Kindlin—2與VEGF—C蛋白在胃癌組織中的表達及意義

劉鑫　辛瑞　劉魯英

【摘 要】目的：檢測胃癌組織中Kindlin-2與VEGF-C蛋白的表達，探討二者在胃癌發生發展中的作用。方法：選取109例胃癌組織標本為研究對象，采用免疫組織化學染色方法檢測Kindlin-2與VEGF-C的表達。結果：Kindlin-2在54.1%的胃癌組織中表達，與腫瘤TNM分期和淋巴結轉移密切相關，并發現Kindlin-2表達與VEGF-C表達在胃癌組織中呈正相關（P<0.05）。結論：Kindlin-2和VEGF-C可能在胃癌細胞侵襲過程中協同發揮作用。

【關鍵詞】胃癌；Kindlin-2；VEGF-C；免疫組織化學染色

The expression and significance of Kindlin-2 and VEGF-C in gastric carcinoma

LIU Xin XIN Rui LIU Lu-ying

（Department of Pathology， Binzhou Medical University， Yantai Shandong 264003， China）

【Abstract】Objective：to detect the expression of Kindlin-2 and VEGF-C in gastric cancinoma and explore the role of the two proteins in the progression of gastric cancer. Methods： 109 cases of gastric carcinoma were selected as the research object. The expression of Kindlin-2 and VEGF-C were detected by immunohistochemical staining. Result： Kindlin-2 expressed in 54.1% of gastric cancer tissue， and it is closely related to the tumor TNM stage and lymph node metastasis。We also found that Kindlin-2 expression were positively correlated with the expression of VEGF-C in the tissue of gastric cancer（P<0.05）. Kindlin-2 and VEGF-C may have coordinated role in the procession of gastric cancer cell invasion.

【Key words】Gastric cancer； Kindlin-2； VEGF-C； Immunohistochemistry

胃癌起病隱匿，診斷時往往已經是晚期，因此，5年生存率較低，是危害人類健康的重要疾病。Kindlin-2屬于黏著斑蛋白（vinculin），在人類乳腺癌、前列腺癌中發現Kindlin-2與腫瘤的侵襲有關[1-2]。VEGF-C是VEGF家族成員之一，因其能調節淋巴管的發育、參與腫瘤淋巴道轉移、促進新生血管生成而備受關注。本研究通過免疫組織化學染色檢測Kindlin-2與VEGF-C在胃癌組織中表達及其相關關系，探討Kindlin-2在胃癌侵襲等生物學行為中的作用及機制。

1 材料與方法

1.1 材料

收集109例在我院接受胃癌根治手術并有完善病理資料的病例，其中，男性76例、女性33例，男女比例為2.3：1；年齡<60歲的58例，≥60歲的51例。根據國際抗癌聯盟制定的標準進行TNM分期，I期18例、II期20例、III期38例、IV期33例；所選擇的患者術前均未行任何形式的輔助治療。所有標本均經病理證實，采用10%福爾馬林液固定，石蠟包埋切片備用。

1.2 主要試劑及方法

兔抗人Kindlin-2多克隆抗體購自Abcam公司，兔抗人VEGF-C多克隆抗體購自Zymed公司，EnVision免疫染色試劑盒購自Dako公司。

切片常規脫蠟水化，封閉內源性過氧化物酶，抗原修復，加入一抗工作液，加入二抗，DAB顯色，蘇木素復染，脫水、透明、封片。PBS取代一抗作空白對照。

1.3 結果判讀

細胞質內出現淡黃色細顆粒、棕黃色顆粒或棕褐色粗顆粒即判斷為陽性表達。顯色強度以多數細胞呈現的染色特征為標準，根據著色（顏色）無、弱（淡黃）、中（棕黃）、強（棕褐）分別計分為0、1、2、3分；陽性細胞數≤5%、6%-25%、26%-50%、51%-75%、≥75%分別計分0、1、2、3、4分。免疫反應評分=顯色強度×陽性細胞百分率。判定陽性結果：得分0～4分為低表達，5～12分為高表達。

1.4 統計學處理

采用SPSS19.0數據分析軟件進行統計學處理，樣本率之間比較采用χ2檢驗，相關性分析采用Spearman等級相關分析進行，P<0.05代表檢驗結果具有統計學意義。

2 結果

2.1 Kindlin-2蛋白在胃癌組織中的表達

Kindlin-2蛋白免疫組化顯色為黃色或棕黃色，彌漫分布于細胞質中。Kindlin-2高表達者59例（54.1%）、低表達者50例（45.9%）。

2.2 VEGF-C蛋白在胃癌組織中的表達

VEGF-C蛋白免疫組化染色呈棕黃色或棕褐色，分布于胃癌細胞胞漿內，腫瘤間質中少量存在。109例胃癌標本中，42例表達（38.5%）、67例不表達（61.5%）。

2.3 Kindlin-2在胃癌組織中表達的臨床意義及其與CTGF表達的相關性

Kindlin-2在胃癌組織中的表達隨著TNM分期的升高明顯增強（P=0.014），并且在發生淋巴結轉移的病例中胃癌組織表達Kindlin-2顯著強于未發生淋巴結轉移的病例（P=0.014）。Kindlin-2在胃癌組織中的表達與胃癌患者的年齡、性別、腫瘤大小、分化程度、Lauren分型、脈管癌栓和遠處轉移等都沒有顯著相關性。見表1。

胃癌組織中Kindlin-2蛋白表達與CTGF蛋白表達顯著相關（P=0.004）。見表2。

表1 Kindlin-2蛋白表達與胃癌臨床病理特征之間的關系

表2 Kindlin-2蛋白表達與VEGF-C表達之間的關系

3 討論

Kindlin-2是新近發現的黏著斑蛋白，通過與整合素β亞基胞質尾區高親和力的結合位點結合，調控整合素活化與細胞骨架重排，參與機體多種重要的生理功能和病理過程。目前，Kindlin-2與臨床疾病的關系認知較少，Kindlin-2異常不直接導致特定的遺傳性疾病可能與其具有胚胎致死性有關。但Kindlin-2在心血管系統的發育及新生血管的形成[2]及腫瘤的侵襲[3]過程中有著潛在且不可忽視的重要性。Kindlin-2在惡性黑色素瘤和胸膜肺癌轉移瘤中高表達并參與腫瘤的侵襲轉移[4]。本研究通過免疫組織化學染色方法檢測Kindlin-2蛋白在胃癌組織中的表達，Kindlin-2高表達者59例（54.1%），Kindlin-2在胃癌組織中的表達隨著TNM分期的升高明顯增強（P=0.014），并且在發生淋巴結轉移的病例中胃癌組織表達Kindlin-2顯著強于未發生淋巴結轉移的病例（P=0.014）。

VEGF-C屬于血管內皮生長因子（VEGF）家族[5]，Cao[6]等測定VEGF-C對血管和淋巴管的誘導情況，結果表明VEGF-C能誘導幾乎等量的血管和淋巴管生成。Kindlin-2是細胞間緊密連接的重要組成部分，作為一種信號銜接蛋白參與VEGF-C對血管通透性的調節作用。作用機制可能為：VEGF-C可以促進Kindlin-2的酪氨酸磷酸化，加強腫瘤血管對大分子物質的滲透作用。本研究發現胃癌中Kindlin-2的表達與VEGF-C呈正相關，表明Kindlin-2與VEGF-C相互作用，共同參與胃癌的發生發展。

目前，胃癌的臨床治療方式單一，生物治療現狀也不令人滿意，由于缺乏特異及高效的生物治療靶點，現有的臨床病理指標不足以支持胃癌的個體化治療。高表達的Kindlin-2和VEGF-C可能與胃癌細胞的侵襲轉移等惡性生物學行為相關。深入研究胃癌的侵襲、轉移過程中可能涉及的分子機制將有助于我們發現胃癌轉移的診斷標志物，對設計新的治療胃癌的方法和尋求治療靶點有重要的意義。

【參考文獻】

[1]Sin S，Bonin F， Petit V， et al. Role of the focal adhesion protein kindlin-1 in breast cancer growth and lung metastasis[J].J Natl Cancer Inst，2011，103（17）：1323-1337.

[2]Gong X， An Z， Wang Y， et al. Kindlin-2 controls sensitivity of prostate cancer cells to cisplatin-induced cell death[J].Cancer Lett，2010，299（1）：54-62.

[3]Shen Z， Ye Y， Dong L， et al. Kindlin-2：a noval adhesion protein related to tumor invasion， lymph node metastasis， and patient outcome in gastric cancer[J].Am J Surg，2012，203（2）：222-9.

[4]An Z， Dobra K， Lock J G， et al. Kindlin-2 is expressed in malignant mesothelioma and is requiret for tumor cell adhesion and migration[J].Int J Cancer，2010，127（9）：1999-2008.

[5]段澤星，謝立群，等.VEGF在腫瘤生長和血管生成中的作用[J].世界華人消化雜志，2010，18（27）：2894-2900.

[6]Cao R， Eriksson A， Kubo H， Alitalo K， Cao Y， Thyberg J. Comparative evaluation of FGF-2， VEGF-A， and VEGF-C-induced angiogenesis， lymphangiogenesis， vascular fenestrations， and permeability[J].Circ Res，2004，94：664-670.

[責任編輯：王楠]