子宮頸腺癌高危型人乳頭狀瘤病毒p16INK4A蛋白表達情況

吳　波

(湖北省武漢市婦女兒童醫療保健中心 婦產科, 湖北 武漢, 430071)

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子宮頸腺癌高危型人乳頭狀瘤病毒p16INK4A蛋白表達情況

吳波

(湖北省武漢市婦女兒童醫療保健中心 婦產科, 湖北 武漢, 430071)

摘要:目的探討子宮頸腺癌高危型人乳頭狀瘤病毒(HR-HPV)感染檢測及p16INK4A蛋白表達的臨床意義。方法選取25例宮頸上皮內瘤變CINⅠ、30例CINⅡ、35例CINⅢ、24例浸潤性腺癌，同時選取35例正常宮頸組織(慢性炎癥)患者。采用免疫組織化學方法檢測組織中p16INK4A蛋白表達情況，并應用第二代雜交捕獲法(HC-2)對13種HR-HPV DNA進行檢測。結果宮頸上皮內瘤變CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ組織、浸潤性腺癌HR-HPV感染陽性率和p16INK4A蛋白表達陽性率均顯著高于正常宮頸細胞(P<0.05)；宮頸組織中HR-HPV感染陽性率與p16INK4A蛋白表達為顯著正相關性(P<0.05)。結論高危型人乳頭狀瘤病毒(HR-HPV)導致的宮頸惡化轉化與p16INK4A蛋白表達密切相關，采用p16INK4A與HR-HPV聯合診斷有利于提高子宮頸癌及CIN陽性預測值。

關鍵詞:子宮頸腺癌; 宮頸上皮內瘤變; 高危型人乳頭狀瘤病毒; p16INK4A蛋白

子宮頸癌包括鱗癌與腺癌[1]，子宮頸腺癌包括宮頸上皮內瘤變(CIN)、宮頸微浸潤腺癌、宮頸浸潤性腺癌。宮頸腺上皮良性病變與原位腺癌、浸潤性腺癌鑒別存在一定的困難，尤其是活檢病例，難度更大。p16INK4A蛋白是一種重要的抑癌基因，與高危型人乳頭狀瘤病毒有關，大部分子宮頸腺癌及上皮內瘤變的發生、發展與HPV感染、p16INK4A蛋白表達密切相關，可將p16INK4A作為診斷子宮頸癌變的重要指標[2]。本研究對本院收治的25例宮頸上皮內瘤變CINⅠ、30例CINⅡ、35例CINⅢ、24例浸潤性腺癌及35例正常宮頸組織者的臨床資料進行分析，探討子宮頸腺癌組織中HR-HPV感染及p16INK4A蛋白表達的情況，現報告如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2013年1月—2014年1月本院門診活檢及住院手術切除宮頸石蠟包埋組織149例，年齡20～67歲，平均年齡(34. 21±10.36)歲；病程1個月～14年，平均病程(3.54±0.52)年；宮頸上皮內瘤變CINⅠ25例，CINⅡ30例，CINⅢ35例，浸潤性腺癌24例，正常宮頸組織(慢性炎癥)35例。標本采集前，患者未接受相關化療、放療。5組患者一般資料比較無顯著差異(P>0.05)，具可比性。

1.2方法

1.2.1HR-HPV DNA檢測：采用第2代雜交捕獲法(HC-2)進行檢查，儀器由美國Digene公司提供，采樣刷在宮頸管中旋轉3周，保留10 s后取出，樣品采集需要在宮頸活檢和手術切除前進行。將采樣刷置于樣本轉移培養基保存液中，保存溫度為4 ℃, 嚴格按照試劑說明書進行，共檢測13種HR-HPV[3]。

1.2.2不同子宮組織中p16INK4A蛋白檢測：由美國Santa Cruz公司提供鼠抗人p16INK4A單克隆抗體，由北京中山生物技術有限公司提供SP免疫染色試劑盒。將p16INK4A一抗稀釋為1︰80, PBS液代替一抗作陰性對照，以陽性乳癌切片作為陽性對照。p16INK4A陽性染色呈黃色或棕黃色，胞漿、胞核著色，在400倍鏡下觀察切片，重點觀察10個代表性視野，計數500個中陽性細胞數，取平均值[4]。弱陽性(+)：陽性細胞10%～30%, 染色強度稍弱，少量細胞著色；中度陽性(2+): 陽性細胞30%～60%, 胞核和胞漿著色；強陽性(3+): 陽性細胞≥60%，胞核與胞漿均著色，細胞染色較深。陰性：陽性細胞<10%，染色強度與背景顏色無明顯差異。

1.3統計學方法

將本組研究數據收集整理后錄入Excel, 建立數據庫，在統計學軟件SPSS 18.0數據包中對研究數據做處理和分析，應用百分率[n(%)]描述計數資料，組間差異經卡方檢驗,P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1不同組織中HR-HPV檢查結果比較

CINⅠ、CINⅡ、CIN Ⅲ及浸潤性腺癌HR-HPV檢查陽性率無顯著差異(P>0.05), 但均顯著高于正常宮頸組織患者(P<0.05), 見表1。

表1　不同組織中HR-HPV檢查結果比較

與正常宮頸組織比, *P<0.05。

2.2不同組織中p16INK4A蛋白表達情況比較

CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及浸潤性腺癌p16INK4A蛋白表達陽性率顯著高于正常宮頸組織，CINⅡ、CINⅢ及浸潤性腺癌陽性率顯著高于CINⅠ(P<0.05)，3組患者陽性率比較無顯著差異(P>0.05)。CINⅠ與正常宮頸組織中p16INK4A以陰性表達為主，少量細胞胞核著色；其他3種組織以中、強陽性表達為主，為胞漿、胞核著色。見表2。

表2　不同組織中p16INK4A蛋白表達情況比較

與CINⅠ比, *P<0.05; 與正常宮頸組織比, #P<0.05。

2.3宮頸組織中p16INK4A蛋白表達與HR-HPV感染相關性分析

宮頸組織中HR-HPV感染陽性率與p16INK4A蛋白表達率呈正相關性(rs=0.565,P<0.05)，見表3。

表3　p16INK4A蛋白表達與HR-HPV感染相關性分析

3討論

子宮頸癌是臨床腫瘤科常見疾病，好發于30～55歲女性患者，臨床表現為陰道流血、尿頻、尿急、貧血、便秘、下肢腫脹、器官衰竭等，其發病原因和機制十分復雜，迄今尚未完全清楚，可能與病毒感染、性行為、分娩、營養不良、衛生條件差等因素有關[5]，直接影響患者正常生活與工作。人乳頭狀瘤病毒(HPV)是一種嗜上皮性病毒，在人和動物中廣泛分布，具有較高的特異性，可引起人類良性腫瘤與疣。生殖道感染HPV常見型為6、11、16、18，其中16、18屬于高危型人乳頭狀瘤病毒(HR-HPV)[6]，也是感染率最高的HPV型。數據[7]顯示，約99%宮頸癌組織中可以檢測出HPV16、18。當子宮頸受HPV16、18持續性侵襲感染時，將DNA整合在宿主細胞基因組中，病毒DNA上含有完整的E6、E7癌基因，其表達E6、E7原癌蛋白可引起自身調節，并導致宿主基因表達失調，干擾正常細胞周圍調控機制，使子宮頸上皮細胞出現惡變。HC-2陽性能反映出HR-HPV當前感染狀態，僅以HR-HPV感染陽性率對CIN和SCC進行篩查，可能導致誤診[8]。

本研究中，采用HC-2對13種HR-HPV DNA進行檢測，主要包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59及HPV68等，結果顯示CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ及浸潤性腺癌組織感染陽性率顯著高于正常宮頸組織(P<0.05), 提示當HR-HPV持續感染并整合入宿主細胞才可導致宮頸上皮惡化，一過性感染并不能引起CIN。在應用HC-2時，無法對HPV游離狀態、整合于宿主細胞進行鑒別，可見僅對HR-HPV感染進行檢測，CIN陽性預測值相對較低，對子宮頸癌篩查也存在一定的局限性。

p16INK4A是人體中重要的抑癌基因，在機體抗癌保護方面發揮著十分重要的作用。p16INK4A蛋白在宮頸上皮細胞惡性轉化前已出現[9]，在CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ、宮頸癌、宮頸炎組織中表達水平也不相同。隨著宮頸癌前病變進展，p16INK4A表達水平上升。盡管p16INK4A蛋白是一種抑癌基因，但其在子宮頸癌中表達水平較高，正常細胞受到相關因素干擾轉化為腫瘤細胞過程中，人體可通過大量分泌p16INK4A蛋白，抑制正常細胞癌變。另一方面，腫瘤細胞的“逃避機制”使p16INK4A蛋白起到“癌基因”的作用，進而出現腫瘤分級越高，p16INK4A表達水平就越高的現象。p16INK4A蛋白及產物在多數原發性癌細胞中缺失，但在HPV感染的子宮頸癌及癌前病變中表達水平較高[10]。本研究結果顯示，p16INK4A蛋白在CIN和浸潤性腺癌組織中陽性率高于正常宮頸組織，HR-HPV感染陽性率與p16INK4A蛋白表達率呈顯著正相關(P<0.05), 可作為HPV基因表達和活動的標志物，并作為子宮頸早期診斷的輔助指標。在臨床子宮頸癌診斷中，可以將HPV感染檢測和p16INK4A蛋白表達進行聯合篩查，大大提高子宮頸癌診斷準確性。

綜上所述，HR-HPV導致宮頸上皮惡性轉化與p16INK4A蛋白表達具有一定的聯系，p16INK4A可準確地鑒別子宮頸惡性與良性疾病，提高CIN陽性預測值，將p16INK4A表達與HR-HPV感染陽性率聯合檢測子宮頸癌，有利于提高診斷準確性。

參考文獻

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Expression of p16INK4A protein in cervical adenocarcinoma patients with high-risk human papilloma virus

WU Bo

(DepartmentofGynecologyandObstetrics,WuhanMaternalandChildrenMedicineCareCenter,Wuhan,Hubei, 430071)

ABSTRACT:ObjectiveTo explore detection of high-risk human papilloma virus (HR-HPV) infection and expression of p16INK4A protein in patients with cervical adenocarcinoma. MethodsTwenty five cases of cervical intraepithelial neoplasia CIN Ⅰ, 30 cases of CIN Ⅱ, 35 cases of CIN Ⅲ, and 24 cases of infiltrating adenocarcinoma as well as 35 cases of normal cervical tissue (with chronic inflammation) were selected and detected by immunohistochemical method for expression of p16INK4A protein and the second generation of hybrid capture technique (HC-2) for DNA in 13 types of HR-HPV. ResultsThe positive infectious rates of HR-HPV and positive expression rates of p16INK4A protein in cervical intraepithelial neoplasia CIN Ⅰ, CIN Ⅱ, CIN Ⅲ tissues and infiltrating adenocarcinoma tissues were significantly higher than those in the normal cervical cells (P<0.05). Positive rate of HR-HPV infection was positively correlated with p16INK4A protein expression in cervical tissues (P<0.05). ConclusionCervical deterioration caused by HR-HPV is closely related with p16INK4A protein expression, and the combined diagnosis of p16INK4A protein and HR-HPV can improve the positive predictive values of cervical cancer and CIN.

KEYWORDS:cervical adenocarcinoma; cervical intraepithelial neoplasia; high-risk human papilloma virus; p16INK4A protein

中圖分類號:R 737.33

文獻標志碼:A

文章編號:1672-2353(2016)05-100-03

DOI:10.7619/jcmp.201605030

收稿日期:2015-12-10