臍血干細胞移植對腦卒中后遺癥病人康復療效及血液NSE、NGF水平的影響

唐　映 ，楊萬章 ，劉杰文， 冉春風

1．廣東省深圳市第九人民醫院(深圳 518116)；2．廣東省深圳市第六人民醫院；3．廣東省深圳市第五人民醫院

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臍血干細胞移植對腦卒中后遺癥病人康復療效及血液NSE、NGF水平的影響

唐映1，楊萬章2，劉杰文3， 冉春風1

1．廣東省深圳市第九人民醫院(深圳 518116)；2．廣東省深圳市第六人民醫院；3．廣東省深圳市第五人民醫院

摘要：目的觀察臍血干細胞移植移后腦卒中后遺癥病人康復療效及血液神經元特異性烯醇化酶(NSE)、神經營養因子(NGF)的變化。方法將符合納入標準的腦卒中后遺癥病人60例，按隨機方法分為治療組和對照組，各30例。治療組采用臍血干細胞聯合常規康復治療，對照組單獨采用常規康復治療。觀察治療1月后，Fugl- Meyer運動功能評分及外周血NSE、NGF水平變化。結果兩組病人治療1月后，治療組Fugl- Meyer評分較對照組明顯升高，差異有統計學意義 (P<0．05)，兩組病人血液NSE濃度變化不明顯，差異無統計學意義(P>0．05)，NGF濃度治療組較對照組明顯升高，差異有統計學意義 (P<0．05)。結論臍血干細胞移植治療腦卒中后遺癥病人有良好療效。

關鍵詞：腦卒中后遺癥；臍血干細胞；神經元特異性烯醇化酶；神經營養因子

隨著老齡化人口的增加，腦卒中的發病率越來越高，腦卒中是現代成人致殘的第一原因。隨著現代醫學科技的發展，臍血干細胞應用越來越廣泛，開始成為治療腦卒中后遺癥病人的手段之一。神經元特異性烯醇化酶(NSE)是參與糖酵解途徑的烯醇化酶，神經元特異性烯醇化酶的水平變化與腦損傷呈正相關，即神經元損傷的范圍和程度越重，血液中的神經元特異性烯醇化酶越高[1]。神經營養因子(NGF)是近年來在神經再生、損傷修復領域內的研究熱點。腦神經細胞的損傷程度與NGF的表達水平密切相關，NGF水平增高不但能夠提高神經元的抗損傷能力，還具有促進損傷神經再生和修復的作用[2]。本研究觀察臍血干細胞移植后對腦卒中后遺癥病人的康復療效及NSE、NGF水平變化。

1資料與方法

1．1臨床資料回顧分析深圳市第六人民醫院2006年6月—2008年1月治療的腦卒中恢復期病人60例，經醫院倫理委員會審核通過，并病人及家屬知情同意。病人分別來自中國、美國、英國、加拿大、意大利等國家。所有病人均知情同意及根據其自愿選擇治療方案隨機分為治療組(臍血干細胞移植組)和對照組(常規康復治療組)，每組30例。兩組性別、卒中分型例數、年齡、病程，差異無統計學意義(P>0．05)，具有可比性。詳見表1。

表1　兩組病人一般情況比較(±s)

1．2入選標準符合1995年全國第四屆腦血管病的診斷標準，經顱腦CT或MRI確診的出血性或缺血性腦卒中初次發病者，均存在肢體運動功能障礙，年齡42歲～70歲，病程超過6個月且在2年之內，意識清楚，生命體征穩定。

1．3排除標準伴有嚴重心、腦、腎等重要臟器疾病；既往有癡呆、精神病史者。

1．4臍血干細胞來源臍血干細胞由深圳北科生物技術有限公司提供，均為臍血源的神經干細胞。干細胞來自健康分娩孕婦的臍帶血，經分離、提取、培養、擴增及向神經干細胞誘導傳代(4～6)代。每份細胞數量約1×107/mL～1．5×107/mL，其中約80%間質干細胞，20%神經前體細胞。

1．5方法對照組常規康復治療方法。常規康復治療方法包括：運動訓練、手功能訓練、言語訓練、作業治療、針灸、神經肌肉電刺激、電子生物反饋。臍血干細胞移植組：在常規康復治療方法上加臍血干細胞移植治療。臍血干細胞移植方法及療程：腰椎穿刺腦脊液循環途徑(鞘內注射)。每例病人取左側屈膝位，定位L3/4或L2/3椎間隙，局部消毒，鋪洞巾，用2%利多卡因穿刺點局部浸潤麻醉，然后用9號腰椎穿刺針進針，由椎間隙進硬膜外腔，再繼續進針至有落空感時，抽出針芯，每例病人用2 mL注射器向蛛網膜下腔推注臍血干細胞懸液(1．0～2．0)mL，細胞數(3．0～4．0)×1010/L，術后去枕平臥6 h。每5 d移植1次，4次為1個療程。

1．6評定指標

1．6．1運動功能評定利用Fugl- Meyer(Fugl- Meyer Assessment， FMA) 運動功能評定量表評定康復治療前后的運動功能。該方法總分 100 分， <50 分為嚴重運動障礙(Ⅰ級)； 50分～84 分明顯運動障礙(Ⅱ級)； 85分～95 分中度運動障礙(Ⅲ級)；96分～99分輕度運動障礙(Ⅳ級) 。

1．6．2血液NSE 、NGF測定治療前及治療30 d后抽取外周血(3～4)mL，分離出血清后置-80℃冰箱保存備用。NSE、NGF均采用酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測， 試劑盒由美國Rapidbio公司提供。具體操作步驟見試劑盒說明書。

2結果

兩組病人治療1月后，治療組功能障礙程度， 由治療前Ⅰ級～Ⅱ級， 進步為Ⅱ級～Ⅲ級， Fugl- Meyer評分較對照組明顯升高，差異有統計學意義(P<0．05)。詳見表2。

表2　兩組病人治療前后

兩組病人血液NSE濃度變化不明顯，差異無統計學意義(P>0．05)，NGF濃度治療組較對照組明顯升高，差異有統計學意義 (P<0．05)。詳見表3。

表3　兩組血液NSE與NGF濃度比較(±s)

3討論

腦血管病是當代社會中發病率高、病殘率高的疾病之一，急性期過后往往遺留有不同程度的口眼歪斜、半身不遂及語言不利等癥狀，給社會和家庭帶來沉重負擔，如何降低其致殘率，提高生活自理能力，重返家庭和社會。康復醫學界不斷在探索的難題，除傳統藥物治療外，目前最常采取的手段是現代康復與傳統康復的綜合應用，包括運動、言語訓練、神經生物電刺激、針灸、理療等治療促進神經功能恢復，取得了一定的療效。腦血管病后遺癥期恢復進展緩慢，治療周期時間長，應用臍血干細胞移植治療配合常規的康復訓練取得了滿意的效果。

臍血干細胞來源豐富，采集方便，其中的間充質干細胞， 其體外擴增能力、細胞原始性均高于骨髓， 并可向神經細胞分化。臍血干細胞移植已經應用在白血病、腫瘤、免疫系統缺陷疾病、腦癱、腦和脊髓損傷的疾病治療中。大量的動物模型實驗證實臍血干細胞移植可以明顯改善神經損傷的進展。如腦卒中、肌萎縮、帕金森病、阿爾茨海默病及脊髓損傷，目前已經有誘導臍血干細胞向受損的神經組織分化的臨床試驗[3]。應用臍血干細胞移植治療腦出血病人，神經功能得到明顯改善，證實急性期腦出血病人的移植優于后遺癥病人[4]。急性期病人病情大多尚未平穩，恢復的程度充滿希望，很多病人和家屬往往在后遺癥期才考慮同意臍血干細胞移植手段。

NSE是神經元損傷的特性性標志，NSE 可作為判斷腦血管病病人病情嚴重程度、臨床轉歸及預后的重要生化指標，監測血清或腦脊液中NSE含量可以作為腦組織損傷和水腫程度以及評估神經功能缺損程度的臨床判斷指標[5-6]。臍血干細胞除了干細胞都具有的自我更新分化潛能以外，還能夠分泌某些神經營養因子，神經營養因子是一類對神經元的發育存活和凋亡起重要作用的蛋白質，其成員包括NGF，只有神經營養因子持續存在，才能保證神經節細胞的正常功能[7-9]。

本研究應用臍血干細胞移植治療腦卒中后遺癥病人取得了良好療效，通過臍血干細胞移植治療的腦卒中后遺癥病人，對比單獨接受常規康復訓練的病人，神經損傷功能障礙程度下降，Fugl- Meyer評分明顯提高。移植后病人外周血NSE變化不明顯，考慮神經元細胞的損傷在腦卒中后遺癥期已基本穩定，變化不明顯，且觀察時間短，短期內變化不大。臍血干細胞能促進神經營養因子的分泌，提高神經細胞周圍神經營養因子的含量，因此移植后NGF的含量較前是增高的，能保證瀕死神經元細胞的營養，支持神經元的營養存活，進一步證實了臍血干細胞移植具有改變中樞神經損傷的局部環境，并幫助損傷的神經再生，還能幫助部分損傷的神經恢復局部功能[10]。

本研究考慮臍血干細胞移植后促進了神經元細胞的分化、再生，加上不斷分泌的神經生長因子，加速了神經細胞的生長和修復，加快了神經損傷的恢復，提高了肢體運動功能。這為腦卒中后遺癥病人的治療提供了一種新途徑，也為神經系統疾病的治療提供了新的探索方法。

參考文獻：

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[2]章顯寶，汪瑛，王震，等．項叢刺針法對缺血性腦卒中后遺癥大鼠BDNF、NGF以及神經行為學的影響[J]．上海針灸雜志，2014，33 (2)：181-184．

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[4]李秀云，張國華．臍血干細胞移植治療腦出血的療效分析[J]．中華全科醫學，2011，9(11)：1724-1725．

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[10]陳嫁婧，李治．臍血干細胞治療腦卒中的作用機制[J]．中國醫藥指南，2013，11(11)：66-67．

(本文編輯王雅潔)

Effects of Umbilical Cord Blood Stem Cells Transplantation on Rehabilitation，and the Levels of NSE and NGF in Patients with Stroke Sequela

Tang Ying，Yang Wanzhang，Liu Jiewen，Ran Chunfeng

The Ninth People's Hospital of Shenzhen，Shenzhen 518116，Guangdong，China Corresponding Author：Liu Jiewen(The Fifth People’s Hospital of Shenzhen，Shenzhen，Guangdong，China)

Abstract：ObjectiveTo observe the effects of umbilical cord blood (UCB) stem cells transplantation on rehabilitation，and the levels of neuronspecific enolase(NSE) and nerve growth factor (NGF) in patients with stroke sequela．MethodsSixty patients with stroke sequela were randomly divided into two groups：The control group(n=30) treated with routine rehabilitation treatment，and the treatment group(n=30)treated with UCB stem cells transplantation plus routine rehabilitation treatment．After one month of treatment，the Fugl-Meyer motor function score and the levels of peripheral blood NSE，NGF were observed．ResultsAfter one month treatment， the Fugl- Meyer score in treatment group was higher than that in control group(P<0.05).The NGF concentration in treatment group was significantly higher than that in control group(P<0.05)．Conclusion UCB stem cells transplantation has effect on stroke sequela.

Key words：stroke sequela；umbilical cord blood stem cells；neuronspecific enolase；nerve growth factor

(收稿日期：2015-06-10)

中圖分類號：R743R255

文獻標識碼：A

doi：10．3969/j．issn．1672-1349．2016．05．010

文章編號：1672-1349(2016)05-0481-03

通訊作者：劉杰文，E-mail：fengqin361@163．com