FISH和尿脫落細胞學檢查診斷上尿路上皮細胞癌效果比較

劉京生，劉桂華，唐健濱，趙倩，趙學英，金訊波（華北石油管理局總醫院，河北任丘0655；山東大學附屬省立醫院）

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FISH和尿脫落細胞學檢查診斷上尿路上皮細胞癌效果比較

劉京生1，劉桂華1，唐健濱1，趙倩1，趙學英1，金訊波2
（1華北石油管理局總醫院，河北任丘062552；2山東大學附屬省立醫院）

摘要：目的 比較熒光原位雜交（FISH）技術和尿脫落細胞學檢查診斷上尿路上皮細胞癌（UUT-UC）的效果。方法 收集59例疑似UUT-UC患者的尿液標本，用熒光標記的3、7、17號染色體著絲粒及9p21區帶探針進行FISH檢測，同時行尿脫落細胞學檢查。以術后病理檢查結果為金標準，計算FISH和尿脫落細胞學檢查診斷UUTUC的敏感度和特異度。結果 59例行FISH檢測的患者中，29例病理組織檢查確診為UUT-UC。FISH和細胞學的總體敏感度分別為68．9%、34．5%，P＜0．05。其中FISH和細胞學對于非肌層浸潤性腫瘤的敏感度分別為45．5%、18．2%，P＞0．05；肌層浸潤性腫瘤分別為83．3%、44．4%，P＜0．05。對低級別腫瘤分別為46．2%、23．1%，P＜0．05；高級別分別為87．5%、43．8%，P＜0．05。FISH和細胞學診斷UUT-UC的特異度分別是85．7%和90．5%，P＞0．05。結論 FISH診斷UUT-UC的敏感度高于尿脫落細胞學檢查，兩者特異度無明顯差異。

關鍵詞：上尿路上皮細胞癌；尿脫落細胞學；熒光原位雜交

上尿路上皮細胞癌（UUT-UC）是較為少見的惡性腫瘤，復發率高［1］，預后差。目前診斷上尿路腫瘤主要依靠影像學檢查，并輔以尿液脫落細胞學檢查和輸尿管鏡檢查。影像學檢查對小腫瘤（直徑＜5 mm）準確性很低；腎盂輸尿管鏡檢查雖然比較可靠，但有創檢查可造成并發癥或腫瘤轉移；細胞學檢查敏感度偏低。熒光原位雜交（FISH）技術可以檢測與尿路上皮細胞癌（UC）有關的4種染色體的改變，包括9p21基因位點的缺失和3、7、17號染色體的非整倍性，對復發性膀胱癌的診斷準確性較高［2，3］。UUT-UC患者的異常染色體組型與膀胱癌患者相似［4］。2009年9月～2014年8月，我們對59例疑似UUT-UC患者行FISH、尿脫落細胞學檢查，以術后病理檢查結果為金標準，比較兩種檢測方法的靈敏度和特異度。

1　資料與方法

1．1臨床資料 選擇31例影像學檢查疑似UUTUC患者，男31例、女28例，年齡25～82歲均接受手術治療，其中根治性腎輸尿管切除術18例，輸尿管部分切除術11例。術后病理結果證實1例為輸尿管炎性息肉，1例為輸尿管鱗狀細胞癌，余29例均為UUT-UC。臨床分期；pTis～pT1期（未浸潤肌層）11例，pT2～pT4期（浸潤肌層）18例；病理分級G1、G2級（低組別）13例，G3級（高級別）16例。

1．2FISH檢測方法 留取患者清晨初次尿液50 mL，離心去上清，加入膠原酶B于37℃中消化。用甲醇與冰醋酸（3∶1）的固定液固定。將細胞滴于玻片上，56℃老化玻片。將玻片用37℃胃蛋白酶溶液消化，2×SSC（pH 7．0）溶液漂洗，－20℃預冷的乙醇中脫水，自然干燥。玻片置（73±1）℃環境中變性，預冷乙醇脫水，用45～50℃烤片機上預熱。將探針混合物于（73±1）℃環境中變性后滴于玻片雜交區域，封片42℃過夜雜交。移去蓋玻片，用50%甲酰胺／2×SSC溶液洗滌，70%乙醇中脫水，暗處干燥玻片。用DAPI復染劑復染后，在熒光顯微鏡下觀察玻片。FISH DNA探針由北京金菩嘉公司提供，包括兩種組合：GLP P16／CSP17探針與CSP3／CSP7探針，熒光顯微鏡下均可見紅色與綠色兩種信號。GLP P16／CSP17探針常見異常類型為p16缺失或17號染色體非整倍性，CSP3／CSP7探針常見異常類型為3號及7號染色體非整倍性。正常細胞應為2紅／2綠，任意兩個以上位點（含兩個）出現異常，或一個位點有兩種以上（含兩種）異常，即可判斷為陽性。

1．3尿脫落細胞檢查方法 尿液細胞學檢查由2位病理學專家采用盲法完成。尿液標本與用于FISH檢測的標本同一天采集。

1．4統計學方法 采用SPSS13．0統計軟件。數據比較采用χ2檢驗。P＜0．05為差異有統計學意義。

2　結果

FISH、尿脫落細胞學檢查診斷UUT-UC的敏感度分別為68．9%（20／29）、34．5%（10／29），P＜0．05。二者診斷未浸潤肌層UUT-UC的敏感度分別為45．5%（5／11）、18．2%（2／11），P＞0．05；診斷浸潤肌層的UUT-UC的敏感度分別為83．3%（15／18）、44．4%（8／18），P＜0．05。二者診斷病理分級低級別UUT-UC的敏感度分別為46．2%（6／13）、23．1%（3／13），P＞0．05；診斷病理分級高級別UUT-UC的敏感度分別為87．5%（14／16）、43．8% （7／16），P＜0．05。二者診斷UUT-UC的特異度分別為85．7%（18／21）、90．5%（19／21），P＞0．05。

3　討論

影像學檢查聯合尿脫落細胞學檢查或輸尿管鏡檢查是常用的診斷UUT-UC的方法。但是，這些輔助檢查均有其自身的局限性。尿脫落細胞學檢查敏感度僅為35%～50%［5，6］。輸尿管插管沖洗可以提高尿脫落細胞學檢查的敏感度，但假陰性率仍高達39%［5］，而且有一定創傷性［7］。在輸尿管鏡輔助下行組織活檢診斷UUT-UC正確率可達90%，但有創檢查可引起嚴重的并發癥（輸尿管穿孔、斷裂、狹窄或腫瘤細胞外漏、種植），檢測原位癌時敏感度也很低。文獻報道，FISH診斷膀胱UC的靈敏度高于尿脫落細胞學檢查，但特異度無明顯差別［8，9］。本研究結果顯示，FISH診斷UUT-UC敏感度高于尿脫落細胞學檢查，但特異度相似，同國外研究結果基本一致［10～12］。盡管FISH檢測未浸潤肌層和低級別UUT-UC的敏感度似乎好于尿脫落細胞學，但差異無統計學意義。可能與此組病例的數量較少有關。

綜上所述，在診斷UUT-UC時，當影像學檢查陽性或可疑而細胞學檢查結果陰性或無法確定時，可用FISH作為補充檢查，也許可以避免應用侵襲性的檢查技術。對于影像學檢查為陽性但細胞學和FISH檢查為陰性的病例，內鏡檢查仍是必須的。由于國人與西方人膀胱癌的3、16、18號染色體雜合子缺失頻率存在統計學上差異［14，15］，因此3、7、17號染色體和9p21探針是否是檢測國人UUT-UC的最佳組合，仍需進一步研究。

參考文獻：

［1］Ho KL，Chow GK．Ureteroscopic resection of upper-tract transitional-cell carcinoma［J］．J Endourol，2005，19（7）：841-848．

［2］Sarosdy MF，Kahn PR，Ziffer MD，et al．Use of a multitarget fluorescence in situ hybridization assay to diagnose bladder cancer in patients with hematuria［J］．J Urol，2006，176（1）：44-47．

［3］Halling KC，King W，Sokolova IA，et al．A comparison of cytology and fluorescence in situ hybridization for the detection of urothelial carcinoma［J］．J Urol，2000，164（5）：1768-1775．

［4］Fadl-Elmula I，Gorunova L，Mandahl N，et al．Cytogenetic analysis of upper urinary tract transitional cell carcinomas［J］．Cancer Genet Cytogenet，1999，115（2）：123-127．

［5］Guarnizo E，Pavlovich CP，Seiba M，et al．Ureteroscopic biopsy of upper tract urothelial carcinoma：improved diagnostic accuracy and histopathological considerations using a multi-biopsy approach［J］．J Urol，2000，163（1）：52-55．

［6］Lodde M，Mian C，Wiener H，et al．Detection of upper urinary tract transitional cell carcinoma with Immunocyt：a preliminary report［J］．Urology，2001，58（3）：362-366．

［7］Highman WJ．Transitional carcinoma of the upper urinary tract：a histological and cytopathological study［J］．J Clin Pathol，1986，39（3）：297-305．

［8］Marin-Aguilera M，Mengual L，Ribal MJ，et al．Utility of a multiprobe fluorescence in situ hybridization assay in the detection of superficial urothelial bladder cancer［J］．Cancer Genet Cytogenet，2007，173（2）：131-135．

［9］Laudadio J，Keane TE，Reeves HM，et al．Fluorescence in situ hybridization for detecting transitional cell carcinoma：implications for clinical practice［J］．BJU Intl，2005，96（9）：1280-1285．

［10］Chen AA，Grasso M．Is there a role for FISH in the management and surveillance of patients with upper tract transitional-cell carcinoma［J］．J Endourol，2008，22（6）：1371-1374．

［11］Akkad T，Brunner A，Pallwein L，et al．Fluorescence in situ hybridization for detecting upper urinary tract tumors--a preliminary report［J］．Urology，2007，70（4）：753-757．

［12］Marín-Aguilera M，Mengual L，Ribal MJ，et al．Utility of fluorescence in situ hybridization as a non-invasive technique in the diagnosis of upper urinary tract urothelial carcinoma［J］．Eur Urol，2007，51（2）：409-415．

［13］Van Rhijn BW，van der Poel HG，van der Kwast TH．Urine markers for bladder cancer surveillance：a systematic review［J］．Eur Urol，2005，47（6）：736-748．

［14］Zhang J，Zheng S，Gao Y，et al．A partial allelotyping of urothelial carcinoma of bladder in the Chinese［J］．Carcinogenesis，2004，25（3）：343-347．

［15］Qin S L，Chen X J，Xu X，et al．Detection of chromosomal alterations in bladder transitional cell carcinomas from Northern China by comparative genomic hybridization［J］．Cancer Lett，2006，238 （2）：230-239．

收稿日期：（2015-04-28）

通信作者：金訊波（E-mail：16365451＠qq．com）

中圖分類號：R737．5

文獻標志碼：B

文章編號：1002-266X（2016）02-0066-02

doi：10．3969／j．issn．1002-266X．2016．02．028