飼料膽固醇對軍曹魚幼魚生長、血液生化指標及脂代謝的影響

陳　強，劉泓宇，譚北平，董曉慧，遲淑艷，楊奇慧，章　雙（廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，廣東　湛江　524088）

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飼料膽固醇對軍曹魚幼魚生長、血液生化指標及脂代謝的影響

陳強，劉泓宇，譚北平，董曉慧，遲淑艷，楊奇慧，章雙
（廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，廣東湛江524088）

摘要：在以豆粕、酪蛋白、魚粉（質(zhì)量分數(shù)分別為33%、17%、15%）為蛋白源的基礎(chǔ)飼料中分別添加質(zhì)量分數(shù)0、0.4%、0.8%、1.2%、1.5%和2.0%的膽固醇，制成6種等氮等能飼料，養(yǎng)殖初始體質(zhì)量為（24.00±0.19）g的軍曹魚幼魚（Rachycentron canadum）8周，研究膽固醇對其生長、體成分、血液生化指標和脂代謝相關(guān)酶活性的影響。結(jié)果表明：添加低水平膽固醇對軍曹魚生長有改善作用，而高水平膽固醇對生長有抑制作用，與對照組比較，增重率（WGR）（P ＞ 0.05）、成活率（SR）（P ＜ 0.05）、飼料系數(shù)（FCR）（P ＞ 0.05）在0.4%組較佳，隨添加量的增加，各組幼魚有增重率、成活率降低，飼料系數(shù)增大趨勢。幼魚肝體比、臟體比、肝臟病變率有增大趨勢。添加膽固醇后，全魚、肝臟和肌肉中粗脂肪0－0.4%組有上升趨勢，0.4%－2.0%組有下降趨勢；魚體粗蛋白有上升趨勢，肝臟中膽固醇有先降后升趨勢，但水分和灰分的變化不大（P ＞ 0.05）。血清中總膽固醇（TC）、低密度膽固醇（LDL-C）有上升趨勢。肝臟中激素敏感性脂肪酶（HSL）有先升后降趨勢。在以豆粕為主要蛋白源的飼料中添加少量膽固醇（0.4%組）可一定程度上改善軍曹魚幼魚生長，影響機體脂代謝，但過多添加會抑制生長，并造成肝臟病變。以SR為判據(jù)，飼料中軍曹魚對膽固醇最適需要量為0.566%。

關(guān)鍵詞：軍曹魚；膽固醇；生長性能；體成分；脂代謝

軍曹魚（Rachycentron canadum）隸屬鱸形目鱸亞目軍曹魚科軍曹魚屬（Rachycentron），俗稱海鱺、海龍魚，具有生長快、抗病力強、產(chǎn)量高、肉厚質(zhì)細、味鮮美且無細棘骨等特點[1]，已逐漸成為南方海水養(yǎng)殖的主要經(jīng)濟品種之一。近年來，由于野生漁業(yè)資源不斷減少以及飼料中魚粉用量不斷擴大，魚粉價格逐年攀升，因此來源廣泛、價格低廉的植物蛋白替代魚粉研究成為水產(chǎn)營養(yǎng)學(xué)的研究熱點。在軍曹魚飼料中，已有學(xué)者對植物蛋白替代魚粉進行研究，認為植物蛋白可部分替代魚粉，替代量過高會對其生長產(chǎn)生不利影響[2-4]，原因之一是因為魚粉中含有植物蛋白缺乏的牛磺酸、膽固醇等功能性營養(yǎng)物質(zhì)[5]。豆粕等植物蛋白替代魚粉常導(dǎo)致魚類血液和肌肉膽固醇水平下降[6]。膽固醇是細胞膜重要組成部分[7]，也是體內(nèi)膽汁酸以及腎上腺皮質(zhì)素、維生素D等的合成前體[8]。魚類等多數(shù)脊椎動物可自身合成膽固醇，通常認為膽固醇是魚類非必需營養(yǎng)物質(zhì)，因而較少關(guān)注膽固醇對魚類的營養(yǎng)作用[9-10]。但在植物蛋白替代魚粉條件下，膽固醇對軍曹魚等魚類的營養(yǎng)作用可能極為重要。

目前，學(xué)界已對多種經(jīng)濟魚類開展飼料膽固醇對其生長及代謝影響的研究。Yun等[11]發(fā)現(xiàn)，在魚粉和豆粕質(zhì)量分數(shù)分別為14.5%和42%的基礎(chǔ)飼料中添加質(zhì)量分數(shù)1%膽固醇（飼料含質(zhì)量分數(shù)1.25%的膽固醇），可顯著促進大菱鲆（Scophthalmus maximus）幼魚的攝食和生長。Deng等[12]分別在以魚粉、魚肉濃縮蛋白、大豆分離蛋白和大豆?jié)饪s蛋白為蛋白源的飼料中添加質(zhì)量分數(shù)1%的膽固醇，飼喂牙鲆（Paralichthys olivaceus）幼魚，發(fā)現(xiàn)大豆分離蛋白添加組顯著促進牙鲆幼魚的攝食和生長，而在魚肉濃縮蛋白中添加組顯著降低牙鲆幼魚的攝食和生長。陳京華[13]研究發(fā)現(xiàn)，在以豆粕替代45%魚粉的飼料中，添加質(zhì)量分數(shù)1%的膽固醇可顯著促進牙鲆幼魚的攝食和生長。Twibell等[14]認為，在豆粕質(zhì)量分數(shù)55.5%的飼料中添加質(zhì)量分數(shù)1%的膽固醇可顯著促進斑點叉尾鮰（Ietalurus punetaus）幼魚的攝食和生長。而Bjerkeng等[15]研究認為，在主要以魚粉為蛋白源的飼料中添加質(zhì)量分數(shù)1%膽固醇對大西洋鮭（Salmo salar）的生長并無顯著影響。Sealey[16]也認為，在以魚粉為主要蛋白源的飼料中添加質(zhì)量分數(shù)1%的膽固醇對雜交條紋鱸（Morone chrysops × M.saxatilis）的攝食和生長無顯著影響。駱藝文[17]亦發(fā)現(xiàn)，在以玉米蛋白粉、魚粉質(zhì)量分數(shù)分別為40%、16.8%的飼料中添加質(zhì)量分數(shù)1%的膽固醇，對軍曹魚[初始體質(zhì)量（108 ± 0.3）g]的生長、存活、飼料利用等均無顯著促進作用。為研究植物蛋白替代魚粉條件下膽固醇對軍曹魚的營養(yǎng)作用，筆者在以去皮豆粕、酪蛋白、魚粉為蛋白源的基礎(chǔ)飼料中添加不同水平的膽固醇，研究膽固醇對軍曹魚幼魚生長、體成分、血液生化指標和脂肪代謝相關(guān)酶活力的影響，探討軍曹魚幼魚對膽固醇的需要量，為高效環(huán)保飼料的研究與開發(fā)提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1　材料與方法

1.1實驗飼料

以去皮豆粕、酪蛋白（甘肅華羚）及俄羅斯白魚粉為主要蛋白源，玉米淀粉為糖源，玉米油、魚油和卵磷脂為脂肪源制成基礎(chǔ)飼料，其組成及營養(yǎng)水平見表1。在基礎(chǔ)飼料中分別添加質(zhì)量分數(shù)0、0.4%、0.8%、1.2%、1.6%和2.0%的膽固醇（國藥集團，純度大于99.5%），制備6組實驗飼料。用反相高效液相法測定各組飼料（以干物質(zhì)計）中膽固醇實際質(zhì)量分數(shù)依次為0.28%、0.70%、1.08%、1.47%、1.86%和2.27%。對照組背景值為0.28%，飼料原料粉碎，過孔徑250 μm的篩，按配方比例準確稱重后混勻，攪拌15 min，少量組分采用逐級擴大法混合，然后加入魚油、玉米油和卵磷脂，混勻，過孔徑380 μm的篩，加入氯化膽堿和磷酸二氫鈣，繼續(xù)攪拌 15 min，壓制成粒徑3.0 mm 的顆粒飼料，風(fēng)干后用封口袋編號分裝，于- 20℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2實驗動物和飼養(yǎng)管理

實驗用軍曹魚購自海南省瓊海市，為當年人工培育的同一批苗種。養(yǎng)殖實驗在廣東省湛江市南三島近海浮式網(wǎng)箱中進行。正式實驗前，軍曹魚于4.5 m×4.5 m×3.0 m網(wǎng)箱中用商業(yè)飼料飽食投喂，暫養(yǎng)至體質(zhì)量為（24.00±0.19）g。實驗分為6組，每組3個重復(fù)組，于1.4 m×1.9 m×2.5 m網(wǎng)箱中進行。挑選540尾健康無病、規(guī)格一致、活力較好的實驗魚，隨機分配到網(wǎng)箱中，每網(wǎng)箱30尾，養(yǎng)殖8周，每天按體質(zhì)量6%～8%投食2次（9:00和17:00），每5 d刷網(wǎng)1次，每15 d換網(wǎng)1次，海水鹽度25 ～30，水溫29.0～32.5℃，溶氧大于5 mg/L。

表1　飼料原料及營養(yǎng)物質(zhì)（風(fēng)干基礎(chǔ)）質(zhì)量分數(shù)Table 1　Mass fraction of ingredients and nutrients of diet(air-dry basis)　　　　　%

1.3樣品采集和測定

養(yǎng)殖實驗結(jié)束時，每網(wǎng)箱隨機取魚20尾，5尾用作全魚體成分分析，15尾經(jīng)尾靜脈采血，血樣在4℃冰箱靜置5 h后，于4℃、4 500 r /min條件下離心15 min，制備血清。血清置于-20℃下保存待分析。取抽血后魚10尾立即解剖，觀察統(tǒng)計肝臟病變數(shù)。分別取肝臟、肌肉（第 1根背鰭至最后 1根背鰭之間，側(cè)線以上白肌）于防凍管，立即放入液氮罐中，取樣結(jié)束后再放入-80℃冰箱中，待測。

血清中總膽固醇、甘油三酯、高密度膽固醇、低密度膽固醇、血糖均用威特曼生物有限公司試劑，采用全自動生化分析儀（日立7600-110型）測定。血清甘膽酸（CG）、胰島素（INS）委托北京北方生物技術(shù)研究所有限公司檢測。肝臟脂蛋白脂酶（LPL）活性、肝脂酶（HL）活性均采用南京建成生物工程研究所的試劑盒，按說明書方法測定，其活力單位定義為每克肝胰臟每小時產(chǎn)生 1 μmol的游離脂肪酸為1個酶活性單位。肝臟激素敏感性脂肪酶（HSL）采用上海越研生物科技有限公司ELISA試劑盒測定，膽固醇7α-羥化酶（CYP7A1）采用北京冬歌生物有限公司ELISA試劑盒測定，步驟按說明書進行。飼料及肝臟膽固醇根據(jù)GB/T 22220-2008，結(jié)合李靜[18]方法檢測。稱取樣品約1 g 于50 mL離心管中，加入1 mL 600 mg/mL氫氧化鉀溶液及3 mL無水乙醇，輕輕混勻，于超聲波震蕩器中水浴皂化30 min（溫度65℃，功率300 W，頻率40 kHz），在皂化液中加入10 mL石油醚，振蕩混勻，用超聲波輔助提取10 min，以轉(zhuǎn)速4 000 r/min離心5 min，精確移取5 mL上層石油醚，用蒸餾水洗滌直至中性，用無水Na2SO4脫水，轉(zhuǎn)移至10 mL小燒杯，氮氣吹干，用5 mL 色譜純甲醇溶解，經(jīng)0.45 μm 濾膜過濾后，作為HPLC 分析樣品。根據(jù)標準曲線求出樣品膽固醇含量。

水分測定用105℃烘干恒重法（GB/T 6435-2014），粗蛋白測定用凱氏定氮法（GB 6432-1994），粗脂肪測定采用索氏提取法（GB/T 6433-2006），灰分測定采用高溫灼燒法（GB/T 6438-2007）。

1.4主要計算公式

增重率（WGR）=100%×（終末體質(zhì)量-初始體質(zhì)量 + 死亡體質(zhì)量）/初始體質(zhì)量；

飼料系數(shù)（FCR）=攝食量 /（終末體質(zhì)量-初始體質(zhì)量 + 死亡體質(zhì)量）；

臟體比（VSI）=內(nèi)臟團質(zhì)量/魚體質(zhì)量×100%；

肝體比（HSI）=肝臟質(zhì)量/魚體質(zhì)量×100%；

肝臟病變率=病變肝臟數(shù)/取樣肝臟數(shù)×100%。

1.5數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析

數(shù)據(jù)以平均值±標準誤表示，用SPSS17.0軟件先對數(shù)據(jù)做單因素方差分析，再進行Duncan多重比較。P＜0.05時，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié) 果

2.1飼料膽固醇含量對軍曹魚生長和形態(tài)學(xué)指標的影響

由表2可知，實驗魚的生長隨飼料中膽固醇水平的增加沒有得到顯著改善，添加過高會抑制其生長。增重率0.4%組高于對照組，但無統(tǒng)計學(xué)意義（P ＞0.05），其他組隨添加量的增加呈下降趨勢，1.2% －2.0%組均低于對照組（P＜0.05）。成活率0.4%組顯著高于對照組（P＜0.05），0.4%至2.0%組總體呈下降趨勢，2.0%組顯著小于對照組（P＜0.05）。飼料系數(shù)呈上升趨勢，除0.4%組（P＞0.05）外，其余添加組均高于對照組（P＜0.05）。

隨膽固醇添加量的增加，臟體比呈現(xiàn)上升趨勢，各添加組均高于對照組（P＜0.05）。肝體比亦呈上升趨勢，1.2%－2.0%組高于對照組（P＜0.05）。肝臟病變率隨添加量的增多而上升，1.2%－2.0%組高于對照組（P＜0.05）。

表2　飼料膽固醇含量對軍曹魚生長性能和和形態(tài)學(xué)指標的影響Table 2　Effects of dietary cholesterol on growth performance and morphology index in the cobia

以飼料中膽固醇的水平與成活率作二次方曲線擬合，得?y=-8.879 x2+ 10.051 x + 89.101，R2=0.796 2，通過計算求得軍曹魚獲得最佳的生長效果時飼料中膽固醇質(zhì)量分數(shù)為0.566%（圖1）。

2.2飼料膽固醇水平對軍曹魚全魚常規(guī)成分和肝臟膽固醇、粗脂肪以及肌肉粗脂肪含量的影響

由表3可知，飼料中添加膽固醇對全魚體水分和粗灰分影響無統(tǒng)計學(xué)意義，隨添加量的增加，粗蛋白呈上升趨勢，2.0%組高于對照組（P＜0.05）。魚體粗脂肪，0.4%組高于對照組（P＜0.05），隨膽固醇添加量的增加呈降低趨勢，1.2%、2.0%組低于對照組（P＜0.05）。肝臟中粗脂肪呈下降趨勢，0.8% －2.0%組低于對照組（P＜0.05），肌肉中粗脂肪在添加組呈下降趨勢，0.4%組高于對照組及其余各組（P＜0.05），1.6%和2.0%組低于對照組（P＜0.05）。肝臟中膽固醇含量隨飼料添加量的增加呈先降后升趨勢，0.4%組低于對照組，0.8%－2.0%組高于對照組（P＜0.05）。

2.3飼料膽固醇水平對軍曹魚血清生化指標的影響

由表4可知，血清中總膽固醇（TC）含量0.8%、1.2%組高于對照組（P＜0.05），其余各組與對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。低密度膽固醇（LDL-C）1.6%、2.0%組顯著高于對照組（P ＜0.05），高密度膽固醇（HDL-C）各添加組與對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），高、低密度膽固醇的比值c(HDL-C)/c(LDL-C)在添加組呈下降趨勢，1.2%、1.6%、2.0%組低于對照組（P＜0.05）。甘油三酯（TG）各添加組與對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P ＞0.05）。血清中甘膽酸（CG）的含量呈先上升后下降趨勢，0.8%組最高，各添加組均高于對照組（P ＜0.05）。

圖1　膽固醇對軍曹魚幼魚成活率的影響Fig.1　Effect of dietary cholesterol levels on survival ratio of juvenile cobia

表3　飼料膽固醇水平對軍曹魚全魚體常規(guī)和肝臟膽固醇、粗脂肪以及肌肉粗脂肪含量的影響Table 3　Effect of dietary cholesterol level on body composition and cholesterol accumulation in liver and contents of crude fat in liver and muscle in the cobia　　　　　　　　　%

表4　飼料中膽固醇水平對軍曹魚血清生化指標的影響Table 4　Effect of dietary cholesterol level on plasma biochemical index of cobia.

2.4飼料中膽固醇含量對肝臟中脂質(zhì)代謝相關(guān)酶活力的影響

表5可知，隨飼料中膽固醇含量的增加，各添加組肝臟中激素敏感性脂肪酶（HSL）與對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。肝酯酶（HL）變化趨勢不明顯，其中0.4%、2.0%組高于對照組，其余各組均低于對照組（P＜0.05）。脂蛋白酯酶（LPL）整體為上升趨勢，2.0%組最高，各添加組均高于對照組（P＜0.05）。膽固醇7α-羥化酶（Cyp7a1）呈先升后降趨勢，0.4%－1.2%組上升，1.2%組最高，為對照組1.75倍，之后下降，0.4%、2.0%組與對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

表5　飼料中膽固醇水平對軍曹魚肝臟中魚激素敏感性脂肪酶、肝酯酶、脂蛋白酯酶和魚膽固醇7α-羥化酶活性的影響Table 5　Effects of dietary cholesterol on FAS,HSL ,HL LPL,and Cyp7a1 activity in liver of cobia

3　討 論

3.1飼料膽固醇對軍曹魚生長性能的影響

早期學(xué)者在大西洋鮭[15]和牙鲆[19]的研究中發(fā)現(xiàn)，在以魚粉為基礎(chǔ)蛋白源的飼料中補充膽固醇未發(fā)現(xiàn)膽固醇促攝食和生長效應(yīng)。韓冰[20]在以白魚粉為蛋白源的飼料研究中探究了大豆卵磷脂、膽固醇及其交互作用對半滑舌鰨稚魚生長及消化酶活力的影響，同樣發(fā)現(xiàn)添加膽固醇對半滑舌鰨稚魚生長及消化酶活力影響不顯著，單獨添加適宜的磷脂即可滿足半滑舌鰨稚魚的生長發(fā)育需求。駱藝文等[17]在高玉米蛋白粉飼料添加膽固醇對軍曹魚（初始體質(zhì)量108 g）影響的研究中發(fā)現(xiàn)，添加質(zhì)量分數(shù)1.0%膽固醇對軍曹魚生長性能和飼料利用無顯著的促進作用。然而，陳京華[13]在豆粕替代魚粉的飼料中添加膽固醇時發(fā)現(xiàn)，膽固醇顯著影響牙鲆的攝食和生長，且牙鲆的攝食率和特定生長率隨著膽固醇添加量的升高呈上升趨勢。Yun等[11]在以豆粕為主要蛋白源的飼料中添加質(zhì)量分數(shù)1.0%的膽固醇顯著提高了大菱鲆的生長和攝食。Twibell和Wilson[14]在豆粕作為單一蛋白源的飼料中添加質(zhì)量分數(shù)1.0%的膽固醇顯著提高了斑點叉尾鮰的攝食率。朱騰飛[21]在以脫脂魚粉為主要蛋白源的試驗中，大菱鲆幼魚的生長隨飼料膽固醇的含量增加而顯著提高。本研究以上述結(jié)果為參照，以初始體質(zhì)量為24 g的軍曹魚幼魚為實驗對象，鑒于幼魚生長速度快，對多數(shù)營養(yǎng)素需求量大，預(yù)測軍曹魚幼魚對膽固醇的需要量（質(zhì)量分數(shù)）在1%左右，但結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在基礎(chǔ)飼料中添加外源膽固醇僅在0.4%組提高軍曹魚幼魚成活率（P＜0.05），隨著添加量的增加，對生長產(chǎn)生抑制作用，導(dǎo)致增重率和成活率下降（P ＜ 0.05）、飼料系數(shù)上升（P ＜ 0.05）。綜合而言，以植物蛋白為主要蛋白源的飼料中，添加適量膽固醇可促進魚類的生長，但存在飽和效應(yīng)。由于脊椎動物可在體內(nèi)合成膽固醇，因此推測軍曹魚對外源膽固醇的需要量較低，飼料中基礎(chǔ)膽固醇含量基本已滿足軍曹魚幼魚生長的需要，與駱藝文[17]的推論類似，同時過量的添加會抑制軍曹魚的生長。鑒于魚的種類、發(fā)育階段、規(guī)格、飼料配方、投喂方式和養(yǎng)殖環(huán)境等不同，還需進一步研究不同水平膽固醇對不同生長階段軍曹魚的影響以及軍曹魚的膽固醇代謝機制，探究攝食過量膽固醇抑制生長的原理及造成肝臟病變的具體成因，為人類高膽固醇血癥的研究提供理論支撐。

3.2飼料膽固醇對軍曹魚形態(tài)學(xué)參數(shù)的影響

本研究中，添加組軍曹魚幼魚的肝體比及臟體比均呈上升趨勢，說明隨著飼料中外源膽固醇的增加，肝臟逐漸增大，病變肝臟（花肝、土肝、綠肝等）的比例上升，肝臟中膽固醇沉積量除0.4%組外隨飼料中膽固醇增加而上升，與文獻[11,13,16,21]的結(jié)果相似，推測飼料中膽固醇的增加會造成肝臟中膽固醇的過度累積（與朱騰飛[21]的結(jié)論類似），引發(fā)肝臟損傷或組織病變。

3.3飼料膽固醇對軍曹魚體成分的影響

Chou等[22]研究發(fā)現(xiàn),豆粕蛋白部分替代魚粉蛋白能顯著提高軍曹魚肌肉中脂肪含量。然而，也有研究[19,23-24]發(fā)現(xiàn)，植物蛋白替代魚粉后導(dǎo)致魚體脂肪含量顯著降低。這可能是由植物蛋白源料本身或使用量不同所致。本研究中，軍曹魚飼以豆粕為主要蛋白源飼料，魚體水分和灰分并無顯著差異，體粗蛋白隨膽固醇添加量的增加在添加組0.4%至2.0%組上升，體粗脂肪在0.4%組高于對照組（P ＜0.05），后下降。說明添加少量膽固醇可促進軍曹魚對脂肪的利用率，提高體脂肪的積累，但過多添加會造成脂肪分解過度，脂肪含量降低。Yun等[11]在大菱鲆的研究中發(fā)現(xiàn)，補充質(zhì)量分數(shù)1%的膽固醇組體脂肪含量高于其他處理組（P ＜ 0.05）。此外，陳京華[13]在牙鲆研究中發(fā)現(xiàn)，高豆粕含量的飼料中補充質(zhì)量分數(shù)1.0%的膽固醇顯著提高了脂肪的表觀消化率，提高了肝臟脂肪酶的活性。猜測可能在低添加組機體分解膽固醇為膽汁酸，促進脂類的消化和吸收，血漿中甘膽酸（CG）含量的變化也驗證了這一假設(shè)。但過量添加會造成脂肪的過度分解。周書耘等[25]發(fā)現(xiàn)，在以魚粉為主要蛋白源的飼料中添加膽汁酸會降低脂肪在軍曹魚體內(nèi)中沉積，提高體粗蛋白質(zhì)含量。

3.4飼料膽固醇對軍曹魚血液生化指標的影響

在肝臟中，以膽固醇為原料合成總膽汁酸是機體去除過多膽固醇的一個重要方式。甘膽酸（CG）是主要膽汁酸之一，是肝臟以膽固醇為原料合成的膽酸（CA），再與甘氨酸結(jié)合而成[26]。Yun等[11]及朱騰飛[21]在大菱鲆的研究中發(fā)現(xiàn)飼料中增加膽固醇可增加膽汁酸的分泌。本研究中，隨飼料中膽固醇的增加，軍曹魚血清甘膽酸（CG）各添加組顯著高于對照組，0.4%至0.8%組顯著上升，后下降，這說明機體可能對甘膽酸的分泌存在反饋調(diào)節(jié)，也可能因為攝入過量膽固醇加重了肝臟的分解負擔，造成肝臟膽汁代謝紊亂，損害肝臟組織。高添加量組2.0%組顯著高于對照組的肝病變率也部分驗證了上述假設(shè)。

王玉明等[27]和逢龍等[28]在大鼠中的研究發(fā)現(xiàn)，血清TG含量隨飼料中膽固醇添加量的增加呈下降趨勢，但在Fungwe[29-30]的研究中，給大鼠喂食低脂飼料（5%）時膽固醇使大鼠血清TG濃度增加，而給大鼠喂食高脂飼料（20%）時膽固醇并不影響血清TG濃度。Van等[31]指出，飼料中脂肪種類的不同，膽固醇對血清TG影響程度亦不相同，因此，膽固醇對血清TG的影響可能受物種及其代謝狀態(tài)以及食物組成影響。本研究中，投喂以豆粕為主要蛋白源、脂肪質(zhì)量分數(shù)10%的飼料，隨膽固醇添加量的增加，軍曹魚幼魚血清中的TG 含量降低。

隨飼料中膽固醇含量的增加，贠彪等[5]在大菱鲆幼魚、陳京華[13]在牙鲆、朱騰飛[21]在大菱鲆的研究均發(fā)現(xiàn)，試驗魚血清中TC、HDL-C、LDL-C含量均有不同程度的上升。而血清中膽固醇過高是引發(fā)動脈粥樣硬化的重要原因[32]。c(HDL-C)/c(LDL-C)是表示魚體內(nèi)膽固醇運輸方向和動脈粥樣硬化程度的重要指標[33-34]。本研究中，1.6%、2.0% 組LDL-C的含量顯著高于對照組，c(HDL-C)/c(LDL-C)的比值隨飼料膽固醇的增加而下降，說明飼料中膽固醇含量升高會改變血液成分的組成并對血液的流動產(chǎn)生負面影響，而軍曹魚作為一種快速游動的肉食性魚類，這些變化可能對其影響更大，在養(yǎng)殖實驗后期，高添加量組軍曹魚搶食性及活力均降低。可見，過量添加膽固醇會損害軍曹魚的健康。

3.5飼料膽固醇對軍曹魚脂質(zhì)代謝的影響

CYP7A1在肝臟中催化膽固醇分解為膽汁酸，是膽汁酸合成經(jīng)典途徑的限速酶[35]。膽汁酸既是CYP7A1的酶促催化反應(yīng)產(chǎn)物，又對CYP7A1的表達有負反饋調(diào)節(jié)作用[36]。贠彪[5]在對大菱鲆的研究中也發(fā)現(xiàn)，高植物蛋白飼料中添加膽固醇增強了CYP7A1酶活性，朱騰飛[21]發(fā)現(xiàn)，飼料中添加膽固醇可增加大菱鲆肝臟CYP7A1基因表達量。王玉明等[27]發(fā)現(xiàn)，飼料中的膽固醇能提高大鼠CYP7A1酶的活性。本研究中，除2.0%組，添加組CYP7A1酶活性均高于對照組（P＜0.05），隨飼料中膽固醇的增加CYP7A1酶活性在0.4%到1.2%組上升，后下降。說明飼料中的膽固醇能提高肝臟中CYP7A1酶的活性，催化攝入膽固醇的分解為膽汁酸。當添加量過高時分解產(chǎn)生的膽汁酸會對CYP7A1酶產(chǎn)生反饋調(diào)節(jié)，使其活性降低。

脂蛋白酶（LPL）與肝脂酶（HL）是參與脂肪分解代謝的兩種關(guān)鍵酶，合稱總脂酶。本實驗中，飼料膽固醇含量對HL活性影響不明顯，而對LPL的活性有顯著影響。LPL水解極低密度脂蛋白和乳糜微粒中的甘油三酯，使之轉(zhuǎn)變成小分子脂肪酸，供組織貯存和利用[37-38]。LPL在膽固醇逆轉(zhuǎn)運中起重要作用。研究表明，LPL是循環(huán)脂蛋白大顆粒中甘油三脂水解的限速酶，可使富含甘油三脂的乳糜微粒和極低密度脂蛋白重塑為乳糜微粒殘體和低密度脂蛋白，具有抗動脈粥樣硬化作用[37]。在本研究中，LPL酶活性隨飼料中膽固醇添加量的增加而上升，這可能是機體在平衡膽固醇代謝，以降低血清中膽固醇含量。激素敏感脂酶（HSL）是負責(zé)分解脂肪組織、釋放游離脂肪酸的限速酶[39]，通過催化水解脂肪組織中的甘油三脂來滿足機體的能量需要，在機體的能量控制中發(fā)揮重要作用。本研究中，HSL酶活力隨膽固醇添加量的增加在0.4%至2.0%組上升，促進脂肪的分解，這也可能是全魚、肝臟及肌肉粗脂肪下降的原因之一。但血清甘油三酯含量并沒有隨膽固醇添加量的增加而有顯著上升，這個現(xiàn)象還需要進一步實驗來探討。

總的來說，本研究的軍曹魚在攝入外源膽固醇后，為調(diào)節(jié)膽固醇代謝平衡，上調(diào)肝臟CYP7A1酶活性，加快膽固醇的分解，促進膽汁酸的合成分泌，乳化脂肪，擴大脂肪和脂肪酶的接觸面，并提高脂肪代謝相關(guān)酶的活性，加速脂類的消化吸收，進而提高體脂肪的沉積，并提高血清中總膽固醇的含量。但過多攝入外源膽固醇，會加重肝臟分解膽固醇的負擔，而過多膽汁酸的分泌會使脂肪含量下降，并可能造成肝臟的膽汁淤積，引起肝臟病變，進而對機體的生長產(chǎn)生不利影響。

4　結(jié) 論

1）在以去皮豆粕、白魚粉及酪蛋白為蛋白源的營養(yǎng)背景下，飼料中適宜的膽固醇（質(zhì)量分數(shù)0.566%）可提高軍曹魚幼魚的成活率（P＜0.05）。

2）膽固醇對軍曹魚幼魚生長具有飽和效應(yīng)，飼料中添加過多的膽固醇會抑制機體的生長，造成肝組織病變。

3）添加適量膽固醇可增加機體的脂肪沉積，但過多的添加會造成全魚、肝臟、肌肉脂肪含量下降，影響機體脂代謝。

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（責(zé)任編輯：劉慶穎）

Effects of Dietary Cholesterol Level on Growth Performance,Blood Biochemical Parameters and Lipid Metabolism of Juvenile Cobia(Rachycentron canadum)

CHEN Qiang,LIU Hong-yu,TAN Bei-ping,DONG Xiao-hui,CHI Shu-yan,YANG Qi-hui,ZHANG Shuang
（College of Fisheries,Guangdong Ocean University,Zhanjiang 524088,China）

Abstract:Cobia(Rachycentron canadum L.)with body weight(24±0.19)g were fed with diets（Soybean meal 33%,Casein 17%,Fish meal 15%）containing six levels of cholesterol(mass fraction is 0.0%,0.4%,0.8%,1.2%,1.6% and 2.0%,respectively)for 8 weeks.The experiment was conducted to investigate the effects of dietary cholesterol supplementation on growth performance,body composition,serum biochemical index and enzymes activity of fat metabolism.The results showed that the weight gain rate(WGR),survival rate(SR),and feed conversion ratio(FCR)got better in group 0.4%,with the difference from the control at level of P＞0.05,P＜0.05 and P＞ 0.05,respectively,and the three index got worse with the increase of cholesterol supplementation.The hepatosomatic index(HSI),viscerasomatic index(VSI),book=36,ebook=39and ratio of liver lesion tend to had an increase tendency in experimental groups.The crude lipids of whole body and liver changed similar to growth index,namely increased in group 0.0%－0.4% and declined in group 0.4%－2.0%.The crude protein of whole body showed an increased tendency and cholesterol in liver had a trend from decline to rise,but the moisture and ash changed weakly(P＞0.05).The plasma total cholesterol(TC)and LDL-C were elevated.The activity of hormone-sensitive triglyceride lipase(HSL)in liver showed a trend from rise to decline.These results suggested that dietary cholesterol might improve the growth ranged from supplement 0－0.4% and affect the fat metabolism of cobia.Too much dietary cholesterol could bring saturated toxic effects and growth inhibition to cobia.Based on SR,according to cubic polynomial analysis,the optimum dietary cholesterol level was 0.566%.

Key words:juvenile cobia; cholesterol; growth performance; body composition; lipids metabolism

通信作者：譚北平，教授，博導(dǎo)，主要從事水產(chǎn)動物營養(yǎng)與飼料學(xué)研究。E-mail：bptan@126.com

基金項目：國家自然科學(xué)基金(31272673)；國家公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）專項資金（201003020）；廣東省珠江學(xué)者基金（GDUPS 2011)；廣東省高等學(xué)校科技創(chuàng)新重點項目（2011）；廣東省自然科學(xué)基金（S2013010016511）．

收稿日期：2015-06-12

doi：10.3969/j.issn.1673-9159.2016.01.007

中圖分類號：S968.73

文獻標志碼：A

文章編號：1673-9159（2016）01-0035-09

第一作者：陳強（1988 －），男，碩士研究生；主要從事水產(chǎn)動物營養(yǎng)學(xué)研究。 E-mail：chenqiang053@126.com