彝藥勞傷藥抗炎鎮痛作用的實驗研究

童妍 　羅倫才 　季小平 　李列平 　王利平

【摘 要】 目的：觀察勞傷藥的抗炎鎮痛作用。方法：采用二甲苯致小鼠耳腫脹法、棉球肉芽腫法，醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性增加法觀察勞傷藥的抗炎作用，采用小鼠扭體法觀察勞傷藥的鎮痛作用，采用大鼠佐劑性關節炎（AA）模型觀察勞傷藥對足腫脹的影響。結果：與模型組比較，勞傷藥（5g/kg）能抑制二甲苯致小鼠耳腫脹，抑制棉球致小鼠肉芽腫，抑制醋酸引起的毛細血管通透性增加，抑制冰醋酸引起的小鼠扭體反應，能明顯減輕AA大鼠原發性和繼發性關節腫脹。結論：勞傷藥乙醇提取物有明顯的抗炎鎮痛作用。

【關鍵詞】 彝藥；醇提物； 抗炎；鎮痛

【中圖分類號】R29 【文獻標志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2016）06-0001-03

類風濕性關節炎的治療目的以鎮痛，消炎，防止或減緩關節變形及損傷，及增加關節活動度為主。到目前為止，西醫藥治療本病仍無較為理想的方法。醫藥界一直致力于研究開發毒副作用小、療效顯著的抗類風濕藥物及療法。勞傷藥，即彝藥汝無糯雞，為金粟蘭科植物海南草珊瑚的全草[1]。Sarcandra hainanensis （Pei）Swamy et Bailey。《彝藥志》：“性平，味苦微麻。清熱解毒，活血祛瘀，舒筋止痛，通利關節，治療流感、乙型腦炎、麻疹、肺炎、風濕性關節炎、勞傷腰痛。”《中華本草》[2]：“苦，辛，平，活血散瘀，祛風止痛。主跌打損傷，骨折，瘀阻腫痛，風濕痹痛，肢體麻木等癥。”目前，關于勞傷藥的藥理作用研究較少，尚未見抗炎鎮痛的文獻報道，本文首次研究勞傷藥的抗炎鎮痛活性，為臨床應用提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑 勞傷藥采于涼山，經四川省食品藥品學校閔伯清老師鑒定為金粟蘭科植物海南草珊瑚Sarcandra hainanensis （Pei）Swamy et Bailey的全草。取藥材粉末3kg，95%乙醇滲濾提取，合并提取液，減壓濃縮并回收乙醇得總浸膏123.4g，得率4.11%。吲哚美辛，廣東華南藥業集團有限公司，國藥準字H44020701，尼美舒利膠囊，遠大醫藥（中國）有限公司，國藥準字H20010751。試驗藥物臨用前用蒸餾水配成相應濃度。依文思藍，國藥集團化學試劑有限公司，批號：20130621，冰醋酸，成都市科龍化工試劑廠，批號： 20140218，，二甲苯，成都市科龍化工試劑廠，批號：20130821，弗氏完全佐劑，美國Sigma公司生產，批號，Lot SLBM2183V。

1.2 動物 昆明種小鼠，體重18g～22g，SD大鼠，體重180g～220g，購于簡陽達碩動物科技有限公司，合格證號：SCXK（川）2013-24。

1.3 儀器 TU-1901雙光束紫外可見分光光度計，北京普析通用儀器有限責任公司。

1.4 方法

1.4.1 對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響[3]將50只雄性KM小鼠隨機分成5組：模型組，吲哚美辛組，勞傷藥組（5g/kg，2.5g/kg，1.25g/kg），每組10只。勞傷藥各劑量組和吲哚美辛組每日灌胃給藥1次，連續7d，模型組灌胃同體積蒸餾水。末次給藥后1h，在每只小鼠右耳前后兩面分別涂抹二甲苯0.02ml，1h后將小鼠處死，沿耳廓剪下兩耳，在相同部位用直徑為9mm的打孔器，分別鑿下相等面積的耳片稱重，以左右耳片重量差值為腫脹度，表示藥物的抗炎效應，并計算腫脹抑制率，抑制率=（模型組腫脹度-給藥組腫脹度）/模型組腫脹度×100%。

1.4.2 對棉球致小鼠肉芽腫的影響[3]分組方法同1.5.1，各組小鼠在乙醚淺麻醉下，將已高溫滅菌棉球約5.0mg植入小鼠右側腋窩下，縫合，第二天開始連續灌胃給藥7d，末次給藥1h后處死小鼠，取出棉球，在烘箱中干燥后，稱質量，減去原棉球質量即為肉芽腫脹質量，計算小鼠肉芽腫脹抑制率。

1.4.3 對醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性增加的影響[4]分組及給藥方法同1.5.1，末次給藥后lh，按0.1ml/10g（體重）小鼠尾靜脈注射5%依文思藍溶液，立即腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2ml/只；20min后處死小鼠，用5ml生理鹽水沖洗小鼠腹腔，收集沖洗液，3000rpm離心15min，取上清液于分光光度計59Onm處比色，測定吸光度值（A）。

1.4.4 對醋酸致小鼠扭體反應的影響[4]分組及給藥方法同1.5.1，末次給藥后lh，小鼠腹腔注射0.7%醋酸溶液0.1ml/10g，觀察小鼠出現扭體反應的潛伏期及15min內扭體反應的次數，以小鼠腹部凹陷、雙后肢伸展為扭體反應指標。

1.4.5 對AA大鼠關節腫脹的影響將50只SD雄性大鼠隨機分成5組：模型組，尼美舒利組，勞傷藥組高、中、低劑量組，每組10只。于每只大鼠右后足趾皮內注射0.lml弗氏完全佐劑（每毫升佐劑含l0mg滅活結核桿菌），建立佐劑性關節炎大鼠模型。致炎后，各組大鼠按照設定劑量連續給藥30d，模型組大鼠給予等體積蒸餾水。于致炎后6、12、24、36、48、72h測量致炎足周長，以致炎前后差值表示其腫脹度，觀察勞傷藥對AA大鼠急性原發性炎癥的影響。于致炎后第12、18、24、30天測定非致炎足（左足）的足周長變化，以觀察勞傷藥對AA大鼠繼發性關節腫脹的影響。

1.4.6 統計學方法 實驗結果均以x±s表示，采用SPSS13.0統計軟件進行處理，用One-Way ANOVA進行分析，P<0.05有統計學意義。

2 結果

2.1 勞傷藥對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響

與模型組比較，勞傷藥組的耳腫脹度均明顯減輕（P<0.05）。

2.2 勞傷藥對棉球致小鼠肉芽腫的影響 與模型組比較，勞傷藥組的棉球肉芽腫降低（P<0.01）。

2.3 勞傷藥對醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性增加的影響

與模型組比較，勞傷藥組能抑制醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性增加（P<0.01）。

2.4 勞傷藥對醋酸致小鼠扭體反應的影響

與模型組比較，勞傷藥組扭體反應潛伏期均有一定的延長，且扭體次數有明顯減少（P<0.05或P<0.01）。

2.5 勞傷藥對佐劑性關節炎所致大鼠原發性足腫脹的影響

模型組大鼠右后足明顯腫脹，在致炎后12～36h腫脹度達到峰值；與模型組比較，勞傷藥能明顯減輕AA大鼠原發性關節腫脹（P<0.05）。

2.6 勞傷藥對佐劑性關節炎所致大鼠繼發性足腫脹的影響

模型組大鼠發生繼發性足腫脹，且隨著致炎時間延長繼發性足腫脹越明顯。與模型組比較，勞傷藥能明顯抑制佐劑性關節炎大鼠繼發性足腫脹（P<0.05）。

3 討論

彝藥勞傷藥，彝族民間臨床主要用于治療風濕性關節炎。炎癥是機體對各種損傷所發生的以防御為主的反應，是最基本的病理過程。通常藥理學研究中所采用的炎癥模型就是根據炎癥發生、發展過程中這 3 個不同時相的性質而設計的，所以炎癥模型可歸納為 3 種類型：滲出和腫脹模型，白細胞游走模型，肉芽腫增生模型[5]。二甲苯致小鼠耳腫脹模型是急性炎癥模型，棉球肉芽腫模型是亞急性（慢性）炎癥模型，非特異性炎癥反應的急性時相反應以局部血管擴張和毛細血管通透性增高為特征[6]，實驗結果表明勞傷藥乙醇提取物高劑量組小鼠的耳廓腫脹度較模型組顯著降低，棉球肉芽重降低，醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性降低；醋酸扭體法比較適合外周鎮痛作用機制藥物的篩選，本實驗結果表明勞傷藥明顯減少小鼠扭體次數，說明勞傷藥對腹腔注射化學刺激物質引發的小鼠痛疼具有鎮痛作用。佐劑性關節炎（AA）是目前廣泛應用的類風濕關節炎（RA）模型之一，AA大鼠與人類RA在發病機制、臨床表現等方面有著十分相似的特點，較好地再現了RA的發病及早期病變。完全弗氏佐劑作為一種免疫激發劑，可促使大鼠產生免疫性炎癥反應，釋放大量致炎致痛物質，使大鼠產生長期穩定且敏感的關節疼痛，致炎后大鼠一般呈現出原發性炎癥反應相和繼發性炎癥反應相兩個反應時相，表現出典型早期及慢性炎癥反應。勞傷藥能明顯減輕AA大鼠原發性和繼發性關節腫脹，減輕或減緩AA大鼠炎癥反應，減輕關節腫脹作用，有效緩解RA早期及慢性癥狀。關于勞傷藥抗炎鎮痛作用機制還有待進一步研究。

參考文獻

[1] 云南省楚雄州彝族自治州衛生中藥檢所.彝藥志[M].成都： 四川人民出版社，1983：82-83.

[2] 國家中醫藥管理局.中華本草[M].上海：上海科學技術出版社，1999：2061.

[3] 周勁帆，覃富景，馮潔，等.兩面針根揮發油的抗炎鎮痛作用研究[J].時珍國醫國藥，2012，23（1）：19-20.

[4] 陳艷芬，陶曙紅，余結貞，等.牛白藤抗炎鎮痛作用有效部位的篩選[J].中藥新藥與臨床藥理，2012，23（1）：17-19.

[5] 陳奇. 中藥藥理研究方法學[M]. 北京： 人民衛生出版社，1993：305.

[6] 徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實驗方法學[M].北京：人民衛生出版社，2002：906.

（收稿日期：2016.01.06）