菏澤市2015年麻疹疑似病例血清學和病毒學檢測分析

賀旭英 馬敬倉

山東省菏澤市疾病預防控制中心免疫規劃科，山東菏澤274010

菏澤市2015年麻疹疑似病例血清學和病毒學檢測分析

賀旭英 馬敬倉▲

山東省菏澤市疾病預防控制中心免疫規劃科，山東菏澤274010

目的分析2015年本地麻疹疑似病例實驗室檢測特點，提高應對麻疹疫情的能力，為消除麻疹工作提供技術支持。方法對2015年1～12月報告的麻疹疑似病例采集血清學和病毒學標本，采用ELISA法檢測血清標本麻疹IgM抗體，采用實時熒光RT-PCR法檢測麻疹病毒核酸，核酸檢測陽性的標本進行病毒分離。結果2015年報告MLI 400例，血清標本、病毒學標本采集率分別為86.25%，8.75%；血清標本檢測麻疹IgM陽性率為50.61%（166/328）；風疹IgM陽性率為4.60%（15/326）；不同縣區麻疹IgM陽性率在34.44%～92.96%之間，不同縣區風疹IgM陽性率在0.00%～33.33%之間。病毒學標本中，麻疹病毒核酸檢出率為65.52%，分離1株麻疹病毒，為H1a型；各縣區均有麻疹發病；不同月份麻疹IgM陽性率在0.00%～75.00%之間，陽性率高峰在4月份。結論為控制麻疹病毒流行，仍要繼續落實以提高麻疹疫苗接種率為重點的技術措施。

麻疹；血清；病毒；消除；基因

麻疹是最具有傳染性的人類疾病之一，可常年發生，但正常的峰值時間是發生在干燥季節或晚冬、早春，大的流行間隔為2～4年，無動物宿主以及無癥狀攜帶者，麻疹病毒為單一類型，基因型穩定，并且無基因重組的證據。在1963年麻疹減毒活疫苗取得許可證以前，據估計，每年全球因麻疹導致死亡的人數超過200萬人，隨著疫苗覆蓋率不斷增長，因麻疹發病而導致的死亡下降，在2000～2014年間，常規疫苗覆蓋率從72%增加到85%，對應的死亡病例從55萬人下降到12萬人。在2000年，聯合國大會通過了“千年發展目標”，其中第四個目標是在2015年前，降低兒童死亡率2/3，而麻疹疫苗覆蓋率為評價這個進展的3個指標之一；同年，世界衛生大會確定了2015年前的3個里程碑控制目標，2012年又通過了“全球疫苗行動計劃”，目標是在2015年前在世界衛生組織（World Health Organization，WHO）的四個區域中實現消除麻疹［1，2］。隨著消除麻疹工作的不斷進展，WHO提出了消除麻疹工作的驗證原則、程序和三條驗證標準，突顯了麻疹實驗室檢測在麻疹監測系統（Measles Surveillance System，MSS）中的基礎作用［3］。2015年，菏澤市麻疹病例出現上升趨勢，為提高麻疹診斷的特異性，掌握麻疹病毒學特點，提高應對麻疹疫情的能力，對全市400例麻疹疑似病例（measles-like illnesses，MLI）標本的血清學檢測、病毒學檢測結果進行了分析，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

菏澤市2015年MSS數據庫來自中國疾病預防控制系統/麻疹監測信息報告管理系統；各縣區疾病預防控制機構免疫規劃專業人員通過該系統用戶端口將個案調查信息、實驗室檢測結果錄入，最終形成當年數據庫。

1.2 病例調查依據及診斷分類

依據《全國麻疹監測方案（2014）》工作要求，對報告的MLI開展調查；根據免疫史、臨床表現及實驗室檢測結果，對MLI分類為實驗室確診病例、臨床診斷病例、排除麻疹風疹病例。

1.3 標本采集

各縣區疾病預防控制機構免疫規劃專業人員對2015年報告的MLI進行調查，并采集標本，采集時間要求在MLI病例出疹后4～28 d內，標本包括靜脈血和（或）咽拭子。負責標本采集，采集靜脈血約2mL，常規分離血清量后約0.5～1.0 mL，咽拭子采集后保存在3 mL麻疹病毒保存液中，均在-20℃保存，并及時運送至市級麻疹實驗室。其中，病毒保存液配制與分裝：5%牛血清的MEM維持液（pH7.0）：200 mL；Eagl ME溶液（無菌）165.5mL；3%谷氨酰胺（無菌）2.0mL；1萬單位的青鏈霉素20.0 mL；7.5%碳酸氫鈉（無菌）約2.5mL（至pH7.0為止）；新生小牛血清（無菌）10.0mL；將以上配制好的液體用帶外螺旋蓋的無菌4.0 mL的血清管分裝成20mL/支。儲存：將分裝好的病毒保存液置-20℃，臨用前解凍。

1.4 檢測方法

分別采用ELISA法、實時熒光RT-PCR法檢測麻疹/風疹IgM抗體、病毒核酸；對病毒核酸陽性標本，及時送山東省疾病預防控制中心麻疹實驗室進行病毒分離、鑒定，操作過程參見WS296-2008麻疹診斷標準［4］。

1.5 實驗室檢測儀器與試劑

Stepone-PlusTM Real-Time PCR System（美國ABI公司），Anthos 2010酶標儀（奧地利Anthos儀器公司）。麻疹/風疹IgM抗體檢測試劑盒由珠海海泰公司生產；麻疹病毒RNA提取試劑盒為QIAGEN公司生產，麻疹病毒核酸檢測試劑盒為江蘇碩世生物科技有限公司生產。

1.6 統計學方法

樣本率的χ2分析采用PASW Statistics 18處理，雙側檢測水準α=0.05，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 麻疹、風疹實驗室確認比例

在全市400例MLI中，麻疹236例，風疹16例，排除病例148例。在麻疹病例中，經實驗室確診的病例的百分構成比為70.76%（167/236）；在風疹病例中，經實驗室確診的病例的百分構成比為81.25%（13/16）。

2.2 全市及縣區標本采集

全市血清標本、病毒學標本采集率分別為86.25%、8.75%；各縣區血清標本采集率在72.22%～100.00%之間，差異有統計學意義（χ2=30.89，v=8，P＜0.05）；各縣區病毒學標本采集率在0.00%～23.08%之間，差異有統計學意義（χ2=30.89，v=8，P＜0.05）。經核查，328例MLI采集到合格的血清標本，29例MLI采集到合格的病毒學標本。見表1。

表1 菏澤市各縣區標本采集情況統計

2.3 麻疹/風疹IgM檢測

對328例血清標本開展麻疹IgM檢測，陽性率為50.61%（166/328）；對326例血清標本檢測風疹IgM，陽性率為4.60%（15/326）；不同縣區麻疹IgM陽性率在34.41%～92.96%之間（χ2=69.31，v=8，P＜0.05），不同縣區風疹IgM陽性率在0.00%～33.33%之間（χ2= 54.96，v=8，P＜0.05），差異均有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 菏澤市2015年各縣區血清學檢測結果統計

2.4 麻疹/風疹病毒核酸檢測與病毒分離

共有5個縣區采集到29例合格病毒學標本，分別為曹縣、單縣各1例，巨野縣17例，鄄城縣7例，東明縣3例，經檢測，麻疹核酸陽性19例，陽性率為65.52%（19/29），其中曹縣標本中未檢出，單縣陽性1例，巨野縣陽性8例，鄄城縣陽性7例，東明縣陽性3例；省級麻疹實驗室在陽性標本中，只分到麻疹病毒1株，證實為H1a型。風疹核酸陽性0例，陽性率為0（0/19），無風疹病毒分離結果。

2.5 不同月份麻疹/風疹IgM檢測情況

不同月份麻疹IgM陽性率在0.00%～75.00%之間（χ2=16.43，v=11，P=0.126），陽性率高峰在4月份；不同月份風疹IgM率在0.00%～50.00%之間（χ2=98.12，v=11，P=0.000），陽性檢出率分布于2～6月份，差異具有統計學意義（P＜0.05），見表3。

表3 菏澤市2015年不同月份麻疹/風疹IgM檢測分布

2.6 不同年齡組麻疹IgM檢測情況

MLI病例年齡在5個月～45歲。不同年齡組麻疹IgM陽性率在13.79%～86.96%，差異有統計學意義（χ2=27.63，v=1，P=0.000）。低年齡組如＜8月齡、8月齡、9～11月齡、1歲的陽性數構成比較多，而20歲以上成人組的陽性數構成比相對也較高。見表4。

表4 不同年齡組麻疹IgM檢測結果

2.7 全市及不同縣區排除病例報告發病率

根據麻疹/風疹IgM抗體、病毒核酸檢測結果，在400例MLI中，共排除148例，報告發病率為1.79/10萬；各縣區排除病例在3～60例之間，報告發病率在0.28/ 10萬～8.26/10萬之間，見表5。

表5 菏澤市2015年排除病例報告發病率統計

3 討論

3.1 全球2010～2015年血清、病毒序列檢測及排除病例概況［5-7］

在2000年，為了對麻疹監測提供高質量的實驗室支持，WHO建立了“全球麻疹風疹實驗室網絡（Global Measles and Rubella Laboratory Network，GMRLN）”，其在證實消除麻疹的過程中發揮著關鍵作用。WHO提出的實驗室操作指標有四個方面：在國家層面上，排除的非麻疹/非風疹的病例發病率；為開展實驗室證實而采集血清標本的疑似病例的百分構成比；經實驗室證實的病毒傳播鏈條的百分構成比，要求有充足的病毒學標本（即：充足的病毒學監測）；血清檢測結果在4 d內報告的百分構成比。根據每月度報告的基于病例監測的數據，在2010～2015年度，全球血清標本檢測數量穩定上升，共有742 187個標本開展了麻疹IgM檢測，并報告了27 832個病毒序列。在2015年，有160個國家報告了基于病例監測的數據，采集了160 644個血清標本，其中有146 625個標本開展了麻疹IgM檢測，陽性率為31%，有112 461個標本開展了風疹IgM檢測，陽性率為12%。

為支持病毒學監測，WHO建立了標準方案，用以監測全球基因型分布和跟蹤麻疹病毒、風疹病毒傳播。在2010～2015年度，共有27 023個麻疹病毒序列提交到WHO麻疹核酸數據庫。在目前已知麻疹病毒共有24個基因型中，全球范圍內2005～2014年間僅檢測到13個基因型，而在2010～2015年度，檢測到8個基因型，分別是B3、D3、D4、D6、D8、D9、G3、H1，最近5年發生傳播的麻疹病毒的基因型數量進一步減少。

從總體上看，全球大部分實驗室的基于病例證實的標本采集運行指標、實驗室結果報告的及時性滿足要求，但在2015年，排除病例的報告發病率存在不足，有62個（32%）國家沒有能力報告排除病例的發病率，有46個（24%）國家報告的排除病例的發病率＜1/10萬，有20個（10%）國家報告的排除病例的發病率在1/10萬～2/10萬之間，有67個（34%）國家報告的排除病例的發病率＞2/10萬。

3.2 國內麻疹血清學、病毒學檢測現狀與菏澤市實驗室檢測評價

國內MLI標本類型主要以血清標本為主，病毒學標本相對較少。在2011～2013年，我國每年報告的MLI數量約在3.46萬人～7.84萬人，血清標本采集率達到90.37%～97.30%，在麻疹病毒分子水平監測方面，H1a基因亞型所占的比例在98.92%～97.28%，其他類型極少［8-11］。國內不同地區報告的麻疹和風疹IgM抗體陽性率差別較大，劉剛等［12］報道2013年4～7月深圳市檢測血清標本210份，麻疹IgM抗體陽性率為73.33%，檢測咽拭子標本217份，麻疹病毒核酸陽性率為82.03%；單竹周等［13］報道2011～2014年黔東南州檢測血清標本705例，麻疹IgM陽性率為1.99%，風疹IgM抗體陽性率為4.68%，各年齡組分布差異；呂燕等［14］報道2013年濟南市檢測血清樣本817例，麻疹IgM陽性率為54.71%，在21份麻疹核酸陽性病毒學檢出本土流行野毒株H1a基因型。樊亞麗［15］報道2011～2013年駐馬店市檢測血清標本680份，麻疹IgM抗體陽性率為4.12%，風疹IgM陽性率為2.06%。張偉宏等［16］報道2014年銀川市麻疹IgM抗體陽性率為25.1%（53/211），麻疹病毒核酸陽性率為30.3%（64/ 211），并分離到11株麻疹病毒，為H1a。與上述地區相比較，菏澤市2015年血清標本麻疹IgM陽性陽性率為50.61%，風疹IgM陽性率為4.60%，病毒學標本有19例麻疹核酸陽性，并檢出麻疹病毒H1a基因型，表明，全市麻疹流行強度要高于風疹流行強度，這一特點也與全球2010～2015年間麻疹IgM陽性率高于風疹IgM陽性率相一致［7］。

從不同月份的檢測結果分析，菏澤市幾乎全年都有麻疹病例出現，但5～9月份為發病高峰期，病例數急劇增加，10月份發病逐漸下降；在地域分布方面，麻疹病毒在九縣區都存在傳播，其中巨野縣檢出最高。這種檢測結果差異可能與當地麻疹、風疹流行強度、標本質量等因素有關，反映了不同縣區的麻疹控制工作的不平衡性。

在全市排除病例的報告發病率方面，2015年報告發病率為1.79/10萬，仍不足2/10萬，不同縣區的報告發病率在0.28/10萬～8.26/10萬，提示，全市麻疹監測的質量仍有待提高，各縣區的監測能力不平衡，應予以改善。

3.3 菏澤市麻疹控制工作的重點探討

本調查研究表明，2015年菏澤市全年麻疹繼續發生，但各縣區發病率各不相同，低年齡組和成人均有發病人群。根據麻疹控制工作現狀，加強麻疹疫苗預防接種工作仍是重點，要繼續落實國家有關的消除麻疹的技術策略，在借鑒外地經驗的基礎上，通過建立完善預約、提醒機制，增加服務頻次等方式方法，重點提高麻疹疫苗及時接種率，加強免疫規劃政策的宣傳力度，提高社會公眾參與免疫規劃的積極性、主動性［17］。

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［3］World Health Organization.Framework for verifying elimination ofmeaslesand rubella［J］.Wkly EpidemiolRec，2013，88（9）：89-100.

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［6］World Health Organization.Genetic diversity of wild-type measles viruses and the globalmeasles nucleotide surveillance database（MeaNS）［J］.Weekly EpidemiologicalRecord，2015，90（30）：373-380.

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［10］馬超，郝利新，蘇琪茹，等.中國2011年麻疹流行病學特征與消除麻疹進展［J］.中國疫苗和免疫，2012，18（3）：193-199.

［11］馬超，蘇琪茹，郝利新，等.中國2012～2013年麻疹流行病學特征與消除麻疹進展［J］.中國疫苗和免疫，2014，20（3）：193-199.

［12］劉剛，林少杰，莊春燕.深圳市麻疹病毒學檢測結果分析［J］.醫學動物防制，2015，31（12）：1319-1320.

［13］單竹周，潘雪雪，王芳，等.黔東南州2011年-2014年麻疹、風疹疑似病例IgM抗體檢測結果分析［J］.中國衛生檢驗雜志，2015，25（23）：4109-4111.

［14］呂燕，韓秀云，楊國樑，等.濟南市2013年麻疹病毒流行病學及基因特征分析［J］.中國預防醫學雜志，2015，16（2）：127-130.

［15］樊亞麗.2011年-2013年駐馬店市麻疹、風疹疑似患者IgM抗體檢測結果分析［J］.中國衛生檢驗雜志，2015，25（9）：1391-1393.

［16］張偉宏，晉博烜，譚玉臻，等.2014年銀川市麻疹監測病例的檢測與分析［J］.現代預防醫學，2016，43（5）：931-933.

［17］石曉娟，周莉薇，張穎，等.寧夏麻疹疫苗及時接種率分析［J］.現代預防醫學，2015，42（15）：2717-2719.

Analysis on the serological and viral detection of measles-like illnesses of Heze City in 2015

HE Xuying MA Jingcang
Department of Enlarged Program on Immunization，Heze Center for Disease Control and Prevention in Shandong Province，Heze 274010，China

Objective To analyze the characteristics of laboratory testing ofmeasles-like illnesses，to improve the ability in dealingwithmeasles epidemic，and to provide technical support for the elimination ofmeasles.M ethods The MLI serological and virological specimenswere tested respectively formeasles IgM antibody through ELISA method，and for measles virus nucleic acid through real-time fluorescence RT-PCRmethod，nucleic acid detection of positive samples for virus isolation.Results 400 cases ofMLIwere reported in 2015.With the collecting rates of blood serum specimens and pathogen specimen of the MLIwas 86.25%and 8.75%，measles IgM positive rate in detection of serum specimens was 50.61%（166/328），and rubella IgM positive rate was 4.60%（15/326）.Themeasles IgM positive rates in different counties were between 34.44%and 92.96%，the rubella IgM positive rates in different counties between 0.00%and 33.33%.In the pathogenic samples，themeasles virus nucleic acid detection rate was 65.52%，1 strain ofmeasles virus was isolated，H1a conformed；There weremeasles reported in all counties and districts.Themeasles IgM positive rates in differentmonthswere between 0.00%and 75.00%with the peak of positive rate in April.Conclusion To control the prevalence ofmeasles virus，we still need to continue to implement the technicalmeasures to improve the vaccination rate ofmeasles vaccine.

Measles；Serum；Virus；Elimination；Gene

R511；R181.3

B

1673-9701（2016）18-0116-05

2016-04-12）

▲通訊作者