蛋白激酶CK2β在胃癌中的表達及臨床意義

張騰騰　楊振

(1.商丘市第一人民醫(yī)院 腫瘤內(nèi)科　河南 商丘　476000； 2.鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院 胃腸外科　河南 鄭州　450052)

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蛋白激酶CK2β在胃癌中的表達及臨床意義

張騰騰1楊振2

(1.商丘市第一人民醫(yī)院 腫瘤內(nèi)科河南 商丘476000； 2.鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院 胃腸外科河南 鄭州450052)

【摘要】目的研究蛋白激酶CK2β在胃癌中的表達及臨床意義。方法采用免疫組織化學(xué)法檢測94例胃癌及其癌旁正常胃黏膜組織芯片中CK2β的表達水平，分析CK2β的表達與胃癌患者臨床病理特征的相關(guān)性。結(jié)果94例胃癌組織中，CK2β陽性表達率為92.6%(87/94)，癌旁正常胃黏膜組織中的陽性表達率為8.51%(7/94)，兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。CK2β陽性表達率與胃癌患者TNM分期(P=0. 012)、腫瘤分化程度(P=0.036)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.023)相關(guān)。結(jié)論①CK2β在人胃癌組織的表達水平顯著高于其癌旁組織；CK2β的高表達與胃癌的臨床病理特征相關(guān)。②CK2β可能成為潛在的胃癌分子標志物或治療靶點。

【關(guān)鍵詞】胃癌；免疫組化；蛋白激酶CK2β

蛋白激酶CK2，曾被稱為酪蛋白激酶Ⅱ，是一種普遍存在于真核細胞中的多功能信使非依賴性絲/蘇氨酸蛋白激酶，是由2個催化亞基(α或α’)和2個調(diào)節(jié)亞基(β)構(gòu)成的不均一的四聚體，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著重要作用[1-3]。目前已有研究表明，蛋白激酶CK2的β亞基的基因和蛋白水平在包括頭頸部鱗狀細胞癌、胃癌、結(jié)腸癌、子宮內(nèi)膜癌、腎細胞癌等多種惡性腫瘤中表達明顯升高[4-8]。本文旨在研究蛋白激酶CK2β在胃癌組織及其癌旁組織的表達情況，為胃癌的早期診斷及靶向治療提供新的思路。

1資料與方法

1.1一般資料收集鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院胃腸外科2011年12月至2012年12月進行胃癌根治術(shù)的94例胃癌患者，所有患者均接受了D2或D3淋巴結(jié)清掃；且患者在術(shù)前均未進行過化療、放療、中西醫(yī)治療等其他治療，病理標本均按《中國胃癌診治規(guī)范》進行處理。且術(shù)后病理學(xué)檢查證實為胃癌，癌旁組織距癌組織≥5 cm，經(jīng)病理切片證實無癌細胞浸潤。所有患者知情并同意，且報醫(yī)院倫理委員會批準。94例患者中男53例，女41例，年齡30～75歲，中位年齡61歲。腫瘤癌灶<5 cm 56例，≥5 cm 38例。按美國癌癥聯(lián)合委員會(AJCC)胃癌TNM分期(2012年第4版)標準：Ⅰ期22例，Ⅱ期31例，Ⅲ期30例，Ⅳ期11例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性58例，陰性36例。胃癌組織按分化程度分為4組：高分化組18例，中分化組25例，低分化組32例，未分化19例。SP通用型免疫組化試劑盒，沖洗緩沖液等購自美國羅氏診斷產(chǎn)品有限公司。

1.2研究方法

1.2.1免疫組化染色先將胃癌組織芯片置于65 ℃烤箱中烘烤2 h，常規(guī)脫蠟，梯度乙醇水化后，PBS沖洗3次，5 min/次，再于3% H2O2室溫孵育15 min。PBS沖洗3次，5 min/次，將組織芯片及切片架完全浸泡在高壓鍋的枸緣酸鹽溶液(pH=6.0)中，高溫加熱，待高壓鍋噴氣開始計時3 min，停火，室溫冷卻；PBS沖洗3次，5 min/次后，滴加CK2β一抗工作液(1∶100)，4 ℃過夜；PBS沖洗3次，5 min/次，滴加二抗工作液，室溫孵育1.5 h；DAB顯色，蘇木素復(fù)染，脫水，透明，封片。

1.2.2結(jié)果判定判斷組織切片免疫組織化學(xué)染色陽性為細胞內(nèi)出現(xiàn)暗紫色顆粒。CK2β陽性染色主要表現(xiàn)在細胞核中，呈暗紫色顆粒狀，且分布集中[9]。采用二級計分法，雙人雙盲觀察切片，將陽性著色細胞所占視野內(nèi)細胞的百分比與細胞著色強度相結(jié)合計算。陽性細胞計數(shù)：≤10%計0分，11%～25%計1分，26%～50%計2分，>50%計3分。細胞著色強度：棕褐色計3分，棕黃色計2分，淡黃色計1分，不著色計0分。染色細胞計數(shù)得分和細胞著色強度得分相乘，3分以下為陰性(-)，3分為弱陽性(+)，4分為中陽性(++)，5分及以上為強陽性(+++)。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法所有實驗結(jié)果數(shù)據(jù)均采用SPSS 17.0軟件進行分析。癌組織、癌旁組織定量資料對比采用t檢驗，相關(guān)性分析采用配對四格表的關(guān)聯(lián)性分析，對臨床病理因素間的關(guān)系進行χ2檢驗，以P<0.05作為差異有統(tǒng)計學(xué)意義的檢驗標準。

2結(jié)果

在胃癌組織中，免疫組化檢測出CK2β蛋白主要在細胞核內(nèi)高表達，呈暗紫色且集中分布，在癌旁組織中染色較淺，且分布分散、稀疏。在胃癌組織中CK2β陽性表達率與患者性別、年齡、腫瘤大小無明顯相關(guān)， 而與患者腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否、腫瘤TNM分期及是否遠傳轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)。見表1。在胃癌組織中CK2β陽性表達率92.6%(87/94)，與癌旁正常胃黏膜組織中的表達陽性率8.51%(7/94)比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=2.323，P<0.05 ) 。見表2。

3討論

胃癌是全球范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤之一，在中國人群中的發(fā)病率、致死率也在逐年升高[10-11]。絕大多數(shù)胃癌患者就診時已處于中晚期，有的甚至已有遠處轉(zhuǎn)移，是導(dǎo)致胃癌死亡率高、預(yù)后差的重要原因之一[12]。隨著醫(yī)學(xué)實踐的逐步深入，現(xiàn)有的胃癌早期診斷及預(yù)后判斷技術(shù)已不能滿足臨床診療的需求，人們迫切需要新的生物學(xué)標志。理想的腫瘤生物學(xué)標志應(yīng)該易于檢測，并同臨床診療情況具有較強的相關(guān)性，蛋白激酶CK2β符合這些特點。自從被發(fā)現(xiàn)以來，人們已經(jīng)在眾多生理、病理變化中發(fā)現(xiàn)蛋白激酶CK2的異常表達[4-6]，相關(guān)研究得到了迅速開展，滲透入腫瘤病因?qū)W、診斷學(xué)及生物學(xué)治療等各個方面。

CK2是由2個催化亞基(α或α’)和2個調(diào)節(jié)亞基(β)構(gòu)成的異構(gòu)四聚體，其中α亞基在細胞的存活能力方面至關(guān)重要。已有實驗證實，蛋白激酶CK2的α和α’亞基具有癌基因的作用[14]。然而，β亞基的作用還沒有完全明確。目前研究認為β亞基在CK2全酶的解離、靶定和與靶蛋白接合方面發(fā)揮著極其重要的作用，使得CK2能參與到RNA合成、WNT信號通路、泛素化過程及細胞的存活等多個生理過程之中[15]。

表1　CK2β的表達與胃癌臨床病理之間的關(guān)系

本研究發(fā)現(xiàn)，在胃癌組織中CK2β陽性表達率92.6%(87/94)，與癌旁正常胃黏膜組織中的表達陽性率8.51%(7/94) 比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=2.323，P<0.05)，同Lin等[15]的研究結(jié)果一致。從組織芯片的免疫組化結(jié)果中觀察到CK2β在胃癌組織中陽性表達率與患者性別、年齡、腫瘤大小無明顯相關(guān)，而與患者腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否、腫瘤TNM分期及是否遠處轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)。結(jié)果說明，CK2的β亞基參與了胃癌的發(fā)生、發(fā)展、浸潤過程，提示CK2β可以作為判斷和評價胃癌發(fā)生發(fā)展及其惡性程度的一種有效指標，有可能為胃癌早期診斷提供幫助，同時可能成為胃癌靶向治療新的靶點。在下一步的研究中，CK2β與胃癌的侵襲、遷移之間的具體作用機制將是我們工作的重點。

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Expression and clinical significance of casein kinase 2β in gastric carcinoma

Zhang Tengteng1, Yang Zhen2

(1.Departmentofoncology,theFirstPeople’sHospitalofShangqiu,Shangqiu476000,China;2.DepartmentofGastrointestinalSurgery,theFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversity,Zhengzhou450052,China.)

【Abstract】ObjectiveTo investigate the expression and clinical significance of casein kinase 2β (CK2β) in gastric carcinoma (GC). MethodsThe expression of CK2β in 94 cases of GC tissues was detected using immunohistochemistry(SABC mothod) and the clinical and pathological features of the expression of CK2β in GC were analyzed. ResultsA positive expression of CK2β was found in 92.6% (87/94)of the GC tissues while 8.51% (7/94) of the normal mucosal tissues were positive expression for CK2β, showing a significant difference in the distribution of CK2β between normal and GC tissues (P<0.05). The expression level of CK2β in GC was associated with the pathological stage (TNM) (P=0.012), degree of tumor differentiation (P=0.036) and nodal metastasis(P=0.023). Conclusion①The expression levels of CK2β in human GC tissues were significantly higher than in adjacent tissues, and the expression was closely related with clinicopathological features in GC; ②CK2β was a potential therapeutic target molecule and therapeutic marker.

【Key words】gastric carcinoma; immunohistochemistry; casein kinase 2β

(收稿日期：2015-09-16)

【中圖分類號】R 735

doi:10.3969/j.issn.1004-437X.2016.02.006

通訊作者：楊振，E-mail：gegeyang88@126.com。