分枝桿菌培養(yǎng)中同步篩檢依賴利福平結(jié)核分枝桿菌(依R菌)的臨床應(yīng)用價值

楊翰，張增賢，吳憲，雷靜，談小文西安市胸科醫(yī)院檢驗科，陜西西安　710100

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分枝桿菌培養(yǎng)中同步篩檢依賴利福平結(jié)核分枝桿菌(依R菌)的臨床應(yīng)用價值

楊翰，張增賢，吳憲，雷靜，談小文
西安市胸科醫(yī)院檢驗科，陜西西安710100

[摘要]目的分析探討培養(yǎng)分枝桿菌時同步篩檢依賴利福平結(jié)核分枝桿菌(依R菌)臨床意義及價值。方法2011年3月—2015年3月所采集530例臨床標本進行培養(yǎng)使用利福平濃度100 μg/mL羅氏（L-J）培養(yǎng)基建立依R菌篩查系統(tǒng)，將待分離培養(yǎng)分枝桿菌平行接種于羅氏對照空白培養(yǎng)基（L-J）與L-J R100培養(yǎng)基中分別培養(yǎng)，依照培養(yǎng)基選用種類分別分成L-J R100、L-J、BD960 3組，并對結(jié)果進行分析統(tǒng)計。結(jié)果L-J R100培養(yǎng)基檢出76例陽性結(jié)核分枝桿菌，且皆為依R菌，菌株粗大，生長良好，L-J R100陽性菌株所占比例為14.34%，L-J陽性菌株所占比例23.21%，BD960陽性菌株所占比例為52.83%。結(jié)論培養(yǎng)分枝桿菌時同步篩查依R菌能得到絕對依賴菌株，可提高分枝桿菌陽性檢出率，可最快速度判斷陽性菌株耐藥性及是否對利福平具依賴性，該方法可靠易行，具有臨床推廣價值。

[關(guān)鍵詞]羅氏培養(yǎng)基；結(jié)核；分枝桿菌

1882年細菌學(xué)家郭霍（德國）證明分枝桿菌乃結(jié)核病致病菌，該病菌可入侵全身多器官組織，最常見為肺部感染[1]。由于該病診斷復(fù)雜，治療更加困難，治療時間很長，耐多藥病人大多需要14～25個月方能治愈，且治療費用是一般病人幾十倍左右，可見耐藥結(jié)核病對患者個人及家庭均造成精神壓力及經(jīng)濟負擔，先前已有文獻表示L-J R100培養(yǎng)基可取得絕對耐藥菌株[2]，該實驗2011年3月—2015年3月間主要研究利用BD960培養(yǎng)基對分枝桿菌進行分離培養(yǎng)時同時將其接種于LJ、L-J R100兩種培養(yǎng)基，觀察培養(yǎng)基菌株生長情況，旨在提前對依R菌進行篩查，提早為該菌結(jié)核病治療提供依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

該研究使用530例標本皆取自筆者就職醫(yī)院收治結(jié)核病患者，其中女性患者260例，男性患者270例，平均年齡（48.2±23.5）歲；標本來自腹水87例、腦脊液52例、胸水69例、痰液235例、尿液87例。

1.2培養(yǎng)基選用

該研究主要使用3種培養(yǎng)基L-J、L-J R100及BD960，3種培養(yǎng)基均購自珠江銀科醫(yī)學(xué)工程有限公司，均屬質(zhì)檢合格產(chǎn)品。

1.3方法

接種操作于細菌室進行，待接種環(huán)充分滅菌后，勾取適量標本接種于L-J空白對照培養(yǎng)基，采用分區(qū)劃線法，勾取工作于酒精燈外焰周圍進行，再次灼燒滅菌接種環(huán)，采取同樣方式接種剩余兩種培養(yǎng)基。培養(yǎng)操作嚴格依照各組培養(yǎng)基使用說明進行，L-J空白對照培養(yǎng)基、L-J R100培養(yǎng)基于37℃進行培養(yǎng)，于兩日后對培養(yǎng)基菌株生長情況進行觀察，將結(jié)果記錄在冊，并對生長情況拍照存檔。

1.4判斷標準

對培養(yǎng)結(jié)果進行平行觀察：①L-J R100菌落數(shù)超過20，空白管未有菌落出現(xiàn)；②L-J R100出現(xiàn)粗大菌落，菌落生長良好，空白管未有菌落出現(xiàn)；③L-J R100菌落數(shù)量遠多于空白管。以上現(xiàn)象出現(xiàn)任意一種皆可說明依R菌存在。

1.5質(zhì)控

①該研究接種培養(yǎng)工作皆于筆者就職本醫(yī)院檢驗科細菌室進行。②對所有檢驗項目進行嚴格統(tǒng)一管理，實驗用品及藥品皆為檢驗合格產(chǎn)品。③該實驗操作由筆者聯(lián)合兩位經(jīng)驗豐富同事一同完成，操作嚴格按照常規(guī)實驗標準進行。④對檢驗結(jié)果進行數(shù)據(jù)化管理。

1.6統(tǒng)計方法

采用SPSS 15.0軟件包對研究所得數(shù)據(jù)進行處理，計數(shù)資料以百分數(shù)表示，進行χ2檢驗。

2　結(jié)果

2.1不同培養(yǎng)基陽性菌培養(yǎng)結(jié)果

對比3種培養(yǎng)基菌株生長狀況可知，L-J R100培養(yǎng)基組含陽性菌株患者76例，陰性菌株450例，培養(yǎng)基污染4例；L-J培養(yǎng)基組含陽性菌株123例，陰性菌株387例，培養(yǎng)基污染20例；BD960培養(yǎng)基組含陽性菌株280例，陰性菌株243例，培養(yǎng)基污染7例。見表1。

表1　不同培養(yǎng)基菌株培養(yǎng)結(jié)果（%）

2.2 3種培養(yǎng)基所得陽性菌株鑒定

L-J R100所得陽性菌株中，結(jié)合分枝桿菌66株，非結(jié)核桿菌10株，牛分枝桿菌0株；L-J所得陽性菌株中，結(jié)合分枝桿菌112株，非結(jié)核桿菌8株，牛分枝桿菌3株；BD960所得陽性菌株中，結(jié)合分枝桿菌257株，非結(jié)核桿菌18株，牛分枝桿菌5株。見表2。

表2　3種培養(yǎng)基所得陽性菌株鑒定[n（%）]

3　討論

結(jié)核病是經(jīng)呼吸道傳播一類慢性傳染病，于全球普遍流行。倘若患者感染結(jié)核分枝桿菌對所用一種或多種抗結(jié)核藥物發(fā)生耐藥性，則稱之耐藥結(jié)核病。耐藥結(jié)核病廣泛流行對結(jié)核病控制工作照成持續(xù)威脅[3]。由于該病診斷復(fù)雜，治療更加困難，治療時間很長，耐多藥病人大多需要14～25個月方能治愈，且治療費用是一般病人幾十倍左右，可見耐藥結(jié)核病對患者個人及家庭均造成精神壓力及經(jīng)濟負擔。而照成耐藥原因有以下幾種[4]，包括藥物搭配不當、藥物用量不足、服用方法不正確、治療時間未達標、間斷用藥等。耐藥性結(jié)核病發(fā)病主要原因是結(jié)核病控制環(huán)節(jié)薄弱[5]，二線抗結(jié)核藥未嚴格監(jiān)測，藥品使用不當，患者盲目樂觀思想及醫(yī)務(wù)人員護理干預(yù)松懈致使許多結(jié)核病患者未被發(fā)現(xiàn)，從而使患者病情延長，更難治愈，部分患者即便發(fā)現(xiàn)病情，因未得到合理治療，也導(dǎo)致耐藥現(xiàn)象產(chǎn)生[6]。

有研究報告顯示[7]。多個基因突變造成耐藥稱其多基因耐藥；該研究通過培養(yǎng)分枝桿菌時同步篩檢依賴利福平結(jié)核分枝桿菌，對比3種培養(yǎng)基菌株生長狀況可知，L-J R100培養(yǎng)基組含陽性菌株患者76例，陰性菌株450例，培養(yǎng)基污染4例；L-J培養(yǎng)基組含陽性菌株123例，陰性菌株387例，培養(yǎng)基污染20例；BD960培養(yǎng)基組含陽性菌株280例，陰性菌株243例，培養(yǎng)基污染7例，L-J R100培養(yǎng)基所得依R菌株數(shù)較其它兩組差異有統(tǒng)計意義（P<0.05），與相關(guān)文獻所述L-J R100培養(yǎng)基可取得絕對耐藥菌株相呼應(yīng)[8]。綜上所述L-J R100可篩選出絕對依賴菌株，可最快速度發(fā)現(xiàn)患者耐藥種類，為患者提供相應(yīng)治療藥物，避免患者病程延長，減少其家庭經(jīng)濟負擔及個人心理壓力，方法簡單可行，可于臨床廣泛推廣。

[參考文獻]

[1]李同心,陳天剛,廖傳玉,等.臨床分枝桿菌培養(yǎng)中同步篩檢依賴利福平菌的應(yīng)用價值探討[J].中國防癆雜志,2013,35 (6):439-442.

[2]李艷,黃冬生,羅春明,等.61例依賴利福平結(jié)核桿菌肺結(jié)核臨床特點分析[J].實用醫(yī)學(xué)雜志,2013,29(12):1990-1992.

[3]丁秀秀,譚守勇,譚耀駒,等.噬菌體法檢測利福平耐藥在耐多藥肺結(jié)核診斷中的應(yīng)用價值[J].實用醫(yī)學(xué)雜志,2012,28 (24):4088-4090.

[4]王忠東,張華強,任志盛,等.2012年青島市結(jié)核病耐藥性監(jiān)測分析[J].中國防癆雜志,2015,37(6):637-640.

[5]陳燕梅,錢明,陳濤,等.結(jié)核分枝桿菌對卡那霉素和氧氟沙星藥物耐藥性分析[J].廣東醫(yī)學(xué),2013,34(9):1393-1395.

[6]李艷,譚守勇,羅春明,等.依賴利福平與耐利福平結(jié)核桿菌肺結(jié)核的臨床特點比較[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2013,33(2): 287-289.

[7]吳園,胡頻頻,王易偉,等.結(jié)核分枝桿菌Rv0341蛋白編碼基因iniB的多態(tài)性分析[J].中國防癆雜志,2010,32(11):756-759.

[8]吳龍章,羅春明,吳幸怡,等.廣州市依賴藥物結(jié)核分枝桿菌分離率的初步調(diào)研[J].中國防癆雜志,2011,33(1):53-56.

Clinical Application Value of Synchronous Screening of Rifampicin-dependent Mycobacterium Tuberculosis During the Mycobacterium Culture Process

YANG Han, ZHANG Zeng-xian, WU Xian, LEI Jing, TAN Xiao-wen
Clinical Laboratory, Chest Hospital of Xi’an City, Xi’an, Shaanxi Province, 710100 China

[Abstract]Objective To study the clinical significance of synchronous screening of Rifampin-dependent mycobacterium tuberculosis during the mycobacterium culture process. Methods From March 2011 to March 2015, 530 cases of clinical specimens were cultured, L-J medium with 100μg/mL of Rifampicin was applied to build up the screening system of Rifampicin-dependent mycobacterium tuberculosis. The isolated mycobacterium was separately cultured in L-J and L-J R100 medium. According to the selection of culture medium, the species were divided into three groups, L-J R100, L-J and BD960. The results were analyzed statistically. Results For L-J R100 medium, there were 76 positive cases with mycobacterium tuberculosis. They were featured as Rifampin-dependent mycobacterium tuberculosis, large strains and favorable growth. The percentage of R100 L-J positive strains was 14.34%, the proportion of L-J positive strains was 23.21%, and the proportion of BD960 positive strains was 52.83%. Conclusion During the mycobacterium culture process, the synchronous screening of Rifampicin-dependent mycobacterium tuberculosis can identify the absolute strain, improve the positive detection rate of mycobacterium, quickly identify the tolerance of positive train and its dependency on Rifampicin. The reliable method is worthy of clinical promotion.

[Key words]L-J Medium; Tuberculosis; Mycobacterium

收稿日期：（2015-10-12）

[作者簡介]楊翰（1989.8-），男，寧夏人，本科，初級檢驗師，主要從事臨床微生物的研究工作。

DOI：10.16662/j.cnki.1674-0742.2016.02.030

[中圖分類號]R5

[文獻標識碼]A

[文章編號]1674-0742（2016）01（b）－0030-03