畜禽流行性乙型腦炎的診斷與防治

佟金彪

（黑龍江省綏濱縣畜牧獸醫(yī)局，黑龍江綏濱 156200）

畜禽流行性乙型腦炎的診斷與防治

佟金彪

（黑龍江省綏濱縣畜牧獸醫(yī)局，黑龍江綏濱 156200）

流行性乙型腦炎又稱日本乙型腦炎，是由乙型腦炎病毒引起的一種急性人畜共患病。乙型腦炎病毒屬于披膜病毒科的黃病毒屬。本病在家畜中，馬發(fā)病出現(xiàn)腦炎癥狀，母豬則表現(xiàn)流產(chǎn)、死胎及公豬常發(fā)一側(cè)或兩側(cè)睪丸炎，而其他家畜和家禽雖感染率高，但大多為隱性感染。

流行性乙型腦炎；癥狀；病理

1 流行病學(xué)

馬、豬、牛、羊、雞、鴨和野鳥(niǎo)都可感染本病毒，馬最易發(fā)病，人次之，其他家畜多為隱性感染。本病主要通過(guò)蚊子叮咬而傳播。蚊子不僅是傳染媒介，也是病毒的貯存宿主。本病有明顯的季節(jié)性，主要在夏季至初秋7～9月份流行。

2 臨診癥狀

3歲以下的幼駒多發(fā)，成年馬多為隱性感染。潛伏期約4～15d。病馬病初體溫升高，精神不振，食欲減退。嚴(yán)重者出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，表現(xiàn)精神沉郁，反應(yīng)遲鈍或消失，常出現(xiàn)異常姿勢(shì)，如兩腿交叉或做圓圈運(yùn)動(dòng)，或四肢失去平衡，走路歪斜，嚴(yán)重時(shí)站立不穩(wěn)，臥地不起，四肢呈游泳狀。少數(shù)病馬表現(xiàn)興奮，精神異常，狂暴不安，亂沖亂撞，后期因全身過(guò)度疲憊，麻痹衰竭而死。病程快者2～3d，慢者7～20d死亡。本病在豬主要癥狀是流產(chǎn)或早產(chǎn)，胎兒多是死胎，大小不等或木乃伊胎。流產(chǎn)后母豬癥狀很快減輕，在預(yù)產(chǎn)期不見(jiàn)腹部和乳房膨大，亦不見(jiàn)泌乳。患病公豬除一般癥狀外，常發(fā)生睪丸炎。

3 病理變化

病馬尸體剖檢眼觀變化不明顯，腦脊髓液增多，軟腦膜和實(shí)質(zhì)充血、出血和水腫，內(nèi)臟僅見(jiàn)水腫。腦病理組織學(xué)檢查，可見(jiàn)典型的非化膿性腦炎變化。病豬腦和脊髓膜充血，腦室和脊髓腔液增多。睪丸不同程度腫大，實(shí)質(zhì)充血、出血和壞死灶。子宮內(nèi)膜顯著充血。流產(chǎn)或早產(chǎn)胎兒常見(jiàn)有腦水腫，胎兒常呈木乃伊化，從拇指大小到正常大小不等。

4 實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)

4.1 病毒分離

（1）病料的處理：無(wú)菌采取死后或?yàn)l死期撲殺病畜的腦組織，放入滅菌研缽內(nèi)，用生理鹽水洗去血液，然后研碎。用10%正常家兔滅活血清鹽水，制成l：10腦組織懸液，加入青、鏈霉素各100～500國(guó)際單位/ml，3000轉(zhuǎn)/min離心15min，吸取上清液，立即接種。如暫時(shí)不能進(jìn)行病毒分離，可將腦組織塊放于50%中性甘油生理鹽水中。

（2）接種動(dòng)物：取3周齡幼鼠，每次接種6只，每鼠腦內(nèi)接種0.03ml，接種后觀察兩周，如在72h內(nèi)死亡者棄去。接種72h后出現(xiàn)旋轉(zhuǎn)或抽搐，說(shuō)明已發(fā)病，即應(yīng)將其殺死，采取腦組織制成懸液，再傳代一次進(jìn)行鑒定。如不發(fā)病，觀察19d后撲殺，盲傳3代仍不發(fā)病者，則可證實(shí)不是本病。

（3）鑒定病毒：將傳代死亡的鼠腦組織制成抗原，與已知乙型腦炎免疫血清作補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)。如為陽(yáng)性，則可初步鑒定為乙型腦炎。

4.2 血清學(xué)檢測(cè)

血清學(xué)檢測(cè)包括病毒抗原的檢測(cè)和特異抗體的檢測(cè)。病毒抗原的檢測(cè)有熒光抗體檢測(cè)等。特異抗體的檢測(cè)有血凝（HA）和血凝抑制（HI）試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、中和試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）等，但以HA和HI試驗(yàn)較為常用。

下面介紹血凝（HA）和血凝抑制（HI試驗(yàn)：

（1）血凝素效價(jià)測(cè)定：將制備的血凝素用0.4%雞蛋清、pH7.5磷酸鹽緩沖液液配成10倍的稀釋液。取清潔干燥的大孔塑料滴定板，于第一至第十孔內(nèi)分別加入預(yù)冷的0.4%雞蛋清pH7.5磷酸鹽緩沖液0.2ml。吸取10倍稀釋的血凝素0.2ml，加入第一孔內(nèi)，做倍比稀釋，最后一孔混合后吸出0.2ml棄去，此時(shí)第一至第九各孔中的血凝素的稀釋度為20～5120倍。第十孔不加血凝素，作為紅細(xì)胞對(duì)照。于第一至第十孔內(nèi)各補(bǔ)加pH4.3磷酸鹽緩沖液0.2ml，每孔加入用pH5.3磷酸鹽緩沖液配制成的0.5%鵝紅細(xì)胞懸液0.4ml，混合均勻，室溫感作60分鐘。觀察結(jié)果判定：按血凝強(qiáng)度分別以+、++、+++、++++和-表示。以50%紅細(xì)胞出現(xiàn)凝集（++）的血凝稀釋度為其血凝效價(jià)。

（2）血凝抑制試驗(yàn)：取微孔塑料板一塊，從第一排的第二孔開(kāi)始，每孔加入0.4%雞蛋清pH5.3磷酸鹽緩沖液0.2ml，第九孔加入0.3ml。然后吸取經(jīng)高嶺土處理的10倍被檢血清0.2ml加入第一、二孔內(nèi)。第二孔混合后取出0.2ml放入第三孔內(nèi)，如此反復(fù)操作直至第八孔，由第八孔吸出0.2ml棄去。此時(shí)血液稀釋度從10～1250倍。第九孔加入被檢血清0.1ml作為血清對(duì)照。于第一至八孔內(nèi)各加0.2ml8單位血凝素，混合均勻后置室溫60mn，隨后各加0.5%鵝紅細(xì)胞懸液0.4ml。混合置室溫感作60min后觀察結(jié)果，以完全抑制血凝出現(xiàn)的血清最高稀釋度為該血清的血凝抑制效價(jià)。同時(shí)作紅細(xì)胞對(duì)照、血清對(duì)照和血凝效價(jià)對(duì)照。

（3）注意事項(xiàng)：血清中非特異性抑制物可用丙酮、氯仿或高嶺土去除。其中高嶺土處理法簡(jiǎn)單易行，效果也好。試驗(yàn)用0.4%雞蛋清pH7.5磷酸鹽緩沖液對(duì)血凝素具有較好的保護(hù)穩(wěn)定作用。

5 防治

本病的主要傳播媒介是蚊，防蚊滅蚊是預(yù)防本病的一項(xiàng)重要措施。另對(duì)4個(gè)月至1歲的幼駒可用乙型腦炎弱毒疫苗進(jìn)行預(yù)防接種，注射時(shí)間應(yīng)在5月份蚊子活動(dòng)以前。對(duì)豬于流行前一個(gè)月或?qū)?月齡以上至2歲的后備公母豬都要注射乙型腦炎弱毒疫苗進(jìn)行預(yù)防接種，免疫后一個(gè)月可產(chǎn)生堅(jiān)強(qiáng)的抵抗力。

[1]呂茂杰，郁宏偉，韓佳麗，等.豬乙型腦炎的診斷與防治[A].“科技進(jìn)步推進(jìn)畜牧業(yè)現(xiàn)代化”科技論文集[C]. 2011：186-188.

[2]楊旭華，史新濤，李鎮(zhèn)虎.畜禽乙型腦炎的流行狀況及防控對(duì)策[J].Agricultural Technology & Equipment，2011，（11）：38-39.