龍蔓藤茶增強免疫力功能的實驗研究

馮新玲，陳科力，李　娟

(湖北中醫藥大學 教育部中藥資源和中藥復方重點實驗室，武漢 430065)

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龍蔓藤茶增強免疫力功能的實驗研究

馮新玲，陳科力，李娟*

(湖北中醫藥大學 教育部中藥資源和中藥復方重點實驗室，武漢 430065)

摘要目的：研究龍蔓藤茶增強免疫力功能的作用.方法：采用雌性昆明小鼠，設9.10、18.20、54.60 g·kg(-1) 3個劑量組，每日灌胃1次，連續給樣品30 d，檢測對小鼠體重、胸腺、脾臟器官、ConA誘導的脾淋巴細胞轉化、DNFB誘導的DTH、溶血空斑數、血清半數溶血值(HC(50))、碳廓清能力、腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞、NK細胞活性的影響.結果：與對照組比較，18.20、54.60 g·kg(-1)劑量能顯著提高小鼠遲發型變態反應能力、NK細胞活性、半數溶血值，54.60 g·kg(-1)劑量能顯著提高小鼠抗體生成細胞數，各劑量對小鼠體重增長、胸腺/體重比值、脾臟/體重比值、單核-巨噬細胞碳廓清能力及巨噬細胞吞噬雞紅細胞能力均無顯著影響.結論：龍蔓藤茶具有一定增強免疫力功能的作用.

關鍵詞龍蔓藤茶；增強免疫力；小鼠

Effects of Long-man Tea fromAmpelopsisgrossedentataon the Regulation of Serum Lipid

FengXinling,ChenKeli,LiJuan

(Key laboratory of Ministry of Education on Traditional Chinese Medicine Resource and Compound Prescription，Hubei University of Chinese Medicine，Wuhan 430065，China)

AbstractObjective: To study the effect of Long-man tea fromAmpelopsisgrossedentataon immunity functions of mice. Methods: The female Kunming mice were administered with Long-man tea fromAmpelopsisgrossedentataat the dose of 9.10, 18.20 and 54.60 g·kg-1once a day for 30 days by intragastric infusion, respectively. Then the weight, thymus, spleen , ConA-induced spleen lymphocyte proliferation, DNFB-induced DHT, the number of hemolytic plaque, half of hemolytic serum (HC50), carbon clearance ability, macrophage phagocytosis of chicken erythrocytes, NK cell activity were detected after one month with the tested samples. Results: Compared with control group, the dose of 18.20 and 54.60 g·kg-1can strengthen the delayed type hypersensitivity of mice, strengthen NK cell activity and increase HC50. The dose of 54.60 g·kg-1can increase the quantity of antibody forming cells. Each dose has no significant effect on body weight increase, ratio of spleen weight to body weight, ratio of thymus weight to body weight, and ability of mononuclear macrophage carbon clearance and chicken-red cells phagocytosis. Conclusion: Long-man Tea fromAmpelopsisgrossedentatacan strengthen immunity functions of mice.

KeywordsLong-man tea;strengthen immunity; mouse

龍蔓藤茶是以藤茶、桑葉為主要原料制成的保健茶.藤茶為葡萄科顯齒蛇葡萄Ampelopsisgrossedentata(Hand-Mazz) W. T. Wang 的莖葉.其性涼，歸肺、肝經，輕清發散，入肺則有清熱潤肺利咽之效，入肝能清瀉肝膽之火，并散瘀破結，長期飲用，能緩解人體亞健康某些癥狀[1].桑葉是我國重要的傳統中藥之一，藤茶伍以桑葉，相須為用，凡煙酒過度、咽喉不適、中暑、便秘之癥，用之皆有良效.現代研究表明，二者均有抗氧化、降脂、降壓、抗凝、調節免疫功能等作用[1-3].藤茶和桑葉加工制成的保健功能的龍蔓藤茶，不僅豐富了人們的飲食文化，而且提高了其多元化利用.本文研究了龍蔓藤茶對小鼠的細胞免疫功能、單核巨噬細胞功能、NK細胞活性的影響，為其作為保健品應用提供理論依據.

1材料和方法

1.1材料

1.1.1實驗動物

SPF級雌性昆明種小鼠，體重(18±2) g，武漢生物制品研究所提供，合格證號：SCXK(鄂) 2008-0012.飼料由長沙市開福區東創實驗動物科技服務部提供，生產許可證號SCXK(湘)2006-0001.實驗條件為屏障環境，實驗期間實驗環境溫度22～24℃，濕度50%～56%.

1.1.2樣品

由武漢龍蔓生物科技有限公司提供(批號：20130601)，人口服推薦劑量為每日12 g，以每人60 kg體重計算，折合為小鼠給藥劑量1.82 g·kg-1.取樣品1 kg于常壓下，加入溫度85℃左右的蒸餾水10 L，浸泡30 min，提取兩次，將提取液合并濃縮至1 L(此浸泡濃縮液1mL相當于1g樣品).

1.1.3儀器與試劑

T1000型電子天平，JA2003型電子天平、潔凈工作臺、二氧化碳培養箱、離心機、722型分光光度計、Tecan酶標儀、Olympus顯微鏡、游標卡尺、細胞計數器、24孔和96孔平底細胞培養板等.

SRBC、生理鹽水、Hank′s液、RPMI1640培養液、小牛血清、青鏈霉素.ConA、1%冰醋酸，1mol·L-1的HCl溶液，酸性異丙醇、MTT、PBS緩沖液(pH7.2～7.4)、補體(豚鼠血清)、SA緩沖液、瓊脂糖、都氏試劑、YAC-1細胞、乳酸鈉、硝基氯化四氮唑、吩嗪二甲酯硫酸鹽、氧化性輔酶Ⅰ、2 mol·L-1的Tris-HCL緩沖液、2.5%Triton、印度墨汁、0.1%的碳酸鈉、雞紅細胞、甲醇、Giemsa染液等.

1.2分組和劑量選擇

動物隨機分組，每組10只，各取4組分別進行5個實驗項目[6]：碳廓清實驗(Ⅰ)；ConA誘導的小鼠淋巴細胞轉化實驗、NK細胞的活性測定(Ⅱ)；臟體比值測定、半數溶血值(HC50)的測定、和抗體生成細胞數的測定(Ⅲ)；遲發型變態反應實驗(Ⅳ)；小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗(Ⅴ).

據人體口服推薦量，設龍蔓藤茶低、中、高劑量分別為9.10、18.20、54.60 g·kg-1(分別相當于人體推薦量的5、10、30倍).試驗時，分別取龍蔓藤茶浸泡濃縮液10.0 mL、20.0 mL、60.0 mL加蒸餾水定容至200 mL，按0.2 mL·10g-1體積給小鼠灌胃，對照組灌胃予以等體積的溶劑.每天一次，連續灌胃至少30 d.

1.3實驗方法

ConA誘導小鼠脾淋巴細胞轉化實驗(MTT法)；DNFB誘導小鼠遲發型變態反應(DTH)(耳腫脹法)；抗體生成細胞檢測(Jeren改良玻片法)；血清溶血素測定(半數溶血值)；小鼠碳廓清實驗；小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞試驗(半體內法)；NK細胞活性測定(乳酸脫氫酶測定法)[4].

1.4 數據處理

2結果

2.1樣品對小鼠免疫器官臟器/體重比值的影響

給小鼠灌胃龍蔓藤茶30 d，各劑量組對小鼠脾臟/體重比值和胸腺/體重比值無顯著影響(p>0.05).結果見表1.

表1　對小鼠胸腺、脾臟的影響±s)

2.2樣品對小鼠細胞免疫功能的影響

樣品對小鼠遲發型變態反應(DTH)的影響見表2，中、高劑量組對足跖腫脹度與對照組比較顯著提高(p<0.05)，而低劑量組對小鼠遲發型變態反應能力無顯著影響(p>0.05).

樣品對小鼠ConA誘導的淋巴細胞轉化能力的影響見表2，樣品各劑量組對小鼠淋巴細胞轉化能力無顯著影響(p>0.05).

組別注射后24h足跖腫脹度/mm淋巴細胞增殖能力(OD差值)對照組0.23±0.110.032±0.016低劑量0.30±0.080.037±0.024中劑量0.37±0.08*0.044±0.025高劑量0.40±0.10**0.046±0.018

注：與對照組比較*p<0.05，**p<0.01

2.3樣品對體液免疫的影響

樣品對小鼠抗體生成細胞數的影響見表3，高劑量組對小鼠抗體生成細胞數與對照組比較有顯著影響(p<0.01).

樣品對小鼠半數溶血值(HC50)的影響見表3.

表3樣品對小鼠抗體生成細胞數、半數溶血值(HC50)的影響

組別溶血空斑數/(個/106個脾細胞)半數溶血值/(HC50)對照組113±37156.38±36.46低劑量142±65188.34±49.32中劑量162±63207.09±35.20*高劑量198±54**217.90±58.07*

注：與對照組比較*p<0.05，**p<0.01

中、高劑量組小鼠半數溶血值(HC50)與對照組比較顯著提高(p<0.05).

2.4樣品對小鼠單核—巨噬細胞吞噬功能的影響

樣品對小鼠單核-巨噬細胞碳廓清的影響：見表4，各劑量組對小鼠碳廓清能力無顯著影響(p>0.05).

樣品對小鼠巨噬細胞吞噬雞紅細胞能力的影響：見表4，樣品各劑量組對小鼠巨噬細胞吞噬雞紅細胞能力無顯著影響(p>0.05).

表4　樣品對小鼠單核-巨噬細胞吞噬功能的影響±s)

2.5樣品對小鼠NK細胞活性的影響

中、高劑量組對小鼠NK細胞活性與對照組比較顯著提高(p<0.05)，結果見表5.

表5　樣品對小鼠NK細胞活性的影響±s)

注：與對照組比較*p<0.05，**p<0.01

3結論

在本實驗室條件下，經口灌胃給予小鼠9.10、18.20、54.60 g·kg-1劑量的龍蔓藤茶30 d，與對照組比較，18.20、54.60 g·kg-1劑量能顯著提高小鼠遲發型變態反應能力、NK細胞活性、半數溶血值，54.60 g·kg-1劑量能顯著提高小鼠抗體生成細胞數(p<0.05)，各劑量對小鼠體重增長、胸腺/體重比值、脾臟/體重比值、單核-巨噬細胞碳廓清能力及巨噬細胞吞噬雞紅細胞能力均無顯著影響(p>0.05).提示龍蔓藤茶具有一定增強免疫力功能的作用.

藤茶含有豐富的黃酮類，能顯著增強免疫功能，在免疫毒理學方面的評價是安全的[5].桑葉含有豐富的氨基酸、黃酮類、多糖類等成分，據報道多糖對正常小鼠和免疫力低下的小鼠，均具有一定的免疫增強作用[3,6].以藤茶和桑葉為主要原料制成的龍蔓藤茶不但能改善桑葉茶的口感，而且營養成分豐富，具有良好的降脂[7]、降壓等保健作用，本文證實其配伍后具有增強NK細胞活性等作用，適合某些免疫力低下人群的飲用.

參考文獻

[1]李燕婧,鐘正賢. 淺談藤茶的研究與應用[J]. 中國民族民間醫藥, 2013,16:26-27.

[2]Tiemey M．The tolerability and pharmacokinetics of n-butyl deoxynojiri mycin in patients with advanced HIV disease (AXTG100)[J]. J Acquir Immune Defic Syndr Hum Retrovirol, 1999, 10(5):549-553.

[3]許健豪,鐘楊生,陳芳艷,等. 桑葉中的活性功能物質及桑葉茶的開發利用[J]. 廣東蠶業, 2015，49(1)：29-33.

[4]中華人民共和國衛生部. 保健食品檢驗與評價技術規范[M]. 北京: 中華人民共和國衛生部, 2003: 22-34.

[5]周才碧,張敏星,穆瑞祿,等. 藤茶有效成分及功效的研究進展[J]. 福建茶葉,2014, 3:2-4.

[6]侯瑞宏,廖森泰,劉凡,鄒宇曉,等. 桑葉多糖對小鼠免疫調節作用的影響[J], 食品科學, 2011,32(13):280-283.

[7]王佳芷,陳科力,嚴緒華,等.龍蔓藤茶輔助降血脂功能實驗研究[J].中國藥師, 2014,17(10):1631-1633.

中圖分類號R285.5

文獻標識碼A

文章編號1672-4321(2016)01-0067-03

基金項目國家自然科學基金青年項目(81202615)

作者簡介馮新玲(1972-),女，副教授，博士，研究方向：藏象理論及其應用研究,E-mail：604508848@qq.com

收稿日期2015-12-28*通訊作者李娟(1982-)，女，副教授，博士，研究方向：中藥資源及其品質評價.E-mail：lz198207@126.com