速胰康片劑對急性胰腺炎小鼠血清白細胞介素-6的影響①

李　思，王　歆，沈德鳳

(佳木斯大學藥學院，黑龍江省生物藥制劑重點實驗室，黑龍江 佳木斯 154007)

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速胰康片劑對急性胰腺炎小鼠血清白細胞介素-6的影響①

李思，王歆，沈德鳳

(佳木斯大學藥學院，黑龍江省生物藥制劑重點實驗室，黑龍江 佳木斯 154007)

摘要：目的：探討速胰康片劑對急性胰腺炎(AP)小鼠血清白細胞介素-6(IL-6)的影響，為其臨床應用提供理論性基礎和實驗性數據。方法：采用腹腔注入20%中性L-精氨酸溶液制備AP模型，采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)測定各實驗組的小鼠血清IL-6水平。結果：通過腹腔注入20%中性L-精氨酸溶液造模成功。高劑量治療組和中劑量治療組在各時間段的血清IL-6水平與AP模型組的相比顯著減少(P<0.05，P<0.01)。低劑量治療組和陽性對照組在72h時的血清IL-6水平相比于AP模型組也明顯降低(P<0.05)。除此之外，治療組在其他時間段的血清IL-6水平相比于AP模型組也均有所降低。結論：速胰康片劑能顯著降低急性胰腺炎小鼠血清IL-6含量，減緩急性炎癥。在治療AP，緩解病情，減輕痛苦等方面具有積極作用。

關鍵詞：速胰康片劑；急性胰腺炎；白細胞介素-6

急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)是臨床常見的急癥，具有起病急、進展快、病情危重、并發癥多、病死率高等特點[1]。傳統醫學對AP的治療具有較深入的研究基礎和悠久的使用歷史，中藥復方制劑治療AP不僅價格低廉、不良反應少，而且可通過多途徑、多靶點發揮作用，避免嚴重并發癥的出現，治療效果顯著[2,3]。速胰康片劑是采用臨床醫生經驗處方，設計的中藥復方制劑，成分主要為大黃、梔子、厚樸、半夏等中藥及其提取物等，具有毒副作用小，治療費用較低等特點。從之前的研究工作中可知[4]，速胰康片劑能夠有效地降低小鼠的血清淀粉酶(AMS)活性及腸組織腫瘤壞死因子(TNF-α)水平。本研究在之前的工作基礎上進一步探討速胰康片劑對小鼠急性胰腺炎白細胞介素-6的影響，為其臨床應用提供理論性基礎和實驗性數據。

1實驗材料

1.1實驗動物及分組

1.1.1實驗動物：挑選符合標準的雄性昆明種小鼠180只(動物號：黑動字99102001；來源地：佳木斯大學實驗動物中心)，每只小鼠重為19~23g。

1.1.2分組：運用統計學將288只小鼠按隨機原則分為6組，分別為正常對照組、AP模型組、陽性對照組、速胰康片劑高劑量治療組、中劑量治療組、低劑量治療組，每組48只小鼠。

1.2藥品

實驗室自制的速胰康片劑，成分主要為大黃、梔子、厚樸、半夏等中藥及其提取物等。

1.3試劑及儀器

L-精氨酸(森弗生物技術有限公司)；IL-6檢測試劑盒(Sigma公司)；AMS試劑盒(南京建成生物工程研究所)；超速冷凍離心機(北京中西泰安技術服務有限公司)。

2實驗方法

2.1AP模型的制備

將小鼠組禁食(不禁水)12h后腹腔注入20%的中性L-精氨酸溶液3g/kg體重，間隔1h后再注入一次，誘導急性胰腺炎小鼠模型[5]。

2.2各實驗組準備

①AP模型組(陰性對照組)處理如上；②正常對照組：腹腔注入等量無菌生理鹽水；③治療組：采用等容積不同濃度藥液灌胃給藥10mL/kg體重(每10mL藥液中藥物的含量分別為1.71g(高劑量)、0.86g(中劑量)、0.43g(低劑量))，每6小時一次，3d預處理后給以L-精氨酸溶液(方法同AP模型組)，注入后繼續按預處理方式給藥直至處死；④陽性對照組： 10%大黃溶液浸膏0.11g/kg體重灌胃給藥，每6小時一次，3d預處理后給以L-精氨酸溶液(方法同AP模型組)，注入后繼續按預處理方式給藥直至處死。

2.3指標檢測

2.3.1AMS活性檢測:注入L-精氨酸溶液后，對小鼠在0、6、12、24h時選取眼眶取血，并將血液置于超速冷凍離心機中離心15min(10000r/min)，取出血清部分，并保存在-20℃冰箱內備用。采取碘-淀粉比色法檢測AMS活性，依照AMS試劑盒使用規范認真操作并詳細記錄數據。

2.3.2小鼠存活率:各實驗組準備完畢后，分別于6、12、24h觀察各實驗組動物的存活情況和死亡情況并進行記錄，計算各實驗組的總存活率。

2.3.3白細胞介素-6含量的檢測:各實驗組處理完后，對各組小鼠在12、24、48、72h選取眼眶取血，并將血液置于超速冷凍離心機中離心15min(10000r/min)，取出血清部分，并保存在-20℃冰箱內備用。采用酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測IL-6水平，嚴格按規范要求進行操作并詳細記錄數據，單位為ng/L。

2.4統計學方法

3結果

3.1AMS活性

AMS的活性變化見表1。使用L-精氨酸溶液誘導小鼠AP模型后， AP模型組在6、12、24h的AMS活性相比于正常對照組顯著上升(P<0.01)，而且隨著時間的延長，AMS活性逐漸升高，在12h時達到最高值，AP小鼠建模成功。

表1　小鼠血清淀粉酶(AMS)測定±s)

與正常對照組比較，##P<0.01。

3.2各實驗組小鼠存活率及及死亡率

各實驗組小鼠在處理完畢后6、12、24h時的存活狀態如表2所示。高劑量治療組的小鼠在6h、12h、24h的存活率分別為94.4%、77.6%、73.0%，總生存率為83.33%，相比于AP模型組的72.92%，小鼠生存率有明顯的提高。中劑量治療組、低劑量治療組以及陽性對照組除了在6h時死亡率較高外，其余各時間小鼠的累計生存率都高于AP模型組，分別達到79.17%、77.08%、77.08%，正常對照組全部存活。而且隨著治療量的增加，小鼠總生存率逐漸升高，生存時間也有所增加。

3.3血清IL-6水平

血清IL-6水平變化見表3。高劑量治療組和中劑量治療組在各時間段的血清IL-6水平與AP模型組的相比顯著減少(P<0.05，P<0.01)。低劑量治療組和陽性對照組在72h時的血清IL-6水平相比于AP模型組也明顯降低(P<0.05)。除此之外，治療組在其他時間段的血清IL-6水平相比于AP模型組也有所降低，說明通過服用速胰康片劑能明顯抑制血清IL-6水平的升高。

表2　小鼠存活情況

表3　小鼠血清IL-6水平檢測

括號內為各組進行實驗小鼠數目，與正常對照組比較，##P<0.01，#P<0.05，與AP模型組比較，**P<0.01，*P<0.05。

4討論

IL-6是一種重要的急性反應期炎癥遞質，主要由活化的單核巨噬細胞產生，血清IL-6水平能很好地評估急性胰腺炎的嚴重程度，可作為預測急性胰腺炎疾病程度的重要指標[6]。在本實驗研究中，相比于正常對照組，AP模型組的小鼠血清IL-6水平明顯升高，且有部分小鼠死亡，小鼠存活時間明顯降低，但通過速胰康片劑灌胃給藥之后可以發現小鼠血清IL-6水平明顯下降或者被抑制，存活率以及存活時間明顯提高，這說明通過服用速胰康片劑有助于抑制血清IL-6水平的升高，可有效抑制釋放炎癥介質，阻斷其發病環節，對防治AP有積極作用，在緩解病情，提高存活時間以及存活率有較大幫助。同時速胰康片劑是采用臨床醫生經驗處方，設計的中藥復方制劑，成分主要為大黃、梔子、厚樸、半夏等中藥及其提取物等，具有毒副作用小，治療費用較低等特點，而且已知能夠有效地降低小鼠的血清淀粉酶(AMS)活性及腸組織腫瘤壞死因子(TNF-α)水平。因此，使用速胰康片劑治療AP能夠有效地抑制AP病情的惡化，減輕痛苦，降低治療費用，有助于AP患者早日康復。

參考文獻:

[1]耿佳穎,李美玲,韓桂華,等.急性胰腺炎的臨床護理體會[J]. 黑龍江醫藥科學, 2015, 38(2): 106-107

[2]中華中醫藥學會脾胃病分會.急性胰腺炎中醫診療專家共識意見[J]. 中華中醫藥雜志,2013,28(6):1826-1831

[3]王小全,艾迎春.丹參注入液對于急性胰腺炎大鼠血清中NF-κB、TNF-α、IL-6的影響[J]. 黑龍江醫藥科學, 2015, 38(2):58-60

[4]沈德鳳,張浩,周海瑞,等. 速胰康顆粒對小鼠急性胰腺炎的作用研究[J]. 中國民康醫學, 2012, 24(1): 16-20

[5]白金霞,白金運,石秀菊,等. IL-22介導的STAT3信號通路對急性重癥胰腺炎小鼠的保護作用[J]. 山東大學學報, 2015, 53(6):1-6

[6]聶軍. 血清促炎細胞因子白介素-6與急性胰腺炎嚴重程度的相關性[J]. 世界華人消化雜志, 2015, 23(17): 2816-2819

The research on the influence of SYK on serum IL-6 levels in mices with acute pancreatitis

LISi,WANGXin,SHENDe-feng

(The Medicine College of Jiamusi University, Key Laboratory of Biological Medicine Preparations, Heilongjiang Province, Jiamusi 154007, China)

Abstract:Objective: To study the influence of SYK on serum IL-6 levels in mices with acute pancreatitis on the basis of previous researches; to provide theoretical basis and experimental data for clinical application. Methods: AP model was made by injecting 20% neutral L-arginine, the serum IL-6 levels of the experimental group and the control group was determined by ELISA. Results: Successful AP model was made by injecting 20% neutral L-arginine. Each dose of SYK could reduce the serum IL-6 levels in mice. Compared with AP model group, the serum IL-6 levels of high dose group and medium dose group were significantly reduced each time (P<0.05,P<0.01). The serum IL-6 levels of low dose group and positive control group at 72h were also significantly reduced. In addition, the serum IL-6 level of treatment group in other periods were also decreased. Conclusions: SYK could effectively reduce the serum IL-6 levels in mice with acute pancreatitis, and have a positive effect in the treatment of AP, remission of disease, relieving the pain and so on.

Key words:SYK; acute pancreatitis; IL-6

(收稿日期：2015-07-30)

中圖分類號：R576

文獻標識碼：A

文章編號：1008-0104(2016)01-0047-02

作者簡介：李思(1991~)男，黑龍江伊春人，在讀碩士研究生。通訊作者：沈德鳳(1960~)女，黑龍江佳木斯人，學士，教授，碩士研究生導師。E-mail：shenjms@163.com。

基金項目：1.佳木斯大學研究生科技創新項目，編號：ML2014_061；2.黑龍江省科技廳科技攻關項目，編號：GC12C114。