番茄早疫和晚疫病害病原菌鑒定及室內藥劑的篩選

盧鐘彥,梁巧蘭,何武學

(甘肅農業大學 草業學院/草業生態系統教育部重點實驗室/甘肅省草業工程實驗室/中-美草地畜牧業

可持續發展研究中心，甘肅 蘭州　730070)

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番茄早疫和晚疫病害病原菌鑒定及室內藥劑的篩選

盧鐘彥,梁巧蘭,何武學

(甘肅農業大學 草業學院/草業生態系統教育部重點實驗室/甘肅省草業工程實驗室/中-美草地畜牧業

可持續發展研究中心，甘肅 蘭州730070)

摘要：對蘭州市皋蘭縣高山村番茄連作田病害調查發現，其主要病害為早疫病和晚疫病，病原菌鑒定為茄鏈格孢(Alternaria solani)和致病疫霉菌( Phytophthora infestans)；番茄早疫、晚疫病病菌在番茄葡萄糖瓊脂培養基上生長最好；接種不同方式、番茄不同品種對晚疫病的抗性都存在一定差異，其中在有傷接種條件下番茄果實病斑擴展速度明顯快于無傷接種；巨霸最感病，德富次之；捷美153最抗病；室內藥劑篩選結果表明，10%苯醚甲環唑和72%霜脲·錳鋅對番茄早疫病菌抑菌效果最好，抑菌率分別為100%和98.35%；10%烯酰嗎啉和72%霜脲·錳鋅對番茄晚疫病菌抑菌效果最好，抑菌率分別為98.71%和100%。

關鍵詞：茄鏈格孢；致病疫霉菌；室內藥劑篩選

番茄是一種重要的蔬菜作物，其適應范圍廣，廣泛分布于世界各地，被列為全世界產量最高的30種農作物之一，營養豐富，富含維生素和糖類，既可生食又可加工，深受人們喜愛[1-2]，番茄是喜溫、喜光性蔬菜，對土壤條件要求不太嚴格，但為獲得豐產，促進根系良好發育，應選用土層深厚，排水良好，富含有機質的肥沃壤土。番茄原產南美洲，在中國南北地區均廣泛栽培[3-4]。

近年來，隨著甘肅省農業產業結構的調整，番茄的栽培面積呈逐年擴大趨勢，實現了周年供應。但由于該地相對穩定的土壤條件，加上種植年限延長，重茬、連作現象普遍,田間積累了大量的菌源，為各種病害的發生提供了十分有利的生存環境，加之一些菜農缺乏科學的病害防治知識，防治不及時、不到位，導致病害種類明顯增多,病害發生逐年加重[5-7]。

在蘭州市皋蘭縣主要以番茄早疫病、番茄晚疫病為主；番茄早疫病、晚疫病是2種流行性很強的真菌病害，主要為害番茄葉片和果實，嚴重時葉片脫落，減產30%，不僅影響產量和品質，同時給農戶造成巨大的經濟損失[8-11]。試驗對番茄早疫病(Alternariasolani)和番茄晚疫病(Phytophthorainfestans)病原物進行了分離、純化、培養、鑒定，并對2種病原菌進行了室內藥劑篩選，旨在探明2種病害防治方法，以提高番茄的產量、質量和經濟效益。

1材料和方法

1.1試驗材料

1.1.1病樣采集分別于2013年6～8月，對甘肅省蘭州市皋蘭縣高山村番茄主要病害進行病樣采集，采樣時選擇剛剛發病的葉片，裝入一次性塑料袋內，每只塑料袋裝一片葉子，用橡皮筋系住口部，置于冰盒內，帶回實驗室備用。

1.1.2供試藥劑72%的霜脲·錳鋅可濕性粉劑，中國農業科學院植保所廊坊農藥中試廠；10%的苯醚甲環唑微乳劑，中國農業科學院植保所廊坊農藥中試廠；722 g/L的霜霉威鹽酸鹽水劑，中國農業科學院植保所廊坊農藥中試廠；10%的烯酰嗎啉水乳劑，中國農業科學院植保所廊坊農藥中試廠。

1.1.3供試幼苗播種番茄(品種巨霸、感病)于花盆，在實驗室條件培養,待幼苗長到3～5片真葉時，備用。

1.1.4供試培養基(1)馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基：200 g馬鈴薯，18 g瓊脂，20 g葡萄糖，1 000 mL蒸餾水；(2)燕麥片瓊脂培養基：30 g燕麥片，18 g瓊脂，1 000 mL蒸餾水；(3)玉米粉瓊脂培養基:30 g玉米粉，17 g瓊脂，1 000 mL蒸餾水；(4)番茄葡萄糖瓊脂培養基：200 g番茄，18 g瓊脂，20 g葡萄糖，1 000 mL蒸餾水。

1.2試驗方法

1.2.1病原菌分離純化將采集到的病葉組織切成1 mm×2 mm正方形小塊，先用75%乙醇溶液消毒30 s，然后再浸入15%的次氯酸中漂洗3 min，最后用無菌水沖洗3～4次，經表面消毒的病組織放置在PDA(含鏈霉素10 μg/1 000 mL)平板培養基，于25℃恒溫箱培養，當產生孢子或菌絲時(約4～5 d)，用滅菌的接種針挑取菌絲，移到新的PDA平板培養基上，直至菌落生長整齊一致無雜菌出現為止。

1.2.2致病性測定分離物采用赫柯氏法則進行致病性測定，將分離反復純化好的2種典型分離物在超凈工作臺上用0.5 cm打孔器在菌落邊緣打成菌餅，再回接到實驗室種植的番茄幼苗葉片上，然后逐天觀察番茄幼苗的發病情況，并且與田間發病癥狀作對照。

1.2.3病原菌鑒定根據病樣分離物在PDA上菌落形態及光學顯微鏡(Nikon E200)進行形態特征觀察，查閱相關文獻，結合《真菌鑒定手冊》[12]進行鑒定。

1.2.4不同培養基對番茄早疫、晚疫病菌生長的影響觀察室將分離得到的番茄早疫、晚疫病菌在PDA上培養5 d后，在超凈工作臺上用0.5 cm的打孔器在菌落邊緣上打取菌餅，分別轉接到4種供試培養基中，每皿1塊，3次重復，置于25℃恒溫下培養，5 d后觀察菌落生長情況，用十字交叉法測量培養基平板上的菌落直徑，記錄數據,并用SPSS軟件進行處理。

1.2.5番茄不同品種對番茄晚疫病抗病性測定番茄不同品種巨霸、捷美153、德富各分成9份，其中3份采用無傷接菌，3份采用有傷接菌(用昆蟲針刺傷)，剩余3份作為對照，重復3次。在室溫保濕的條件下培養，觀察發病情況，每隔24 h測1次病斑，連測7 d。

1.2.6室內藥劑篩選采用生長速率法測定4種殺菌劑對番茄早疫、晚疫病菌的抑菌率。采用各藥劑的推薦濃度進行試驗，藥劑濃度分別為10%苯醚甲環唑0.5 μg/mL、722 g/L霜霉威鹽酸鹽4.8 μg/mL、72%霜脲·錳鋅0.4 μg/mL、10%烯酰嗎啉0.65 μg/mL，然后按藥劑濃度的50倍用滅菌水分別配制成藥液，各取1 mL藥液加到滅菌冷卻至45℃的49 mL PDA 培養基中，搖勻，分別倒入3個滅菌培養皿中制成含藥培養基，以加1 mL無菌水的PDA為對照，用0.5 cm 打孔器分別在預先培養好的番茄早疫、晚疫病菌菌落邊緣打取菌餅，置于以上配制的含藥PDA平板上，每皿1個菌餅，最后將培養基置于25℃培養箱中培養5 d后，采用十字交叉法測量菌落直徑，并按公式計算藥劑抑菌率。

2結果與分析

2.1病原菌分離純化及鑒定

通過致病性測定，表明這2種分離物均能使番茄發病，將分離純化的分離菌1和2在超凈工作臺上用0.5 cm打孔器在菌落邊緣打成菌餅接種在供試幼苗的健康葉片上，室溫下保濕培養5 d，觀察發現接種分離菌1、分離菌2的供試幼苗葉片發病，且癥狀表現(圖1A,B)分別與田間早疫病、晚疫病發病癥狀一致(圖1C,D)。對接種發病的葉片進行再分離，獲得了與供試病樣一致的分離物。

分離菌1在PDA培養基上，菌絲初期生長呈灰白色，隨即向培養基呈圓形擴散，成圓后邊緣仍為白色，中間顏色逐漸變深最后成褐色、黑色。菌絲生長快，在25℃下培養5 d，菌落直徑在6 cm以上(圖2 A)。經誘導處理可產生分生孢子，分生孢子梗單生或叢生，分生孢子單生，褐色，倒棍棒形至長橢圓形，大小(150～300) μm×(15～19) μm，一般有多個縱橫隔膜，有長喙(一般孢身長度)(如圖2 B)。分離菌2在PDA培養基上，菌絲絲狀，初無色透明，后變褐色，菌落近圓形(如圖2 C)分生孢子為無色透明，鴨梨型或慈姑型。成熟孢子有2～3個隔膜，大小為(17～33)μm×(6.5～11)μm，萌發時兩端細胞產生芽管，芽管的頂端產生附著孢，球形或橢圓型，深褐色，壁厚，直徑8～12 μm，緊貼在寄主體上產生侵入絲，入侵寄主組織(圖2 D)。

圖1　致病性測定Fig.1　Pathogenicity test注：A、B分別為接種分離物1、2供試幼苗發病癥狀;C、D分別為番茄早疫、晚疫病田間發病癥狀

圖2　病原菌鑒定Fig.2　The pathogen identification of tomato early blight and late blight注：分離菌1(A、B)和分離菌2(C、D)菌落培養形狀和分生孢子形態

根據病原形態特征、菌落形態及光學顯微鏡(Nikon E200)下孢子形態,并參考相關文獻[13-15]，初步鑒定分離菌1為茄鏈格孢(Alternariasolani)，分離菌2為致病疫霉菌(Phytophthorainfestans)。

2.2不同培養基對番茄早疫、晚疫病菌生長的影響

通過不同培養基對番茄早疫、晚疫病菌生長影響試驗，結果表明番茄早疫菌和晚疫菌均可在4種供試培養基上生長，但存在一定差異，其中番茄早疫病菌在番茄葡萄糖瓊脂培養基上生長最快，玉米粉瓊脂培養基上最慢，馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基和燕麥片瓊脂培養基上菌落直徑介于兩者之間(表1)。方差分析表明,該菌在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基和番茄葡萄糖瓊脂培養基、燕麥片瓊脂培養基和玉米粉瓊脂培養基培養的菌落直徑之間差異不顯著，但前兩種培養基和后兩種培養基培養的菌落直徑之間差異顯著(P<0.05)；晚疫病菌在番茄葡萄糖瓊脂和玉米粉瓊脂培養基上生長最好，3 d后菌落直徑均為6.33 cm，燕麥片瓊脂培養基生長最慢，菌落直徑均為0.53 cm，馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基上的介于這兩者之間；該菌除了在玉米粉瓊脂和番茄葡萄糖瓊脂培養基上的菌落直徑差異不顯著外，在其他培養基上培養的菌落直徑差異極顯著(P<0.05)。

2.3番茄不同品種對番茄晚疫病抗病性測定

番茄品種對番茄晚疫病抗病性測定結果表明(表2)，不同接種方式和不同番茄品種對晚疫病的抗性都存在一定差異，其中在有傷接種條件下番茄果實上病斑擴展速度明顯快于無傷接種方式；同一時間，捷美153在有傷、無傷的接種條件下，病斑擴展速度最慢；不同品種，隨著時間的變化病斑擴展速度遞增，其中巨霸發病最快，4 d后有傷、無傷病斑直徑分別為2.74 cm、1.80 cm；德富次之，4 d后有傷、無傷病斑直徑分別為3.23 cm、1.00 cm；捷美153最慢，4 d后有傷、無傷病斑直徑分別為2.78 cm、1.40 cm。

表1　不同培養基處理下的番茄早疫、晚疫病菌生長

注明：同列不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05),不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)

通過不同番茄品種接種番茄晚疫病菌果實發病率試驗(表3)，結果表明同種番茄品種在發病初期有傷接種均比無傷接種發病快，比如德富3 d后有傷接種發病率為100%，3 d無傷接種的發病率為50%；不同番茄品種，在同一種接種方式下，捷美153均比德富、巨霸發病率低，有傷接菌初期(1 d、2 d、3 d)，捷美153發病率分別為0、33.33%、50.00%，發病率比德富低50.00%、50.00%、50.00%，比巨霸低100.00%、66.67%、50.00%，在后期均發病。

表2　番茄不同品種接種番茄晚疫病菌后病斑擴展

表3　不同番茄品種接種番茄晚疫病菌果實發病率

2.4室內藥劑篩選

通過室內藥劑篩選試驗，結果表明，不同殺菌劑對番茄早、晚疫病均具有一定的抑制作用，其中4種供試藥劑在推薦濃度下，10%苯醚甲環唑微乳劑和72%霜脲·錳鋅可濕性粉劑對番茄早疫病菌抑菌效果最好，抑菌率都在98%以上，722 g/L霜霉威鹽酸鹽水劑抑菌率次之，為80.82%，10%烯酰嗎啉水乳劑抑菌效果最差，為26.80%(表4，5)，方差分析表明，10%苯醚甲環唑ME和72%霜脲·錳鋅WP對該病菌的抑菌率之間差異不顯著，但2種藥劑和其他2種殺菌劑對該病菌的抑菌率之間差異顯著(P<0.05)；72%霜脲·錳鋅可濕性粉劑和10%烯酰嗎啉水乳劑對番茄晚疫病菌抑菌效果最好，抑菌率都在98%以上，而722 g/L霜霉威鹽酸鹽水劑次之，抑菌率為55.67%，10%苯醚甲環唑微乳劑最差，抑菌率為27.84%，10%烯酰嗎啉EW和72%霜脲·錳鋅WP對該病菌的抑菌率之間差異不顯著，但2種藥劑和其他2種殺菌劑的抑菌率之間差異極顯著(P<0.05)。

表4　4種殺菌劑對番茄早疫病菌抑菌效果

注：同列不同小寫字母表示差異顯著(P<0.01)，不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.05)

3討論與結論

對番茄晚疫病菌的分離培養在國內外早有研究，菜豆、燕麥、V8汁、馬鈴薯等培養基都有培養晚疫病菌的報道，番茄晚疫病菌在這幾種培養基上均可生長，在菜豆、V8汁、馬鈴薯培養基上的生長速度非常緩慢，在燕麥培養基上生長得快一些[16-18]。試驗表明，甘肅省蘭州市皋蘭縣高山村連作田中番茄的主要病害為早疫病和晚疫病，其病原菌分別為茄鏈格孢(Alternariasolani)和致病疫霉菌(Phytophthorainfestans)；番茄早疫、晚疫病病菌在番茄葡萄糖瓊脂培養基上生長最好；接種不同方式、番茄不同品種對晚疫病的抗性都存在一定差異，其中在有傷接種條件下番茄果實病斑擴展速度明顯快于無傷接種；巨霸最感病，德富次之；捷美153最抗病；室內藥劑篩選結果表明，10%苯醚甲環唑和72%霜脲·錳鋅對番茄早疫病菌抑菌效果最好，抑菌率分別為100%和98.35%；10%烯酰嗎啉和72%霜脲·錳鋅對番茄晚疫病菌抑菌效果最好，抑菌率分別為98.71%和100%。

番茄早疫、晚疫病是發生普遍而且較嚴重的病害,生產中對其主要進行綜合防治,應用科學栽培管理技術,加強田間管理,及時摘除病葉,尤其搞好田園的衛生、清理工作,創造適宜番茄生育的生態環境,在此基礎上應用藥劑防治,來提高防效,收到防病、保產的效果[19-21]。試驗僅對4種培養基對病原菌的培養情況、3種番茄品種的抗病性和4種藥劑對番茄晚疫病的室內抑菌作用進行了測定，對于其他培養基、番茄品種和藥劑對病原菌的培養情況、抗病性和抑菌作用等問題及各藥劑的田間防效等問題尚未涉及，有關這些問題還有待進一步探討。

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Identification on pathogen of two main tomato diseases and fungicides screening in laboratory

LU Zhong-yan,LIANG Qiao-lan,HE Wu-xue

(CollegeofPrataculturalScience,GansuAgriculturalUniversity/KeyLaboratoryofGrasslandEcosystem，MinistryofEducation/PrataculturalEngineeringLaboratoryofGansuProvince/Sino-U.S.CentersforGrazinglandEcosystemSustainability,Lanzhou730070,China)

Abstract：The main tomato diseases in continuous planting field were early blight and late blight by the field survey in Gaoshan Village，Gaolan County of Lanzhou City. The pathogens were identified as Alternaria solani and Phytophthora infestans. Tomato glucose agar medium was the best to culture tomato early and late blight pathogens. The inoculation methods and tomato varieties showed differences on resistance of tomato to late blight. The disease spot on injury fruit expaned faster than that of no injury fruit. Juba was more susceptible to Phytophthora infestans than Defu and Jiemei 153. Jiemei 153 was the best for resisting Phytophthora infestans.The best fungicdes against early blight were 10% difenoconazole and 72% cymoxanic·mancozeb and the inhibition ratios reached 100% and 98.35% respectively；10% dimethomorph and 72% cymoxanic·mancozeb showed the best inhibitory effect to late blight and the inhibition ratios were 98.71% and 100% respectively.

Key words：Alternaria solani;Phytophthora infestans；fungicides screened in laboratory

中圖分類號：S 436.412

文獻標識碼：A

文章編號：1009-5500(2016)01-0083-06

作者簡介：盧鐘彥(1989-),男,甘肅武威人，在讀碩士。

基金項目：甘肅省農業綜合開發項目“皋蘭縣蔬菜優質高產栽培技術示范與推廣(2013)”，皋蘭縣生物農藥示范推廣(2014年)資助

收稿日期：2015-03-02； 修回日期：2015-03-23

E-mail：1245376164@qq.com

梁巧蘭為通訊作者。