HPLC測定安宮牛黃丸中黃芩苷和黃芩素的含量

秦勝萍

【摘 要】 目的：研究HPLC測定安宮牛黃丸中黃芩苷和黃芩素的含量。方法：色譜柱：Hypersil ODS （250mm×4.6mm，5μm）；流速：1.0ml/min；溫度：室溫；進樣量：10μl；流動相：乙腈-0.4%磷酸（黃芩苷、黃芩素流動相比例分別為21∶79、35∶65）；波長：277nm，進樣前脫氣0.5h。結果：黃芩苷在80～2400mg、黃芩素在5.10～40.80mg范圍內回收效果良好。結論：本方法可用于安宮牛黃丸中黃芩苷和黃芩素的含量測定。

【關鍵詞】 安宮牛黃丸；黃芩苷；黃芩素；

【中圖分類號】R284.1 【文獻標志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2016）06-0026-02

安宮牛黃丸是中醫 “溫病” 范疇的急救藥物，對其質量的要求也較高。臨床主要用于病毒性腦炎、胰島素不足型糖尿病、腦中風、原發性高血壓、精神障礙、嬰幼兒肺炎、股血癥、敗血癥和重型顱腦損傷等[1]。安宮牛黃丸的配方包括牛黃、水牛角、麝香、珍珠、雄黃、朱砂、郁金、黃連、黃芩、梔子和冰皮，其中黃芩的主要成分是黃芩苷和黃芩素，其主要活性為抗菌消炎、增加免疫力、保肝利膽、清熱去火等[2]。利用高效液相色譜（HPLC）對安宮牛黃丸中的黃芩苷和黃芩素含量進行測定已取得顯著效果[3]。

1 儀器與材料

1.1 儀器 高壓液相色譜儀（美國Agilent 1100型）；精密電子分析天平（AMY 220）；超聲波震蕩儀（KQ-250B）。

1.2 材料 安宮牛黃丸（國藥準字Z21020627，沈陽紅藥制藥有限公司）；黃芩苷標準品（批號：110715-200413，中國藥品生物制品檢定所）；黃芩素對照品（批號：TCM015080118，南京替斯艾么中藥研究所）；乙腈、甲醇為色譜純；磷酸為分析純；水為純凈水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 Hypersil ODS （250mm×4.6mm，5 μm）；流速：1.0ml/min；溫度：室溫；進樣量：10μl；流動相：乙腈-0.4% H3PO4（黃芩苷與黃芩素分別為21∶79、35∶65）；波長：277nm，進樣前脫氣0.5h。

2.2 溶液的制備

2.2.1 樣品溶液的制備 將安宮牛黃丸破碎，準確稱0.400g，轉移至5ml玻璃瓶中，加5ml CH3OH，超聲提取15min，離心后保留上清液，該操作重復2次。將上述三次收集的上清液合并，定容至25ml。在上樣前，用0.45μm的過濾器去除大的殘渣。

2.2.2 標準品溶液制備 分別準確稱取黃芩苷和黃芩素標準品5mg與2.5mg，分別用CH3OH稀釋并定容至5ml，濃度為1mg/ml和0.5mg/ml。

2.3 標準曲線 分別精確量取黃芩苷、黃芩素標準品溶液，然后配置系列溶液，并分別吸取20μl進樣，根據色譜峰面積Y對濃度X（μg/ml）做線性分析。黃芩苷的回歸方程為Y=32160X-3.9419 （r=0.9999），線性范圍為80～2400mg；黃芩素Y=41796X-162.87 （r=0.9999），線性范圍5.10～40.80mg。

2.4 精密度試驗 精確吸取標準品20μl。連續重復6次，測定黃芩苷和黃芩素的峰面積并進行精密度計算，結果見表1。

2.5 穩定性試驗 取同一樣品，分別于0、1、3、5、7、9h分別加樣20μl，測定黃芩苷和黃芩素的峰面積，結果如表2。

2.6 重復性試驗 準確稱取0.6g的安宮牛黃丸，總共6份。按之前的方法制備成溶液并進行峰面積分析。黃芩苷和黃芩素的峰面積結果見表3。

2.7 回收率試驗 準確稱取0.2g的已知樣品，總共5份，分別加入黃芩苷和黃芩素的標準品，制備成溶液，測定黃芩苷和黃芩素的含量，計算兩者的加樣回收率分別為100.02%和98.823%，RSD%分別為0.63和1.29，結果見表4。

2.8 樣品含量測定 依次取3顆安宮牛黃丸，按上述條件進行制備樣品，并按標準曲線計算黃芩苷和黃芩素的含量。結果見表5。

3 討論

中藥制劑成分復雜，且各組分的預處理方式不同，加工方式不同，單純的將組方藥摻雜在一起很難發揮藥效[4]。鑒于中藥制劑各組分之間的協調性、互補性和相互制約性，必須建立一種檢測方法可以對中藥組方中的活性物質含量進行測定[5]。尤其是多指標成分的定量分析，可保證臨床用藥的安全性、有效性和可靠性。目前使用的質量標準都是以生化藥物為基礎的化學成分分析和測定，與中藥的臨床療效的相關性不高，不能完整的反應中藥中有效成分的含量[6]。且復方藥的成分極為復雜，其有效成分的含量測定會因提取和測定方法的不同而出現差異。安宮牛黃丸由11種藥物組合而成，其藥理作用機制復雜，藥物與藥物之間的作用目前還不能得到科學的解釋，而黃芩苷和黃芩素是該藥的有效成分，必須對兩者的含量進行嚴格的檢測，保證藥品的質量[7-8]。

研究采用HPLC法對安宮牛黃丸中的有效成分黃芩苷和黃芩素的含量進行分析，確定最佳的優化條件，并對影響HPLC結果的各方面因素進行考察，結果表明HPLC的檢測結果準確，可重復性高。利用分光光度計對標準品溶液在200～400nm波長內掃描檢測，結果在280nm處有最大吸收峰。研究嘗試多種提取方法以尋求更適合的提取方式，結果表明超聲波和加熱回流提取兩種方式的回收效果最高，而超聲提取的雜質更少，因此選擇超聲提取，時間選為15min。分別用甲醇和乙醇進行提取，根據過濾時的難易程度及回收率結果，甲醇的效果更好。流動相經過探索確定為乙腈-0.4%磷酸。綜上所述，本法具有精密性、穩定性和重復性好的特點，可用于安宮牛黃丸中黃芩苷和黃芩素的含量測定。

參考文獻

[1] 厙宇，郜巒.安宮牛黃丸在中風陽閉證中的應用[J].世界中西醫結合雜志，2012，7（2）：155.

[2] 崔愛瑛.安宮牛黃丸的藥理及臨床研究進展[J].中國實驗方劑學雜志，2012，8（20）：342-343.

[3] 郜清.HPLC法測定安宮牛黃丸中黃芩苷含量[J].安徽醫藥，2013，17（5）：766-767.

[4] 李文烈，曹海芳，魏剛.中藥制劑質量控制的研究進展[J].中國執業藥師，2012，9（7）：32-35.

[5] 林輝.HPLC 法測定梔子金花丸中黃芩苷的含量[J].海峽藥，2012，24（11）：79-80.

[6] 楊華，李希，高華娟，等.中藥質量生物活性檢測的發展現狀及思考[J].中藥與臨床，2014，5（1）：50-53.

[7] 葉世龍，劉愛芹.安宮牛黃丸的實驗藥理學研究[J].中華中醫藥學刊，2011，29（9）：1954-1957.

[8] 楊仕珉，詹雪艷，馮欣，等.基于牛黃特征峰的安宮牛黃丸特征指紋圖譜研究[J]. 中華中醫藥雜志，2014，29（9）：2923-2926.

（收稿日期：2016.01.07）