慢性睪丸疼痛大鼠外周痛閾變化研究

吳觀土　李波

[摘要] 目的 探討慢性睪丸疼痛大鼠外周痛閾變化及其意義。 方法 選擇24只Wistar大鼠，根據隨機數字表法分為對照組、模型組及假手術組，模型組采用免疫誘導法建立大鼠睪丸纖維化慢性疼痛模型，造模前及造模10周后檢測3組大鼠的外周熱刺激潛伏期（HPL）、機械刺激閾值（PWT）。比較3組大鼠的HPL、PWT。 結果 3組大鼠造模前的外周HPL、PWT差異無統計學意義（P>0.05），造模10周后，對照組及假手術組的HPL、PWT較造模前無明顯變化，模型組的HPL短于造模前，HPL低于造模前（P<0.05）；造模10周后，模型組的HPL短于對照組及假手術組，PWT低于對照組及假手術組（P<0.05），對照組及假手術組的HPL、PWT差異無統計學意義（P>0.05）。 結論 慢性睪丸疼痛大鼠外周疼痛閾值降低，其可能同慢性疼痛的致敏作用有關。

[關鍵詞] 慢性睪丸疼痛；睪丸纖維化；外周痛閾；熱刺激潛伏期；機械刺激閾值

[中圖分類號] R332 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2016）02（c）-0043-03

[Abstract] Objective To investigate the change of peripheral pain threshold in rats with chronic orchialgia and it significance. Methods 24 Wistar rasts were selected and divided into control group，model group and sham operation group.Model group was given immune induction way to make the chronic pain model of testicular fibrosis.Peripheral hot plate latency （HPL） and paw withdrawal threshold （PWT） was detected respectively before modeling and after 10 weeks modeling.HPL and PWT among three groups was compared respectively. Results There was no statistical difference of peripheral HPL and PWT before modeling among three groups （P>0.05）.After 10 weeks modeling，compared with before modeling，HPL and PWT had no obvious change after 10 weeks modeling in control group and sham operation group，HPL of model group was shorter than that before modeling，PWT was lower than that before modeling （P<0.05）；after 10 weeks modeling，HPL of model group was shorter than that of control group and sham operation group （P<0.05），PWT was lower than that of control group and sham operation group （P<0.05）.There was no significant difference in control group and sham operation group （P>0.05）. Conclusion Periphera pain threshold is decreased in rats with chronic orchialgia，and it may be related to the sensitization role of chronic pain.

[Key words] Chronic orchialgia；Testicular fibrosis；Peripheral pain threshold；Hot？plate latency；Paw withdrawal threshold

慢性睪丸疼痛是臨床常見的泌尿系統疾病，多病程持久，對患者的生活及工作影響較大，臨床治療也頗為困難，嚴重者甚至需要切除睪丸及附睪進行治療，存在影響患者性能力、生殖能力的風險[1]。近年來的研究表明[2-4]，局部的慢性疼痛能夠引起全身的反應，如內分泌失衡及神經心理障礙等，其與慢性疼痛引起的內分泌神經機制的變化有關，為進一步探討慢性睪丸疼痛對外周痛閾的影響，本文就慢性睪丸疼痛大鼠模型外周痛閾的變化進行研究。

1 材料與方法

1.1 材料及儀器

動物實驗臺、電子天平、移液器、DM.7-YLS-21A冷熱板測痛儀（北京達美科技有限公司），Vonfrey絲測痛套件（Aesthesio，Danmic/美國），研磨器，百日咳桿菌、卡介苗、生理鹽水等。

1.2 造模方法及分組

選擇24只Wistar大鼠（中山大學動物實驗室），清潔級，4周齡，（200±25）g，室溫飼養，定量給食，自由飲水，間隔光照，適應環境后隨機分為對照組、假手術組及模型組，每組8支，分籠飼養，模型組采用免疫誘導法建立睪丸纖維化慢性疼痛模型[5]，模型組及假手術組取左側睪丸，稱重，研磨搗碎，加0.9%氯化鈉溶液制成勻漿，濃度為0.5 g/ml，采用等體積福氏佐劑乳化，制備大鼠睪丸組織抗原，大鼠夾脊部位注射0.8 ml致敏大鼠，模型組同時股靜脈注射百日咳桿菌1×1010個，同時右側睪丸注射卡介苗0.1 ml，間隔15 d重復免疫2次，假手術組大鼠模擬免疫過程采用生理鹽水。對照組大鼠采用空白對照，不給予藥物及手術干預。3組大鼠分別飼養10周。

1.3 熱刺激潛伏期（HPL）測定

HPL測定采用DM.7-YLS-21A冷熱板測痛儀，分別與造模前及造模10周后進行，檢測時間為上午8：00～12：00，大鼠置于室溫25℃適應環境30 min，冷熱板測痛儀設定溫度（52±0.5）℃，預熱至恒定溫度后，大鼠置于測痛儀觀察箱檢測平板上，觀察大鼠舔爪情況，大鼠放置檢測平板至舔爪時間記錄為HPL，隔日檢測，共檢測3次，取平均值。

1.4 機械刺激閾值測定

機械痛閾值測定采用Vonfrey絲測痛套件，分別與造模前及造模10周后進行，檢測時間為上午8：00～12：00，大鼠置于室溫25℃適應環境30 min，放置于1 mm×1 mm的網格底部的檢測箱內，20 min大鼠適應環境安靜后，自下往上采用不同刻度的Vonfrey絲刺激大鼠足底部，逐漸增加刺激強度，直至大鼠縮足舔爪的強度，間隔15 min重復刺激3次均為陽性的刺激強度為機械刺激閾值（PWT），3次取平均值。

1.5 統計學處理

數據采用SPSS 11.5統計學軟件進行分析，計量資料采用方差分析，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 3組大鼠造模前后HPL的比較

3組大鼠造模前的HPL差異無統計學意義（P>0.05），造模10周后，對照組及假手術組的HPL較造模前無明顯變化，模型組的HPL短于造模前（P<0.05）；造模10周后，模型組的HPL短于對照組及假手術組（P<0.05），對照組及假手術組的HPL差異無統計學意義（P>0.05）（表1）。

2.2 3組大鼠造模前后PWT的比較

3組大鼠造模前的PWT差異無統計學意義（P>0.05），造模10周后，對照組及假手術組的PWT較造模前無明顯變化，模型組的PWT低于造模前（P<0.05）；造模10周后，模型組的PWT低于對照組及假手術組（P<0.05），對照組及假手術組的PWT無統計學意義（P>0.05）（表2）。

3 討論

慢性睪丸疼痛是臨床常見的泌尿外科疾病，又稱為頑固性睪丸疼痛，病程呈現慢性進展過程，其發病機制目前尚缺乏統一的認識，有學者認為，慢性睪丸疼痛與睪丸支配節段神經元的感染、沃勒變性和α2-腎上腺受體激活有關，這些部位的神經元的病變可能導致其對神經末梢的傳入信號過度敏感，引發慢性疼痛[6-7]，也有人認為，與睪丸的慢性病變導致的神經末梢刺激以及精索靜脈曲張時精索內溫度過高引起伴行的生殖股神經缺血、缺氧引起的損傷有關[8-9]。由于目前對發病機制缺乏統一的認識，臨床治療也頗為困難，患者往往病程較長，反復采用非甾體類抗炎藥物鎮痛治療，能夠緩解部分臨床癥狀，但多難以取得滿意的效果，患者的疼痛往往呈現慢性漸進性發展，最終影響其工作和生活，甚至需要進行精索靜脈結扎、神經離斷、附睪切除等外科治療[10-11]，而且慢性睪丸疼痛的臨床療效目前尚存在爭議，是泌尿外科及男科頗為棘手的慢性疾病。

慢性疼痛的發生目前認為與刺激信號引起外周脊髓背根神經和大腦中樞神經致敏有關。慢性疼痛對機體的影響不僅與局部的疼痛刺激有關，而且對相關的外周和中樞神經致敏作用能夠引起全身神經內分泌機制變化和相應脊髓節段的神經功能異常[12-14]，如有研究發現[15-16]，在慢性前列腺炎盆腔疼痛綜合征的大鼠脊髓中，炎性介質的表達明顯升高，而且與相應脊髓節段支配區域的痛覺過敏有關，而在脊髓損傷的大鼠，其中樞性疼痛程度與脊髓背根中P物質的表達有關，說明脊髓背根神經及其遞質的表達水平變化在慢性疼痛致敏的發生過程中具有重要的作用，而且能夠引起對應部位的牽涉痛或者器官功能障礙，甚至由于中樞神經遞質的表達變化引起情感障礙[17-18]，并發抑郁或焦慮等情感或心理障礙，可見慢性疼痛對機體的影響是廣泛的，不僅表現在對生理功能的影響，也表現在對心理功能的影響，其對生理功能的影響可能在相應脊髓支配的牽涉部位表現得更明顯。本研究在對慢性睪丸疼痛大鼠模型的研究中發現，慢性睪丸疼痛大鼠模型外周痛閾發生明顯變化，造模10周后，模型組大鼠的HPL較對照組及假手術組縮短，PWT較對照組及假手術組降低，說明慢性睪丸疼痛刺激對大鼠外周熱刺激及機械刺激痛覺具有易化作用，可引起大鼠外周痛閾降低，其可能與慢性疼痛刺激對脊髓背根神經和中樞神經系統的致敏作用有關[19-20]。既往的研究證實[21-23]，在疼痛發生時，脊髓背根神經中多種與疼痛刺激相關的蛋白表達發生變化，并且與疼痛致敏作用有關，能夠為相關蛋白的拮抗劑拮抗，其可能在慢性睪丸疼痛時外周痛閾變化的過程中起關鍵作用。

綜上所述，慢性睪丸疼痛大鼠外周疼痛閾值降低，其可能與慢性疼痛的致敏作用有關。

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（收稿日期：2015-10-29 本文編輯：許俊琴）