藏藥十味乳香散鎮痛抗炎及抗痛風性關節炎作用※

寇毅英，王利彥，李瑞蓮，李永芳，韻海霞

(青海大學醫學院，青海 西寧 810001)

藏藥十味乳香散鎮痛抗炎及抗痛風性關節炎作用※

寇毅英，王利彥，李瑞蓮，李永芳，韻海霞

(青海大學醫學院，青海 西寧 810001)

目的 觀察藏藥十味乳香散鎮痛、抗炎、抗痛風性關節炎的作用。方法 本實驗采用經典疼痛動物模型小鼠熱板法及小鼠醋酸扭體法評價藏藥十味乳香散的鎮痛作用；采用二甲苯致小鼠耳廓腫脹法、醋酸致毛細血管通透法及尿酸鈉晶體致大鼠急性痛風性關節炎法觀察十味乳香散的抗炎及抗痛風作用。結果 藏藥十味乳香散明顯減少醋酸致小鼠扭體反應次數(P<0.05或P<0.01)，并且十味乳香散高劑量組抑制率達到57%，但十味乳香散各劑量組并不能顯著延長小鼠熱痛閾值(P>0.05)。低、中、高劑量的十味乳香散對二甲苯引起的小鼠耳廓腫脹，對尿酸鈉晶體誘導的大鼠關節炎的腫脹均有明顯的抑制作用(P<0.05或P<0.01)，但對醋酸引起的毛細血管通透增加抑制并不顯著(P>0.05)。結論 藏藥十味乳香散具有抗炎和抗痛風性關節炎作用，其鎮痛作用還有待證實。

十味乳香散 抗炎 鎮痛

藏藥十味乳香散由乳香、木香、寬筋藤、決明子、訶子等十味藏藥組成。《四部醫典》 記載其具有祛風燥濕、干黃水之功效，傳統用于風濕性關節炎、痛風引起的關節紅腫疼痛、黃水過盛所致皮膚濕疹[1，2]。十味乳香散是藏醫經典古方，歷史悠久，目前對十味乳香散的藥理學研究未見報道。本實驗應用小鼠熱板法和小鼠醋酸扭體法觀察十味乳香散的鎮痛作用；二甲苯致小鼠耳廓腫脹法、醋酸致毛細血管通透法及尿酸鈉晶體(MSU)致大鼠急性痛風性關節炎法觀察十味乳香散的抗炎及抗痛風作用。為進一步應用和研究十味乳香散提供藥理學依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥物

將十味乳香散[乳香(250 g)、決明子(250 g)、黃葵子(250 g)、木香(250 g)、巴夏嘎(70 g)、訶子(250 g)、毛訶子(250 g)、余甘子(250 g)、寬筋藤(250 g)、渣馴膏(250 g)]粉碎成細粉，過篩，混勻后備用，由青海省藏醫院制備。低、中、高十味乳香散劑量組混懸液的制備按照成人每公斤體重用量的10、20、30倍(即0.3 g/kg、0.6 g/kg、0.9 g/kg，成人的推薦劑量為每日2.1 g，)配置。配置用蒸餾水。

1.1.2 動物

清潔級昆明種小鼠，體質量22±2 g；SD大鼠，體質量220±20 g，由蘭州大學醫學院提供(動物合格證號：SCXK-2009-0004)。動物購得后于實驗前一周予自由飲食，自然光照，溫度和濕度保持在24 ℃～22 ℃和50%。根據地方和國家倫理委員會的建議，在進行實驗時盡可能減少對動物的傷害。

1.1.3 儀器設備

智能熱板儀(淮北正華生物儀器設備有限公司)；DU800分光光度(Beckman)；ML203/02電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 小鼠熱板法鎮痛試驗

按照文獻方法[3，4]，篩選熱痛閾值5 s～30 s雌性小鼠50只。動物隨機分為五組，每組10只，分別為模型組(生理鹽水)，十味乳香散低、中、高劑量組(0.3 g/kg、0.6 g/kg、0.9 g/kg)，吲哚美辛組(3 mg/kg)，各組小鼠給藥前測其基礎痛閾值。灌胃給藥，每天1次，連續7 d，于末次給藥后分別測定給藥后30、60、120、180、240 min 小鼠的熱痛閾值。

1.2.2 小鼠醋酸扭體法[3，4]試驗

雄性小鼠分組及給藥同2.1。每天晨時灌胃給藥，每天1次，連續7 d，于末次給藥1 h后，腹腔注射(ip)0.6%醋酸溶液0.1 mL/鼠，觀察并記錄注射后15 min內小鼠的扭體反應次數，以小鼠腹部內凹、后肢伸張、臀部高起為扭體特征作為疼痛反應指標，并計算抑制率。抑制率(%)=(模型組扭體次數一給藥組扭體次數)/模型總扭體次數×100%。

1.2.3 醋酸致小鼠毛細血管通透性增加[4]試驗

將雄性小鼠隨機分為5組(n=10)，即模型組(生理鹽水)，十味乳香散小、中、大劑量組(0.3 g/kg、0.6 g/kg、0.9 g/kg)，地塞米松組(0.02 g/kg)，各組分別灌胃給藥連續7 d。末次給藥后1 h，尾靜脈注射0.5%伊文思蘭溶液0.1 mL/10 g，隨即腹腔注射0.6%醋酸0.1 mL/10 g，30 min后脫頸椎處死，腹腔注射5 mL生理鹽水，輕揉腹部，剪開腹腔，用吸管吸出洗滌液，離心(3000 r/min)10 min，取上清液于590 nm波長處測吸光度A值。

1.2.4 二甲苯誘導小鼠耳廓腫脹法[5，6]試驗

將雄性小鼠隨機分為5組(n=10)，分組及給藥方法同2.1。于末次給藥后1 h，將二甲苯均勻涂布于各鼠右耳的正反面，以左耳作對照，1 h后脫頸處死，并沿耳廓基線剪下兩耳，用直徑9 mm的打孔器分別在同一部位打下圓耳片，用電子天平稱重，以耳廓腫脹度(右耳的重量減去左耳質量差值)作為炎癥指標，計算抑制率。抑制率(%)=(模型組腫脹度-給藥組腫脹度)/模型組腫脹度×100%。

1.2.5 尿酸鈉晶體致大鼠急性痛風性關節炎[7，8]試驗

將雄性大鼠隨機分為6組(n=10)：正常組，模型組，十味乳香散低、中、高劑量，吲哚美辛組。正常組和模型組灌胃以生理鹽水；十味乳香散低、中、高劑量組灌胃以低、中、高的十味乳香散(0.3 g/kg、0.6 g/kg、0.9 g/kg)；吲哚美辛組灌胃以吲哚美辛(3 mg/kg)。每天1次，連續7 d。末次給藥1 h后，用20%烏拉坦(0.5 mL/100 g)麻醉，背位固定雙側前肢，將大鼠雙側后腿膝關節周圍拔毛，醫用酒精消毒皮膚，輕度彎曲膝關節，經關節正中進針，將50 μL尿酸鈉晶體溶液(20 mg/mL)通過髕上韌帶注入模型組，十味乳香散小、中、大劑量組，吲哚美辛組大鼠膝關節腔。正常對照組雙側膝關節腔注射50 μL無菌1%PBS。于致炎前用游標卡尺測定大鼠膝關節周長，并于致炎后0.5、1、2、4、6、8、12、24 h測定大鼠膝關節周長，測定腫脹度(致炎后膝關節周長-致炎前膝關節周長)。

1.2.6 統計學方法

2 結果

2.1 小鼠熱板法鎮痛實驗(表1)

表1 藏藥十味乳香散對小鼠熱板痛域的影響

表1顯示，小鼠熱痛域值不同時間點有顯著性差異(F=15.396，P=0.000)，但時間因素和藥物處理組并無交互效應(F=0.986，P=0.496)，并且各藥物處理組間無統計學意義(F=1.621，P=0.112)，說明陽性藥物吲哚美辛及低、中、高劑量十位乳香散不能明顯延長小鼠熱痛域值。

2.2 小鼠扭體反應實驗(表2)

表2 藏藥十味乳香散對醋酸致小鼠扭體反應的影響

#與模型組比較P<0.05，##P<0.01.

表2顯示，低、中、高劑量的十位乳香散，和陽性藥物吲哚美辛均能抑制醋酸引起小鼠發生扭體反應的次數(F=10.149，P=0.000)，抑制率分別為31%、31%、57.1%、59.5%。

2.3 小鼠耳廓腫脹實驗(表3)

表3 藏藥十味乳香散對二甲苯誘導小鼠耳廓腫脹的影響

#與模型組比較P<0.05.

表3顯示，與模型組比較，吲哚美辛組，十味乳香散低、中、高劑量組均顯著抑制二甲苯誘導的小鼠耳廓腫脹度，抑制率分別為36.5%、31.7%、33.3%、34.9%，數據統計均有顯著性差異(F=2.495，P=0.044)。

2.4 小鼠毛細血管通透性實驗(表4)

表4 藏藥十味乳香散對醋酸致小鼠毛細血管通透性增加的影響

#與模型組比較P<0.05.

表4顯示，與模型組比較，地塞米松可顯著降低醋酸引起的小鼠毛細血管通透性增加，而十味乳香散各劑量組均未能顯著抑制，差異無統計學意義(F=0.381，P=0.887)。

2.5 大鼠急性痛風性膝關節炎實驗(表5)

表5 藏藥十味乳香散對MSU致大鼠急性痛風性膝關節炎關節腫脹度影響

與正常組比較，*P<0.01；與模型組比較#P<0.01.

表5顯示，當MSU作為獨立因素，時間作為可重復因素時，不同的時間點大鼠膝關節腫脹具有顯著性差異，即與正常組比較MSU導致大鼠膝關節明顯腫脹(F=3.349，P=0.011)，并且MSU與時間沒有交互效應(F=1.687，P=0.155)；在MSU誘導的痛風性關節炎各組的大鼠，以藥物治療為獨立因素，時間為重復因素，結果顯示低、中、高劑量的十位乳香散，吲哚美辛均能抑制MSU引起大鼠膝關節的腫脹(F=62.473，P=0.000)，進一步行單因素方差分析，結果顯示抑制作用在MSU誘導后2、4、6、8、12、24 h均具顯著性差異，P<0.01。

3 討論

本實驗結果顯示，十味乳香散能明顯抑制醋酸引起的小鼠扭體反應，但并不能顯著延長小鼠熱板痛閾值。熱板法是利用一定強度的溫熱刺激動物軀體某一部位以產生痛反應，是高位中樞參與的反應，此法利于比較藥物鎮痛作用的強弱、快慢及持續時間。醋酸扭體法是小鼠腹腔注射0.6%醋酸溶液引起的一種刺激腹膜的持久性疼痛，此法是篩選弱鎮痛藥的一種比較敏感的方法，不過此法特異性較差，一些抗組胺藥、抗膽堿藥也可以出現陽性結果[9]，因此本研究結果并不能完全證實十味乳香散具有明顯的鎮痛作用，還需采用其他鎮痛實驗進行進一步的驗證。

二甲苯致小鼠耳廓腫脹法、醋酸致毛細血管通透法是經典的以滲出為主的早期炎癥反應模型[10]。MSU誘導的大鼠關節炎是一種有效的痛風性關節炎的實驗模型，該實驗模型引起顯著的中性粒細胞聚集與人類痛風性關節炎的情況相似，因此常作為抗痛風性關節炎藥物的篩選模型[8，11]。本實驗結果顯示，十味乳香散對二甲苯引起的小鼠耳廓腫脹，對MSU誘導的大鼠關節炎的腫脹均有明顯的抑制作用，但對醋酸引起的毛細血管通透增加并不顯著抑制。結果提示十味乳香散有抗炎作用，并且有抗痛風性關節炎的作用，這與傳統臨床應用相符合。但由于抗炎機制的不同，使十味乳香散并不能有效地抑制對醋酸引起的毛細血管通透增加，關于其抗炎抗痛風靶點還有待進一步的研究證實。

[1]吳煥才，王明善.常用藏成藥詮釋[M].青海：青海人民出版社，2001，226-27.

[2]代冬海，紀蘭菊，甘青梅，等.藏藥十味乳香膠囊中大黃酚含量測定方法的研究[J].青海醫學院學報，2005，26(4)：241-43.

[3]何志敏，佟繼銘，宮鳳春.白屈菜堿鎮痛作用研究[J].中草藥，2003，34(9)：837-38.

[4]寇毅英，李永芳，楊梅，等.藏藥十五味乳鵬散鎮痛抗炎作用的實驗研究[J].中成藥，2014，36(10)：2203-5.

[5]劉嫻，劉道芳，劉海兵，等.漢桃葉抗炎鎮痛作用有效部位的篩選[J].安徽醫藥，2011，15(12)：1491-3.

[6]陳奇.中藥藥理研究方法學[M].北京：人民衛生出版社，2000：356-61.

[7]S.J.Getting，H.C.Christian，R.J.Flower，et al.Activationofmelanocortintype3 receptor asamolecular mechanism for adrenocorticotropic hormone effcacy in gouty Arthritis[J].Arthritis & Rheumatism，2002，46(10)：2765-75.

[8]Y.-Y.Kou，Y.-F.Li，M.Xu，et al.Effects of RuPeng15 Powder(RPP15)on Monosodium Urate Crystal-Induced Gouty Arthritis in Rats[J].Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine，Volume 2015，Article ID 527019，7 pages.

[9]徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實驗方法學[M].北京：人民衛生出版社.1985：506-515.

[10]楊巧芳，孟慶剛.炎癥動物模型探要[J].中華中醫藥學刊，2008，26(3)：516-7.

[11]S.J.Getting，R.J.Flower，L.Parente，et al. Molecular determinants of monosodium urate crystal-induced murine peritonitis：a role for endogenous mast cells and a distinct requirement for endothelial-derived selectins[J].Journal of Pharmacology and Experimental Terapeutics，1997，283(1)：123-30.

Study on the analgesic，anti-Inflammatory and anti Gout Arthritic effects of Ten Flavor Ru Xiang Powder(TFRXP)

KOU Yi-ying，WANG Li-yan，LI Rui-lian，LI Yong-fang，YUN Hai-xia

(Qinghai University Medical College，Xining，Qinghai 810001)

Objective To study the analgesic，anti-inflammatory and anti-gout arthritic effects of Ten Flavor RuXiang Powder(TFRXP).Methods Hot plates and writhing test were carried out in model mice to evaluate analgesic effect of TFRXP；and used inflammatory models such as ear swelling caused by dimethyl benzene，capillary permeability increased in mice induced by acetic acid to study the anti-inflammatory activities of TFRXP.and further to explore the therapeutic effect of PRP15 in rat gouty arthritis induced by monosodium urate(MSU)crystals.Results The data showed that the treatment with TFRXP(0.3 g/kg，0.6 g/kg，0.9 g/kg，1 g)in mice with pain induced by acetic acid，the inhibition rate of writhing reaction in high dosage group was 57%(P<0.05 orP<0.01)，the pain threshold of hot plate in mice treated with TFRXP(0.3 g/kg，0.6 g/kg，0.9 g/kg，1 g) had not significantly prolonged(P>0.05)，the ear edema aroused by dimethyl benzene was reduced significantly(P<0.05 orP<0.01)，but the increase of capillary permeability induced by acetic acid was not degraded(P>0.05).And then we found that treatment with TFRXP(0.3 g/kg，0.6 g/kg，0.9 g/kg，1 g)in rats with gouty arthritis induced by MSU crystals significantly attenuated the knee swelling(P<0.05 orP<0.01).Conclusion TFRXP may be a promising candidate for a new treatment for inflammatory and gouty arthritis，its analgesic effect needs more evidence to be confirmed.

Ten Flavor RuXiang Powder(TFRXP) Analgesic effect Anti-inflammatory

※： 國家自然科學基金資助項目(81160410)；青海省科技廳項目(青人社廳函2014-414) 寇毅英(1977～)，女，回族，青海籍，碩士，副教授

R965

A

10.13452/j.cnki.jqmc.2016.04.003

2016-05-09