正交試驗優化檳榔免煎顆粒提取工藝

倫志彩　　隋　瑩　　徐　剛　　胡朝奇　　徐會丹　　陳　新.山東省莒縣中醫院藥劑科，山東日照　76800；.長春中醫藥大學藥學院，吉林長春07；.蕪湖先聲中人藥業有限公司質量管理部，安徽蕪湖　080；.蕪湖綠葉制藥有限公司生產技術部，安徽蕪湖　000

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正交試驗優化檳榔免煎顆粒提取工藝

倫志彩1隋瑩2徐剛3胡朝奇3徐會丹4陳新2
1.山東省莒縣中醫院藥劑科，山東日照276800；2.長春中醫藥大學藥學院，吉林長春130117；
3.蕪湖先聲中人藥業有限公司質量管理部，安徽蕪湖241080；4.蕪湖綠葉制藥有限公司生產技術部，安徽蕪湖241000

[摘要]目的優選檳榔免煎顆粒提取工藝。方法以出膏率和檳榔堿含量為指標，采用正交試驗和單因素試驗考察檳榔藥材浸泡時間、固液比、提取時間、提取次數對檳榔提取工藝的影響，通過高效液相色譜法測定檳榔堿的含量，SCX-強陽離子交換樹脂柱（4.6mm×250mm，5μm）；乙腈-磷酸溶液（2→1000）（70∶30），檢測波長為215 nm，流速1mL/min，進樣量10μL。結果檳榔免煎顆粒的最優提取工藝為藥材浸泡2 h，加6倍量水，1 h/次，煎煮2次；平均出膏率為22.69%（RSD為1.67%），檳榔堿平均含量為4.63mg/g（RSD為1.82%）。結論優選的提取工藝穩定、可行，為檳榔免煎顆粒的開發提供了實驗基礎。

[關鍵詞]檳榔曰免煎顆粒曰正交試驗曰提取工藝曰單因素分析

檳榔為棕櫚科（Palmaceae）檳榔屬常綠喬木的干燥成熟種子，收載于《名醫別錄》，檳榔具有行氣利水、驅蟲消積的功效[1]，臨床應用較為廣泛，傳統檳榔臨床應用多入湯劑，但是中藥湯劑由于攜帶不便、不易儲存等弊端已無法滿足現代人們的需要，因此中藥丸劑、片劑等新劑型逐步應用于臨床，雖然這些新劑型改善了傳統湯劑攜帶不便、不易儲存的弊端，但是臨床應用發現，新劑型的臨床療效較傳統湯劑較差，基于此，部分藥學工作者提出了中藥免煎顆粒，即以傳統中藥飲片作為原料，經過現代提取、干燥、制粒、包裝所制成的顆粒劑。中藥免煎顆粒具有傳統中藥成分、性味、歸經、功能主治的全部特點[2]，且方便攜帶、易于保存，同時也可將不同的免煎顆粒組方隨證加減，體現中藥“多組分、整體治療”的特點?；诖耍敬窝芯坎捎谜辉囼炘O計進行檳榔免煎顆粒提取工藝研究，以為檳榔免煎顆粒的開發提供實驗基礎，現報道如下：

1　儀器與材料

LC-15C型高效液相色譜儀（日本島津公司），HX-400A高速中藥粉碎機（浙江省永康市溪岸五金藥具廠），PB303-SMETTLER TOLEDO天平[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司]，DZF-6050真空干燥箱（上海一恒科技有限公司），氫溴酸檳榔堿對照品（中國藥品生物制品檢定所；批號：120541-201304），乙腈為色譜純，其他試劑為分析純，檳榔果購于海南霖甘源食品有限公司，經長春中醫藥大學中藥鑒定教研室姜大成教授鑒定為棕櫚科（Palmae）植物檳榔（Areca catechu L.）的干燥果皮及干燥成熟種子。

2　方法與結果

2.1方法學考案

2.1.1色譜條件SCX-強陽離子交換樹脂柱（4.6mm× 250 mm，5μm）；流動相乙腈-磷酸溶液（2→1000）（70∶30）（濃氨試液調節pH值至3.8）；檢測波長為215 nm，流速1 mL/min，進樣量10μL，理論板數按檳榔堿峰計算應不低于3000[3]。檳榔供試品、對照品溶液HPLC色譜圖見圖1。

圖1　各溶液的高效液相色譜圖

2.1.2供試品溶液的制備精密稱定過5號篩檳榔細粉0.3 g，置具塞錐形瓶中，先加入50 mL乙醚，再加入3mL碳酸鹽緩沖液（1.91 g碳酸鈉+0.56 g碳酸氫鈉→100mL），室溫放置30min，振搖；加熱回流30min，取乙醚液，置于盛有1mL磷酸溶液（5→1000）的蒸發皿中，蒸干，殘渣加乙醚加熱回流提取2次（30mL和20 mL），15 min/次，合并提取液，揮散溶劑，殘渣加50%乙腈溶液溶解，并轉移至25 mL量瓶中，加50%乙腈稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

2.1.3對照品溶液的制備精密稱定氫溴酸檳榔堿對照品5mg，置于10 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液儲備液，精密量取對照品溶液儲備液1 mL，置于5 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（檳榔堿重量=氫溴酸檳榔堿重量/1.5214）。

2.1.4線性關系考察精密量取對照品溶液儲備液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL置于10mL量瓶中，加50%乙腈稀釋至刻度，搖勻，即得不同濃度對照品溶液，按“2.1.1”項下色譜條件，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以對照品溶液濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，得線性方程Y=18969 X+1283（r=0.9998），說明氫溴酸檳榔堿在0.025～1.250 mg/mL范圍內線性關系良好。

2.1.5精密度試驗精密量取對照品溶液10μL，按照“2.1.1”項下色譜條件，連續進樣6次，記錄色譜圖，峰面積的RSD為1.13%，說明儀器精密度良好。

2.1.6溶液穩定性考察精密量取對照品溶液10μL，分別于對照品溶液制備后的0、1、2、3、6、12 h，按“2.1.1”項下色譜條件，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結果峰面積RSD為1.69%，說明氫溴酸檳榔堿對照品溶液在制備后12 h內性質穩定。

2.1.7重復性試驗按照“2.1.2”項下供試品制備方法分別制備6份供試品，按照“2.1.1”項下色譜條件分別注入供試品溶液和對照品溶液各10μL，計算供試品中檳榔堿含量，結果6份供試品溶液中檳榔堿含量的RSD為1.82%，檳榔堿的平均含量為4.52mg/g，說明該方法重復性良好。

2.1.8回收率試驗依次精密稱定0.12、0.15、0.18 g檳榔細粉各3份，分別置于具塞錐形瓶中，分別向裝有0.12 g檳榔細粉的3個錐形瓶中各加入4.12mg氫溴酸檳榔堿對照品，向裝有0.15 g檳榔細粉的3個錐形瓶中各加入3.43 mg氫溴酸檳榔堿對照品，向裝有0.18 g檳榔細粉的3個錐形瓶中各加入2.74mg氫溴酸檳榔堿對照品，按照“2.1.2”項下方法分別制備9份供試品溶液，按“2.1.1”項下色譜條件測定檳榔堿含量，結果平均回收率為98.94%，RSD為1.95%，說明方法準確性良好。

2.2檳榔免煎顆粒提取方法考察

2.2.1藥材浸泡時間及藥材吸水率的單因素考察取檳榔飲片100 g，加5倍量水浸泡，分別于浸泡后30、60、90、120、150、180min觀察一次藥材浸透的情況，直至全部浸透，濾出全部未被吸收的水液，稱取藥材濕重，計算平均吸水率，其公式為：吸水率（%）=[（藥材濕重-藥材量）/藥材量]×100%，試驗結果表明，檳榔飲片在浸泡120min以后，吸水率不會顯著升高，吸水率為93%左右，由此確定，提取檳榔飲片的第1次加水量追加1倍，并在首次加熱提取之前先浸泡2 h。見表1。

表1　浸泡時間與藥材吸水率單因素考察結果（%）

2.2.2檳榔提取工藝考察選取固液比、煎煮時間、煎煮次數為考察因素，以出膏率、檳榔堿含量作為考察指標，采用L9（34）正交表進行試驗[4]，綜合評分（%）=（出膏率i/出膏率max）×30%+（檳榔堿i/檳榔堿max）×70%。方差分析結果顯示，各因素對實驗結果影響的重要性依次為A＞C＞B，即加水量A和煎煮次數C是主要影響因素，煎煮時間B對實驗結果無顯著性影響，結合直觀分析結果和從實際實驗效率角度進行考慮，A2B1C2為最佳提取工藝，即，藥材浸泡2 h，加6倍量水（含之前浸泡藥材時加1倍量水），煎煮1 h，趁熱濾過；第2次加水5倍量，煎煮1 h，趁熱濾過，合并濾液。因素水平見表2，試驗安排及結果見表3，方差分析見表4。

表2　因素水平表

2.3驗證試驗

按照最優提取工藝分別提取3份檳榔提取液，結果平均出膏率為22.69%（RSD為1.67%），檳榔堿平均含量為4.63mg/g（RSD為1.82%），說明優選的工藝穩定、可靠。

表3　正交試驗L 9（3 4）試驗安排及直觀結果

表4　方差分析結果

3　討論

檳榔為檳榔成熟的干燥種子，研究發現，檳榔具有胃腸道促進、解熱、鎮痛、消炎和抗腫瘤的作用，在臨床多種疾病的治療上應用較為廣泛[6-9]，因此如何有效地提高檳榔中藥效物質的提取率，對于檳榔相關產品的開發具有重要意義。由于檳榔藥材質地較為堅硬，為了提高檳榔中有效成分的提取效果，提取前應對原藥材進行充分地浸泡，從而有效地減低藥材細胞中有效成分的濃度、降低細胞內的滲透壓[10-12]，從而有利于提取有效成分。本次研究通過對考察不同時間原藥材吸水率發現，120min時原藥材的吸水率達到最高（93.43%），提示檳榔藥材適宜的浸泡條件為加1倍量水，浸泡2 h，此時檳榔藥材細胞中水分吸收充分，滲透壓最低，有利于提取。生物堿是檳榔中的重要藥效物質，現代藥理學研究發現[13-15]，中藥中的檳榔堿具有顯著的驅蟲效果，尤其對于絳蟲，驅蟲效果最為顯著，同時還具有一定的擬膽堿作用，本次進行工藝優選的過程中，使用檳榔堿和出膏率作為指標，一方面是對提取物的藥效進行評價，另一方面是對制粒的產率進行初步評價[16]，通過使用L9（34）正交試驗，得出最優工藝為“藥材浸泡2 h，加6倍量水（含之前浸泡藥材加1倍量水），煎煮1 h，趁熱濾過；第二次加水5倍量，煎煮1 h，趁熱濾過，合并濾液”，此工藝條件下提取物中檳榔堿的含量最高，且出膏率最大，是檳榔免煎顆粒的理想提取工藝，可為檳榔免煎顆粒大生產提供一定參考。

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Optim ization of extraction process for boil-free granule of areca catechu

LUN Zhicai1SUIYing2XU Gang3HU Chaoqi3XU Huidan4CHEN Xin2
1.Departmentof Pharmacy,Juxian Hospital of Traditional Chinese Medicine,Shandong Province,Rizhao 276800,China;2.School of Pharmaceutical Sciences,Changchun University of Chinese Medicine,Jilin Province,Changchun 130117,China;3.Quality Management Department,Wuhu Simcere Sino-implant Pharmaceutical Co.Ltd.,Anhui Province,Wuhu 241080,China;4.Production Technology Department,Wuhu LUYE Pharmaceutical Co.Ltd.,Anhui Province,Wuhu 241000,China

[Abstract]Objective To optimize extraction process for boil-free granule of areca catechu.M ethods With the extraction amount and content of arecoline as indexes,single factor analysismethod was used to develop soak time of areca catechu,and effects of ratio of solid-liquid,extraction times,extraction quantity on extraction technology were investigated by orthogonal test.The content of arecoline was determined by HPLC,SCX-strong cation chromatographic column(4.6mm×250mm,5μm),acetonitrile-phosphoric acid(2→1000)(70∶30),λ=215 nm,v=1mL/min,sample quantity was 10μL.Results The best extraction process for boil-free granule of areca catechu was as following,soak time was 2 h,ratio of solid-liquid was 6∶1,extraction time was 1 h,extraction quantity was 1.Average extraction rate was 22.69%(RSD=1.67%),average content of arecoline was 4.63mg/g(RSD=1.82%).Conclusion This optimized extraction process is stable and feasible,which can provide experimental basis for development of areca catechu boilfree granule.

[Key words]Areca catechu;Boil-free granule;Orthogonal test;Extraction process;Single factor analysis

收稿日期：（2015-10-03本文編輯：趙魯楓）

[通訊作者]陳新（1965.5-），女，教授，長春中醫藥大學中藥化學教研室主任；研究方向：中藥藥效物質基礎開發與利用。

[基金項目]吉林省中醫藥管理局項目（2010-pt011）；安徽省蕪湖市科技惠民計劃項目（2013hm43）。

[中圖分類號]R927.1

[文獻標識碼]A

[文章編號]1673-7210（2016）01（a）-0043-04