如草莓斑駁病毒在38℃下處理12～15d即可脫除，草莓鑲脈病毒則需在42℃下處理10～14d才能脫除，草莓皺縮病毒要在38℃連續處理50d以上才能獲得較好的脫除效果［4～7］。（3）脫病毒材料的繁殖與檢測：經熱處理獲得的植株還需適量繁殖，常用的繁殖方法主要有移栽、嫁接和組織培養繁殖。已經達到處理時間的草莓脫病毒盆栽苗在處理中會發出根蘗或芽，有根蘗苗可直接移栽于經過滅菌處理的營養土中，無根蘗苗或新芽可嫁接于準備好的草莓實生苗上。剪取在熱處理中長出新枝的莖尖0.5～1.0mm，接種于草莓莖尖分化培養基上培養，使之分化出多苗，再經過生根、移栽過程可獲得較多的移栽成活苗。繁殖苗均可檢測其脫病毒效果，從而選出無病毒的原種母株。

1.2莖尖培養脫病毒

草莓植株感染病毒后，病毒在其體內傳播，擴散迅速，很快遍及全株。但病毒在各器官、組織中分布并不均勻，其中莖尖和根尖組織往往不感染或很少感染病毒。切取0.1～0.5mm大小的莖尖分生組織進行組織培養繁殖，可獲得無病毒的原種母株。

（1）切取莖尖和接種培養：在草莓匍匐莖旺盛分生期剪取生長健壯的匐匍莖芽段1.0～1.5cm，經流水沖洗1～2h后轉至超凈工作臺上，先用70%酒精滅菌0.5～1.0min，再用升汞浸3～7min，最后用無菌水清洗3～5次（約5min）。切取0.2～0.3mm莖尖，接種于草莓誘導莖尖分化培養基上。草莓誘導莖尖分化培養基配方為MS+BA 1.0mg/L+IBA 0.1～0.2mg/L+ GA 0.1～0.2mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂4.0～8.0g/L，pH值5.6～5.8。莖尖接種后置于培養室中培養分化苗，培養室保持25～30℃氣溫、1500～2000Lx光照強度，每日光照12～14h。（2）增殖培養：分化培養20～30d后，莖尖分化出新芽并不斷生長、增殖而形成小芽叢。將分化產生的芽叢分割，每2～3芽切為1塊，接種于草莓增殖培養基上。增殖培養基配方為MS+BA 0.3～0.5mg/L+IBA 0.1mg/L+GA 0.1mg/L，蔗糖、瓊脂同分化培養基，培養條件也同分化培養。經過每周期20～30d的培養，多數草莓品種的增殖系數均可達到3～5。（3）生根培養及移栽：切取高2cm以上的分化苗，轉接于生根培養基上培養生根苗。生根培養基一般為1/2 MS+IBA 0.2～0.3mg/L+蔗糖15～20g/L，瓊脂及pH值同分化培養基。多數草莓品種經15～20d培養即可生出新根。為了提高移栽成活率，栽苗前還應煉苗5～7d，即將生根苗瓶置于光照強度超過5000Lx的溫室中，曬至苗色變深、苗勢強壯，取出生根苗，洗去培養基，栽于經過滅菌處理的營養土中。栽苗初期應注意遮光保濕，并保持20～25℃，栽苗成活率可超過80%。

1.3熱處理與莖尖培養相結合脫病毒

在草莓脫病毒技術的研究中發現，采用熱處理與莖尖培養相結合途徑能夠實現兩種脫病毒技術的效果互補，既能克服某些病毒（如草莓鑲脈病毒、草莓皺縮病毒等）因耐熱性強，需提高熱處理溫度或加長處理時間才能脫除病毒的問題，又能解決在莖尖培養脫病毒中接種莖尖要小于0.3mm（但小的莖尖難以分化出苗）才能穩定地脫除病毒的問題。

在相結合脫病毒操作中，先將生長旺盛的草莓盆栽苗進行38～40℃熱處理4～6周，而后取其在處理中長出的莖尖0.5～1.0mm進行接種培養。通過正常熱處理再取材接的種優于分化出苗的較大莖尖，多數草莓品種的脫病毒率可達到70%以上［8］。

1.4花藥培養脫病毒

近年來有大量研究和育苗實踐證明，花藥培養同樣有很好的脫病毒效果。在春季草莓現蕾期采集發育正常、花粉發育處于單核期花蕾，先將整個花蕾置于流水下沖洗1h左右，再轉至超凈工作臺上用70%酒精浸0.5min，再用0.1%升汞浸5～8min，用無菌水清洗3～5次，剝開花冠取出花藥接種于草莓花粉分化培養基上。培養基組成為MS+BA2.0mg/L+ KT2.0mg/L+IAA2.0mg/L+蔗糖30 g/L+瓊脂4～8g/L， pH值5.6～5.8。接種后置培養室中培養，經5～6周誘導出愈傷組織而后分化出分生苗。接種花藥分化出的分生苗經過增殖培養、生根培養，再移栽成活后便可進行病毒檢測，選出無病毒原種苗。

2　無病毒苗繁育技術

草莓生產用苗通過常規的匍匐莖埋壓繁殖，多數品種的年繁殖系數可達到20～50。但是草莓病毒病的傳播途徑較多，使得草莓無病毒苗的繁育受到較大限制。只有完全控制了草莓病毒的傳播源，才能確保無病毒苗的安全繁育。

2.1建立無病毒原種苗保存圃

對經過脫病毒處理又經檢測確認無病毒的草莓原種苗實行統一編號、集中栽植，建立草莓無病毒苗保存圃。保存圃應建立在有防蚜功能的網室中，防蚜網為200～300目。保存圃應土壤疏松、有機質含量高，灌排水設施齊全、方便，栽苗前土壤用五氯硝基苯或高壓蒸汽等消毒。保存圃周圍100m內不可栽培草莓，還應保持環境整潔，經常清除寄生蚜蟲的雜草，并噴藥治蚜。栽植草莓無病毒原種苗前施足底肥，根據土壤和用肥質量667m2施有機肥3000～5000kg、尿素15～20kg，耕翻耙細后筑1m× （10～15）m平畦（易積水地塊筑高畦），栽植株行距為40cm×80cm，667m2栽2000株左右。栽苗后需加強管理，促發匍匐莖并使其茁壯生長。

2.2建立無病毒生產苗繁育圃

苗圃主要提供生產用苗，栽植1代無病毒原種苗。生產苗繁育圃同樣要求有良好的土壤條件、完善的灌排水設施以及整潔的周圍環境。667m2施有機肥300～500kg，栽植株行距（40～50）cm×（70～80）cm。栽植成活后可噴赤霉素1～2次，促發匍匐莖。栽苗后加強肥水管理，及時中耕除草及防治病蟲害。

我國北方地區露地繁育草莓苗，一般在6月中下旬發生匍匐莖，發生高峰期在7月中旬～8月上旬，也是加速繁苗的關鍵時期，干旱時要及時澆水。新生的匍匐莖苗長到一定大小時應及時壓土、埋根露心，使其盡快長成壯苗。入秋后應控制匍匐莖大量發生，以促進前期發生的匍匐莖苗健壯、優質。

參考文章

［1］王國平，劉福昌，國際翔.我國草莓主栽區病毒種類的鑒定［J］.植物病理學報，1991，21（1）：9～4.

［2］廖俊杰，洪建源，鄧明琴.草莓熱處理脫病毒的研究初報［J］.北方果樹，1991（4）：5～9.

［3］苗洪芹，陳賢禎，吳和平.草莓熱處理脫毒技術研究初報［J］.植物保護，1992，18（3）：20～21.

［4］周厚成，何水濤.草莓病毒病研究進展［J］.果樹學報，2003，20（5）：421～426.

［5］王際軒.草莓的病毒病及無病毒苗繁殖［J］.北方果樹，2011（2）：44～47.

［6］王際軒.草莓的病毒病及無病毒苗繁殖（續）［J］.北方果樹，2011（3）：45～47.

［7］王莉，王際軒，楊艷敏，魏永祥，魏鑫.草莓脫病毒技術的研究與應用淺析［J］.落葉果樹，2012，44（3）：20～22.

［8］何歡樂，陽靜，蔡潤等.草莓莖尖培養脫毒效果研究［J］.北方園藝，2005（5）：79～81.

*通訊作者。