丹參單體IH764-3對馬兜鈴酸致人腎小管上皮細胞損害的保護機制研究

胡波　范紅偉　王燕午　馬廣駿

050081　石家莊市，中國人民解放軍白求恩醫務士官學校內科教研室(胡波),門診部(王燕午);河北省石家莊市第四醫院(范紅偉);中國人民解放軍第260醫院醫教處(馬廣駿)

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·論著·

丹參單體IH764-3對馬兜鈴酸致人腎小管上皮細胞損害的保護機制研究

胡波范紅偉王燕午馬廣駿

050081石家莊市，中國人民解放軍白求恩醫務士官學校內科教研室(胡波),門診部(王燕午);河北省石家莊市第四醫院(范紅偉);中國人民解放軍第260醫院醫教處(馬廣駿)

【摘要】目的探討丹參單體IH764-3在馬兜鈴酸(aristolochic acid，AA)導致人腎小管上皮細胞系(HK-C)損害中的保護作用及機制。方法以含體積分數0.10胎牛血清的DMEM培養液培養HK-C細胞72 h。實驗分為3大組(8小組)，AA組在培養液中加入濃度為20 mg/L的AA；觀察組在培養液中加入濃度為20 mg/L的AA和不同濃度丹參單體IH764-3；對照組培養液中不加AA。培養24、48、72 h后，酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測各細胞培養液中轉化生長因子β1(TGF-β1)、纖溶酶原激活物抑制劑1(PAI-1)、基質金屬蛋白酶抑制劑1(TIMP-1)、金屬蛋白酶2(MMP-2)；采用MTT法觀察HK-C細胞活性，實時熒光定量PCR技術檢測凋亡蛋白Caspase-3mRNA的表達情況。結果AA刺激后，誘導TGF-β1、TIMP-1、PAI-1表達增加，MMP-2表達減少(P<0.05)。經丹參單體IH764-3干預后，TGF-β1、TIMP-1、PAI-1表達減少，MMP-2表達增加，其中以IH764-3 80 mg/L效果最佳(P<0.05)。AA組及觀察組較對照組HK-C細胞的活性均受到抑制，細胞的凋亡率增加，Caspase-3mRNA表達增高(P<0.05)。觀察組較AA組細胞活性明顯增高，細胞的凋亡率明顯下降，Caspase-3mRNA表達降低，觀察組中以丹參單體IH764-3 80 mg/L效果最佳(P<0.05)。結論丹參單體IH764-3可明顯提高HK-C細胞抵抗AA導致細胞損傷的能力，保護HK-C細胞，其具體途徑可能與抑制TGF-β1、TIMP-1、PAI-1、Caspase-3mRNA，升高MMP-2的表達而發揮作用。

【關鍵詞】丹參單體IH764-3；馬兜鈴酸；人腎小管上皮細胞；細胞凋亡

馬兜鈴酸腎病(aristolochic acid nephropathy，AAN)是一類由關木通等含馬兜鈴酸的相關中草藥所造成的急性或慢性腎小管間質性疾病。AAN呈現不可逆性腎功能損害，往往在數月或1～2年內進展到腎功能衰竭。早期研究發現AAN主要表現為損傷腎小管上皮細胞[1]，近年研究又發現AA還有致腫瘤、腎毒性和致基因突變等作用，從而引起國內外學者的廣泛關注[2]。……