長春西汀納米脂質載體制備及制劑學性質研究①

張穎慧，平　洋，江　欣，繆月英，楊春榮

(佳木斯大學藥學院，黑龍江 佳木斯 154007)

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長春西汀納米脂質載體制備及制劑學性質研究①

張穎慧，平洋，江欣，繆月英，楊春榮

(佳木斯大學藥學院，黑龍江 佳木斯 154007)

摘要：目的:制備長春西汀納米脂質載體并考察其制劑學性質。方法:采用熔融-超聲法進行制備長春西汀納米脂質載體，采用透射電鏡和動態光散射法觀察納米粒的外觀和粒徑，DSC分析長春西汀在載體中的物理狀態。結果:制備的長春西汀納米脂質載體形態為球形或類球形，粒徑(89.33±3.05)nm、Zeta電位(-30.1±0.48)mV、包封率(94.16±3.35)%，DSC實驗顯示長春西汀納米脂質載體凍干樣品中長春西汀的特征吸收峰已消失。結論:熔融-超聲法制備的長春西汀納米脂質載體粒徑均一，包封率高。

關鍵詞：長春西汀；納米脂質載體；熔融-超聲法；制劑學性質

長春西汀(Vinpocetine, VIN)是從夾竹桃科小蔓長春花(Vinca minor L.)發現的吲哚類生物堿，作為腦循環代謝改善劑[1]，主要用于治療循環障礙性腦血管疾病如腦梗塞、腦出血后遺癥及腦動脈硬化癥等，治療效果顯著。但由于長春西汀存在肝臟首過效應，口服生物利用度極低，使其臨床應用受到了限制。納米脂質載體(Nanostructure lipid carrier, NLC)是從固體脂質納米粒(Solid lipid nanoparticles, SLN)基礎上發展而來的[2~4]，在固體脂質中加入了一定比例的液體脂質作為混合脂質，與SLN的單一固體脂質相比，NLC保留了SLN生理相容性好、毒性低、可控釋藥物等的優點，同時，也解決了SLN單一固態脂質形成有序的結晶結構，致使藥物貯存過程中造成載藥量低的缺陷。而NLC就是通過加液體脂質的加入，打破了原有的晶格結構，從而提高了載藥量，增加了藥物物理穩定性[5~7]。鑒于長春西汀口服生物利用度低的缺點，將其制備成制備長春西汀納米脂質載體(VIN-NLC)注射劑，考察其形態、粒徑分布、Zeta電位、包封率及DSC分析，力求為VIN-NLC的體外釋放[8]與體內研究提供實驗基礎。

1儀器及材料

UV-2550型紫外分光光度計(日本島津株式會社)，FA2004N電子天平(上海桓平科學儀器有限公司)，JY92-2D 型超聲波細胞粉碎機(寧波新芝科器研究所)，SALD-2201型激光粒度分布測定儀(日本島津株式會社)，Delsa 440SX Zeta Potential Analyzer(美國貝克曼公司)，DSC-5差熱分析儀(德國耐馳公司) ，JEM-1200EX型透射電鏡(日本電子公司)。

長春西汀( 東北制藥總廠)，單硬脂酸甘油酯(GMS，天津市博迪化工有限公司 )，豆磷脂(上海太偉藥業)，聚氧乙烯660-12羥基硬脂酸酯(Solutol HS15?，德國BASF)，辛酸/癸酸甘油酯(Miglyol?812，德國SASOL)，其它試劑均為分析純。

2方法

2.1VIN-NLC制備

取混合脂質水浴加熱至熔融，加入長春西汀混勻作為油相。取適量乳化劑加入注射用水中，超聲分散作為水相。將同溫度水相慢慢滴加入油相中分散成初乳，恒溫攪拌后進行超聲，室溫水冷卻固化，過濾。

2.2VIN-NLC 制劑學性質考察

2.2.1形態觀察

在噴碳銅網表面滴滿VIN-NLC混懸液，以2.0%磷鎢酸負染3min后，于透射電鏡下觀察形態。

2.2.2粒徑測定

取VIN-NLC稀釋到適當的濃度加入到樣品池中，用SALD-2201型激光粒度儀測定VIN-NLC的粒度分布。

2.2.3Zeta電位測定

取VIN-NLC稀釋到適當的濃度加入比色池中，用Delsa 440SX型Zeta電位儀測定VIN-NLC的Zeta電位。

2.2.4包封率與載藥量的測定

取0.5mL VIN-NLC置于超濾離心管(Microncon YM-10)上端，5000rpm離心10min，濾液用甲醇超聲定容；另取0.5mL VIN-NLC用甲醇定容超聲破乳，靜置，取上清液在274nm處進行紫外掃描，按下式計算包封率和載藥量：

式中Cfree為游離藥物濃度，Ctotal為混懸液中藥物總濃度；Wdrug為NLC中包封的藥物量，Wlipid為處方中混合脂質的質量。

2.2.5DSC分析

分別取VIN、GMS、物理混合物(VIN和混合脂質)、空白NLC和VIN-NLC的凍干樣品適量，空鋁坩鍋作參比，升溫速率10 ℃/min，進行DSC分析。

3結果與結論

3.1VIN-NLC的制備

取混合脂質(GMS+20% Miglyol?812)適量，75℃水浴加熱至熔融，將VIN加入混勻作為油相。取豆磷脂和Solutol HS15?適量加入20mL注射用水中作為水相。磁力攪拌下把同溫的水相滴加入油相中分散成初乳，滴加完畢后，攪拌5min。初乳600w下超聲8min，室溫水冷卻固化，過0.45μm微孔濾膜，即得VIN-NLC。

3.2VIN-NLC制劑學性質考察結果

3.2.1形態觀察

透射電子顯微鏡觀察VIN-NLC粒子呈球形或類球形，大小均勻，表面圓整，見圖1。

圖1　VIN-NLC透射電鏡掃描照片(×1500)

3.2.2粒徑測定

用激光粒度儀測定VIN-NLC的粒度分布，VIN-NLC呈單峰分布，粒徑為(89.33±3.05) nm，見圖2。

圖2　VIN-NLC粒徑分布

3.2.3Zeta電位測定

用Zeta電位測定儀測定了VIN-NLC的Zeta電位為(-30.1±0.48)mV，見圖3，結果表明粒子間不會發生聚集現象，初步判斷VIN-NLC穩定性良好。

圖3　VIN-NLC的Zeta電位

3.2.4包封率與載藥量的測定

由“2.2.4”項下實驗方法操作測得三批VIN-NLC的包封率和載藥量分別為(94.16±3.35)%和(3.30±0.12)%。

3.2.5DSC分析

分別對VIN、GMS、物理混合物、空白NLC和VIN-NLC進行DSC分析，由圖4可知， VIN特征吸收峰是155.3℃(curve a)，GMS特征吸收峰是60.6℃(curve b)，物理混合物中VIN吸熱峰減弱移至151.5℃(curve c)，圖中d是空白NLC，圖中e VIN-NLC凍干樣品中VIN的吸熱峰已消失，說明VIN被NLC成功包載。

圖4(a)VIN; (b)GMS; (c)物理混合物; (d)空白NLC; (e)VIN-NLC的DSC曲線

4討論

本實驗考察了離心超濾法、低溫超速離心法測定VIN-NLC包封率。結果顯示，使用低溫超速離心法分散液混濁不分層，不能將游離藥物與納米粒分離，故不采用低溫超速離心法。而離心超濾法測定VIN-NLC包封率的重現性良好，且超濾膜對VIN無吸附，最終確定離心超濾法測定VIN-NLC包封率。差示掃描量熱法(DSC)具有測試樣品用量少、方法靈敏、快速，廣泛應用于藥物物理狀態的分析。DSC實驗表明，VIN-NLC體系中液體脂質Miglyol812在納米粒骨架中破壞了規則的晶格結構，VIN進入混合脂質的缺陷晶格中以不規則結晶態或無定形存在，提高了NLC的載藥穩定性。

參考文獻:

[1]WU Li-ping, LI Tong-ling, JIA Yi-mi, et al. Determ ination of Primary Metabolite of Vinpocetine in Human Plasma by LC-M S/M S[J]. Chin Pharm J, 2010, 45(6):458-460

[2]Gonzalez ME, Nikolic S, Calpena AC, et al. Improved and safe transcorneal delivery of flurbiprofen by NLC and NLC-based hydrogels[J]. J PHARM SCI-US, 2012, 101(2):707-725

[3]王宏媛, 劉強, 楊春榮. 尼莫地平納米結構脂質載體的制備及大鼠體內藥動學[J]. 中國實驗方劑學雜志, 2013,16:178-182

[4]Rehab Nabil Shamma, Mona Hassan aburahma. Follicular delivery of spironolactone via nanostructured lipid carriers for management of alopecia[J]. Int J Nanomed, 2014,9:5451-5460

[5]Li Bei, Ge Zhi-Qiang. Nanostructured lipid carriers improve skin permeation and chemical stability of idebenone[J]. AAPS Pharm Sci Tech, 2012, 1(13):276

[6]李佳琳, 孟萍, 顏承云. 阿昔洛韋/賴氨酸殼聚糖納米粒的理化性質考察[J]. 黑龍江醫藥科學, 2012, 35(3): 21-22

[7]陳佳, 龔濤. 黃芪甲苷納米結構脂質載體凍干粉的制備及其初步質量評價[J]. 華西藥學雜志, 2011, 26(6): 530-533

[8]趙昱, 楊春榮, 王宏媛. 長春西汀納米結構脂質載體的體外釋放研究[J]. 黑龍江醫藥科學, 2012, 35(3): 25-26

(收稿日期：2015-10-28)

中圖分類號：R285.5

文獻標識碼：A

文章編號：1008-0104(2016)01-0138-02

作者簡介：張穎慧(1988~)女，黑龍江克山人，在讀碩士研究生通訊作者：楊春榮(1972~)女，黑龍江安達人，博士，教授，碩士研究生導師。 E-mail：yangchunrong98@163.com。