GC-MS法同時測定關東丁香葉揮發(fā)油中4種活性成分

劉同新， 郭偉英

（遼寧醫(yī)學院藥學院，遼寧錦州121000）

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GC-MS法同時測定關東丁香葉揮發(fā)油中4種活性成分

劉同新， 郭偉英*

（遼寧醫(yī)學院藥學院，遼寧錦州121000）

摘要:目的 建立同時測定關東丁香Syringa veutina Kom葉揮發(fā)油中芳樟醇、α-松油醇、突厥酮和棕櫚酸的氣相色譜-質譜（GC-MS）方法。方法 揮發(fā)油分析采用HP-5MS毛細管色譜柱（250 μm×30 m×0.25 μm），程序升溫；進樣口溫度250℃；體積流量3.0 mL/min；進樣量1 μL；分流比60∶1。結果 從中共分離出62個峰，鑒定出39種化合物，占揮發(fā)油總量的78.51％。芳樟醇、α-松油醇、突厥酮、棕櫚酸分別在0.003～0.03 mg/mL、0.001 04～0.010 4 mg/mL、0.001 96～0.019 6 mg/mL、0.005 68～0.056 8 mg/mL范圍內線性關系良好，平均回收率分別為99.4％、99.2％、99.4％、99.5％，RSD分別為1.0％、1.4％、1.2％、1.0％。結論 該方法簡便、快速、準確，可為關東丁香葉揮發(fā)油的質量控制提供依據(jù)。

關鍵詞:關東丁香；葉；揮發(fā)油；芳樟醇；α-松油醇；突厥酮；棕櫚酸；GC-MS

dol:10.3969/j.issn.1001-1528.2016.02.026

KEY W 0RDS: Syringa veutina Kom；1eaves；vo1ati1e oi1；1ina1oo1；α-terPineo1s；damascenone；cety1ic acid；GC-MS

關東丁香Syringa veutina Kom為木樨科植物，主要生長在遼寧、吉林等北部暖溫帶落葉闊葉林區(qū)，喜光、稍耐陰、耐寒、耐干旱［1］，未收入藥典。它主要含揮發(fā)油類、黃酮類、苯丙素類、環(huán)烯醚萜類及其苷類等成分［2-3］，具有清熱解毒，消炎之功效，用于治療急性黃疸型肝炎。目前，對該植物揮發(fā)油的研究尚未見報道。

本實驗首次通過GC-MS技術對關東丁香葉揮發(fā)油的成分進行了鑒定，經(jīng)查閱文獻，證實其有多種活性成分。其中，芳樟醇可作為香料，同時具有鎮(zhèn)靜、抗菌、抗病毒等作用［4-5］；α-松油醇具有殺菌、抑菌作用［6-8］；突厥酮在設計香氣分子的緩慢釋放和控制釋放方面有重要作用［9-10］；棕櫚酸具有降糖的作用［11-12］。結果顯示，相對含有量分別為芳樟醇8.31％、α-松油醇3.85％、突厥酮2.88％、棕櫚酸10.32％。因此，GC-MS［13-15］法對關東丁香葉揮發(fā)油中這4種活性成分進行含有量測定可為該植物的質量控制和進一步研究提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 實驗儀器 AL-204型精密電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；安捷倫7890B-5977A GC/MSD氣相-質譜聯(lián)用色譜儀，包括Agi1ent7683自動進樣器（美國安捷倫公司）。

1.2 試藥與材料 芳樟醇（批號20141015）、α-松油醇（批號20141015）、突厥酮（批號20141218）、棕櫚酸（批號20141015）對照品（南京森貝伽生物技術有限公司，純度均≥98％）。正己烷為色譜純；乙醚等其他試劑為分析純。關東丁香葉由遼寧好護士藥業(yè)（集團）有限責任公司提供（S1-鞍山，S2-錦州，S3-大連），經(jīng)遼寧醫(yī)學院藥學院生藥教研室承偉教授鑒定為木犀科丁香屬植物關東丁香Syringa veutina Kom的葉。關東丁香揮發(fā)油（自制）。

2 方法與結果

2.1 關東丁香葉揮發(fā)油成分分析 關東丁香葉揮發(fā)油經(jīng)氣相色譜-質譜（GC-MS）（表1）聯(lián)用儀

表1　關東丁香葉揮發(fā)油中的化學成分Tab.1 Chem lcal constltuents ln the leaves of Syringa veutina Kom volatlle oll

分析，共分離出62個峰，鑒定出39種化合物，占揮發(fā)油總量的78.51％。

2.2 氣相色譜-質譜法(圖1)

1.芳樟醇 2.α-松油醇 3.突厥酮 4.棕櫚酸1.1ina1oo1 2.α-terPineo1 3.damascenone 4.hexadecanoic acid圖1　供試品和對照品溶液的GC-MS色譜圖Flg.1 GC-MS chromatogram s of samples and reference substance solutlons

2.2.1 氣相色譜條件 HP-5MS毛細管色譜柱（250 μm×30 m×0.25 μm），程序升溫（起始80℃，3℃/min速率升至101℃，23℃/min速率升至111℃，3℃/min速率升至210℃，83℃/min速率升至230℃）；進樣口溫度250℃；載氣為高純氦氣；體積流量為3.0 mL/min；進樣量為1 μL；分流比60∶1。

2.2.2 質譜條件 EI電離源，電離電壓70 eV；離子源溫度230℃；四級桿溫度150℃；掃描質量范圍m/z 50～550 amu；溶劑延遲4 min。通過NIST11譜庫檢索，選擇離子采集（SIM），結合對照品確認芳樟醇的保留時間6.577～6.640 min，選擇檢測離子m/z為93；α-松油醇的保留時間9.385～9.468 min，選擇檢測離子m/z為59；突厥酮的保留時間17.173～17.271 min，選擇檢測離子m/z為69；棕櫚酸的保留時間24.250～24.297 min，選擇檢測離子m/z為73。

2.3 溶液配制

2.3.1 對照品儲備液 精密稱取芳樟醇、α-松油醇、突厥酮、棕櫚酸對照品適量，正己烷分別定容至5 mL量瓶中，制成質量濃度分別為1.5、0.52、0.98、2.84 mg/mL的對照品溶液。分別精密吸取4種對照品溶液0.5 mL，置于5 mL量瓶中，即得。

2.3.2 供試品溶液 將干燥的關東丁香葉粉碎，精密稱取10 g，置于1 000 mL圓底燒瓶中，加入數(shù)粒玻璃珠，自揮發(fā)油提取器上端加蒸餾水400 mL，再加乙醚3 mL，冰水冷凝，微沸6 h。待完全冷卻后，取乙醚層的揮發(fā)油，常溫下呈淡黃色透明液體，揮干溶劑，得油率為0.17％，正己烷定容于5 mL量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4 方法學驗證

2.4.1 線性關系 分別精密吸取混合對照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，置于5 mL量瓶中，正己烷定容至刻度，搖勻，即得系列質量濃度混合對照品溶液，在“2.2”項色譜條件下測定，進樣量1 μL。以對照品質量濃度（mg/mL）為橫坐標（X），峰面積積分值為縱坐標（Y）進行線性回歸，得芳樟醇、α-松油醇、突厥酮、棕櫚酸的回歸方程分別為Y=14 446 968.776X+ 85 790.622 3（r= 0.999 5，n = 6）；Y = 48 601 151.402X-19 529.363 0（r=0.999 7，n = 6）；Y=34 423 315.859X+19 834.870 5（r= 0.999 9，n = 6）；Y= 12 366 905.045X + 140 230.236 6（r=0.999 7，n =6），在0.003～0.03 mg/mL、0.001 04～0.010 4 mg/mL、0.001 96～0.019 6 mg/mL、0.005 68～0.056 8 mg/mL范圍內呈良好線性關系。

2.4.2 精密度試驗 精密吸取混合對照品溶液1 μL，在“2.2”項色譜條件下測定，連續(xù)進樣6次，測定峰面積。結果，芳樟醇、α-松油醇、突厥酮、棕櫚酸的峰面積RSD值分別為1.1％、1.2％、0.6％、0.5％（n =6），表明儀器精密度良好。

2.4.3 重復性試驗 取同一批關東丁香藥材粉末（S1）6份，按“2.3.2”項下方法制備供試品溶液，在“2.2.1”項色譜條件下記錄峰面積。結果，芳樟醇、α-松油醇、突厥酮、棕櫚酸的平均含有量為3.217 6、1.606 6、2.283 0、6.015 0 μg/g，RSD值分別為1.5％、1.4％、1.7％、1.1％（n =6），表明該方法重復性良好。

2.4.4 穩(wěn)定性試驗 取同一份供試品溶液（S1），于0、2、4、6、8、10、12、24 h，在“2.2”項色譜條件下進樣1 μL，測定芳樟醇、α-松油醇、突厥酮、棕櫚酸的峰面積。結果，四者RSD值分別為0.7％、0.9％、0.7％、1.0％，表明供試品溶液在24 h內穩(wěn)定。

2.4.5 加樣回收率試驗 取同一批次含有量已知的關東丁香藥材粉末（S1）5 g，共9份，精密加入芳樟醇、α-松油醇、突厥酮、棕櫚酸的混合對照品溶液適量，按“2.3.2”項下方法制備低、中、高質量濃度的供試品溶液，每個濃度3份，在“2.2”項色譜條件下測定，計算回收率及RSD值，結果見表2。

表2　加樣回收率試驗結果（n=3）Tab.2 Results of recovery tests（n=3）

2.3.6 樣品測定 精密稱取不同批次關東丁香藥材10 g，按“2.3.2”項下方法制備供試品溶液，在“2.1”項色譜條件下分析，計算芳樟醇、α-松油醇、突厥酮、棕櫚酸含有量。結果見表3。

表3　4種成分含有量的測定結果Tab.3 Determ lnatlon results of the contents of four constltuents

3 討論

3.1 萃取溶劑和提取時間的選擇 本實驗采用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，考察萃取溶劑和提取時間對提取效率的影響，另外針對萃取溶劑，還分別考察了乙酸乙酯和正己烷溶劑的萃取效果。結果表明，關東丁香葉中的揮發(fā)性成分在正己烷中溶解性較好，出峰較多，故選擇正己烷作為萃取溶劑。同時，對提取時間（4、5、6、7 h）進行了考察，發(fā)現(xiàn)提取6 h時效率較高，而且提取完全，但繼續(xù)提取時揮發(fā)油量無明顯變化，故選擇6 h作為提取時間。綜上所述，確定以正己烷萃取溶劑，提取6 h為揮發(fā)油的提取條件。

3.2 毛細管色譜柱的選擇 本實驗分別考察了HP-5MS和DB-5MS毛細管色譜柱對測定結果的影響，兩者均為非極性色譜柱，按各色譜峰的分離度及峰型等各因素分析，發(fā)現(xiàn)前者對待測組分的分離效果更佳，提高了信噪比，具有較高的靈敏度。因此，選擇HP-5MS非極性毛細管色譜柱。

4 小結

本實驗以水蒸氣蒸餾法提取關東丁香葉揮發(fā)油，首次采用GC-MS聯(lián)用技術對其成分進行定性分析，并對其中棕櫚酸、突厥酮、芳樟醇、α-松油醇4種活性成分進行含有量測定。經(jīng)系統(tǒng)的方法學考察發(fā)現(xiàn)，該檢測方法快速、簡便、準確，可為關東丁香揮發(fā)油的質量控制提供有力的科學依據(jù)。

參考文獻:

［1］ 國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會.中華本草［M］.上海:上海科學技術出版社，1999: 5513-5519.

［2］ 周麗光，馮雪松，黃開毅，等.關東丁香化學成分研究［J］.中藥材，2008，31（5）: 679-681.

［3］ 鄭 榮，郭偉英.HPCE-DAD同時測定關東丁香葉中蘆丁、紫云英苷、異槲皮苷［J］.中成藥，2013，35（11）: 2457-2461.

［4］ 陳尚钘，趙玲華，徐小軍.天然芳樟醇資源及其開發(fā)利用［J］.林業(yè)科技開發(fā)，2013，27（2）: 13-17.

［5］ Brad1ey B F，Starkey N J，Brown S L，et al.Anxio1ytic effects of Lavandula angustifolia odour on the Mongo1ian gerbi1 e1evated P1usmaze［J］.JEthnoPharmacol，2007，111（3）: 517-525.

［6］ 韓 杰，蘇裕心，陳金龍，等.α-松油醇殺菌效果的試驗觀察［J］.中國消毒學雜志，2014，31（4）: 333-335.

［7］ 歐陽秋麗，賈 雷，陶能國，等.α-松油醇對意大利青霉的抑制作用［J］.食品科學，2014，35（11）: 32-35.

［8］ 石超峰，殷中瓊，魏 琴，等.α-松油醇對大腸桿菌的抑菌作用及其機理研究［J］.畜牧獸醫(yī)學報，2013，44（5）: 796-801.

［9］ 黃 艷，周永輝.五種香氣分子在活性炭上的脫附活化能［J］.華中科技大學學報，2013，41（10）: 119-122.

［10］ 何 靚，朱保昆，王明鋒，等.四種香氣物質在MCM-41分子篩上的脫附活化能［J］.現(xiàn)代食品科技，2013，29 （9）: 2158-2161.

［11］ 李凌海，劉平生，劉延波，等.棕櫚酸的組織吸收分布及對骨骼肌胰島素抵抗的影響［J］.生物物理學報，2012，28（1）: 45-52.

［12］ 張 麗，高 聆，梁 軍，等.棕櫚酸對胰島的脂毒性及非諾貝特的保護作用［J］.中華內分泌代謝雜志，2005，21（2）: 155-158.

［13］ 金 華，劉治剛，高 燕，等.兩種木犀科植物揮發(fā)性成分GC-MS分析［J］.吉林化工學院學報，2014，31（3）: 23-25.

［14］ 回瑞華，侯冬巖，李鐵純，等.紫丁香葉揮發(fā)性化學成分季節(jié)性變化的GC-MS研究［J］.質譜學報，2008，29（1）: 18-20.

［15］ 劉 莉，李 清，陳曉輝，等.GC法同時測定粗壯女貞苦丁茶中4種揮發(fā)性成分［J］.中成藥，2011，33（6）: 997-1000.

Slmultaneous determ lnatlon of four actlve constltuents ln the leaves of Syringa veutina Kom volatlle oll by GC-MS

LIU Tong-xin， GUOWei-ying*
（College of Pharmacy，Liaoning Medical University，Jinzhou 121000，China）

ABSTRACT:AIM To estab1ish amethod for simu1taneous1y determining 1ina1oo1，α-terPineo1s，damascenone and cety1ic acid in the 1eaves of Syringa veutina Kom vo1ati1e oi1 by gas chromatograPhies-mass sPectrum（GC-MS）. METH0DS The ana1ysis of vo1ati1e oi1was Performed on HP-5MS caPi11ary vesse1 co1umn（250 μm×30 m× 0.25 μm）with Programming temPerature，injector temPeraturewas250℃，f1ow ratewas3.0 mL/min，injection vo1-umewas1 μL，and sP1it ratiowas60∶1.RESULTS Tota162 Peakswere iso1ated，and 39 comPoundswere identified，accounting for 78.51％ in tota1vo1ati1e oi1.Lina1oo1，α-terPineo1，damascenone and cety1ic acid showed good 1inear re1ationshiPs in the ranges of 0.003 -0.03 mg/mL，0.001 04 -0.010 4 mg/mL，0.001 96 -0.019 6 mg/mL and 0.005 68 -0.056 8 mg/mL resPective1y，whose average recoveries were 99.4％，99.2％，99.4％ and 99.5％ with the RSDs of 1.0％，1.4％，1.2％ and 1.0％，resPective1y.C0NCLUSI0N Thismethod is simP1e，raPid and accurate，which can Provide a basis for the qua1ity contro1of the 1eaves of Syringa veutina Kom vo1ati1e oi1.

*通信作者:郭偉英（1958—），男，碩士，教授，研究方向為藥品質量標準及新型給藥技術。Te1: 13941627032，E-mai1: wyinguo@ 163.com

作者簡介:劉同新（1993—），女，碩士，研究方向為藥品質量標準及新型給藥技術。Te1: 18641794099，E-mai1: 276173853@qq.com

基金項目:遼寧省科技廳計劃項目（2011402015）

收稿日期:2015-04-02

中圖分類號:R284.1

文獻標志碼:A

文章編號:1001-1528（2016）02-0351-05