MMP及TIMP在子宮內膜異位癥中的表達*＊?

范玉香

(贊皇縣醫院，河北贊皇　051230)

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MMP及TIMP在子宮內膜異位癥中的表達*＊?

范玉香

(贊皇縣醫院，河北贊皇051230)

［摘要］目的:探討基質金屬蛋白酶MMP-2、MMP-9及組織抑制因子TIMP-1、TIMP-2在子宮內膜異位癥(EMT)患者血清及腹腔液中的表達及意義。方法:選取行腹腔鏡術EMT患者40例及同期行腹腔鏡術非EMT患者40例作為研究對象，采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法測定兩組患者MMP-2、MMP-9及TIMP-1、TIMP-2在血清和腹腔液中的表達，同時比較EMT不同分期患者血清及腹腔液中MMP-2、MMP-9及TIMP-1、TIMP-2。結果: EMT組患者血清及腹腔液中MMP-2、MMP-9表達水平顯著高于非EMT組(P＜0.05)，EMT組TIMP-1、TIMP-2的表達水平顯著低于非EMT組(P＜0.05) ;隨臨床EMT分期的增加MMP-2、MMP-9表達水平相應升高，Ⅲ～Ⅳ期顯著高于Ⅰ～Ⅱ期(P＜0.05) ;而TIMP-1、TIMP-2的表達水平隨EMT臨床分期增高而降低，Ⅲ～Ⅳ期顯著低于Ⅰ～Ⅱ期(P＜0.05)。結論: MMP-2、MMP-9的高表達與TIMP-1、TIMP-2的低表達，可能參與EMT的發生與發展過程。

［關鍵詞］子宮內膜異位癥;血清;體液，腹腔;基質金屬蛋白酶;組織抑制因子

網絡出版時間: 2016－02－23網絡出版地址: http: / /www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20160223.2101.056.html

子宮內膜異位癥(EMT)是指子宮內膜組織在子宮腔被覆內膜及子宮肌層以外的部位生長、浸潤，導致疼痛、出血、不育等臨床癥狀，是育齡期婦女常見的良性疾病，發病率達10%～15%，嚴重影響婦女身心健康及生活質量［1－2］。EMT的發病機制與經血逆流種植學說、靜脈和淋巴播散學說、免疫學說等相關［3］。研究指出，EMT是一種血管生成依賴性疾病，內膜的種植過程是免疫應答異常、局部炎癥反應和血管新生的過程，在這個過程中間基質金屬蛋白酶(MMP)及其組織抑制因子(TIMP)起著重要的作用，二者以1∶1的比例形成復合物，抑制MMP的活性，調控著對細胞外基質(ECM)中MMP的降解［4－5］。本研究旨在探討基質金屬蛋白酶-2、9(MMP-2、MMP-9)及其組織抑制因子-1、-2(TIMP-1、TIMP-2)在EMT患者血清及腹腔液中的表達及意義。

1　材料和方法

1.1一般資料

選取2014年1月～2015年1月婦科經腹腔鏡術確診為EMT患者40例作為觀察組，符合EMT疾病診斷標準及分期標準［6］，排除有心、腦、腎等器官嚴重疾病，排除免疫、代謝、內分泌等激素依賴性疾病，至少3月內未接受過任何激素藥物治療;年齡23～46歲，平均(31.3±6.7)歲;體重指數(BMI) 16.2～25.2 kg/m2，平均(20.8±3.2) kg/ m2;根據美國生育協會評分標準(r-AFS)分期，Ⅰ～Ⅱ期15例，Ⅲ～Ⅳ期25例。選取同期因子宮肌瘤或不孕癥等行腹腔鏡術的非EMT患者40例作為對照組，其中子宮肌瘤28例，不孕癥12例，引起不孕癥原因為卵巢腫瘤、輸卵管發育不全或不通等，年齡24～46歲，平均(32.0±5.2)歲; BMI 16.3 ～25.7 kg/m2，平均(21.1±3.5) kg/m2。兩組患者年齡、BMI等資料比較差異無統計學意義(P＞0.05)。

1.2方法

所有研究對象于入院第2天清晨7時采集外周靜脈血5 mL，常溫靜置1 h，3 500 r/min離心20 min，取上清液置－70℃保存待檢。腹腔液標本于手術時用無菌注射器吸取子宮直腸陷凹和子宮膀胱陷凹處腹腔液5 mL，3 500 r/min離心20 min，取上清液置－70℃條件保存待檢。采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法測定兩組患者血清及腹腔液MMP-2、 MMP-9和TIMP-1、TIMP-2的水平，試劑盒購自上海西唐生物科技有限公司，由專業人員按照說明書操作。

1.3觀察指標

觀察EMT患者與非EMT患者血清及腹腔液中MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2水平，并比較EMT不同分期患者血清及腹腔液中MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2的差異。

1.4統計學分析

應用SPSS 18.0軟件分析數據，計量資料采用均數±標準差(±s)表示，采用t檢驗，計數資料用χ2檢驗，P＜0.05表示差異有統計學意義。

2　結果

2.1血清MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2

觀察組血清MMP-2、MMP-9表達水平顯著高于對照組(P＜0.05)，TIMP-1、TIMP-2的表達水平顯著低于對照組(P＜0.05)，差異有統計學意義，見表1。

表1　兩組患者血清中MMP-2、MMP-9、TIMP-1 及TIMP-2水平(μg/L，±s)Tab.1 The serum levels of MMP-2，MMP-9，TIMP-1 and TIMP-2 in two groups

表1　兩組患者血清中MMP-2、MMP-9、TIMP-1 及TIMP-2水平(μg/L，±s)Tab.1 The serum levels of MMP-2，MMP-9，TIMP-1 and TIMP-2 in two groups

(1)與對照組比較，P＜0.05

指標　　觀察組(n =40)　　對照組(n =40) 155.2±50.3 MMP-9　 289.3±62.2(1)　191.1±53.5 TIMP-1　 238.7±57.5(1)　401.2±65.5 TIMP-2　 205.5±39.7(1)MMP-2　 245.8±58.7(1)343.7±41.5

2.2腹腔液MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2

觀察組腹腔液中MMP-2、MMP-9表達水平顯著高于對照組(P＜0.05)，TIMP-1、TIMP-2的表達水平顯著低于對照組(P＜0.05)，差異有統計學意義，見表2。

表2　兩組患者腹腔液中MMP-2、MMP-9、TIMP-1 及TIMP-2水平(μg/L，±s)Tab.2 The peritoneal fluid levels of MMP-2，MMP-9，TIMP-1 and TIMP-2 in two groups

表2　兩組患者腹腔液中MMP-2、MMP-9、TIMP-1 及TIMP-2水平(μg/L，±s)Tab.2 The peritoneal fluid levels of MMP-2，MMP-9，TIMP-1 and TIMP-2 in two groups

(1)與對照組比較，P＜0.05

指標　　觀察組(n =40)　　對照組(n =40) 15.3±6.2 MMP-9　27.3±4.4(1)　18.3±5.8 TIMP-1　 975.7±421.5(1)　1 305.5±437.3 TIMP-2　 831.5±305.8(1)MMP-2　25.7±8.5(1)1 131.3±305.7

2.3不同分期EMT患者血清MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2水平

EMT患者Ⅲ～Ⅳ期血清MMP-2、MMP-9的表達水平顯著高于Ⅰ～Ⅱ期，Ⅲ～Ⅳ期血清TIMP-1、TIMP-2表達水平顯著低于Ⅰ～Ⅱ期，差異有統計學意義(P＜0.05)，見表3。

表3　EMT不同分期患者血清MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2水平(μg/L，±s)Tab.3 The serum levels of MMP-2，MMP-9，TIMP-1 and TIMP-2 in EMT patients with different clinical staging

表3　EMT不同分期患者血清MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2水平(μg/L，±s)Tab.3 The serum levels of MMP-2，MMP-9，TIMP-1 and TIMP-2 in EMT patients with different clinical staging

(1)與Ⅰ～Ⅱ期比較，P＜0.05

指標　　Ⅰ～Ⅱ期(n =25)Ⅲ～Ⅳ期(n =15) MMP-2　179.2±39.5　 291.3±54.5(1)MMP-9　210.3±42.2　 335.4±69.5(1)TIMP-1　362.7±71.2　 158.5±42.3(1)TIMP-2　241.5±32.7　 115.7±21.3(1)

2.4不同分期EMT患者腹腔液MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2水平

EMT患者Ⅲ～Ⅳ期腹腔液MMP-2、MMP-9的表達水平顯著高于Ⅰ～Ⅱ期，Ⅲ～Ⅳ期腹腔液TIMP-1、TIMP-2表達水平顯著低于Ⅰ～Ⅱ期，差異有統計學意義(P＜0.05)，見表4。

表4　EMT不同分期患者腹腔液MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2水平(μg/L，±s)Tab.4 The peritoneal fluid levels of MMP-2，MMP-9，TIMP-1 and TIMP-2 in EMT patients with different clinical staging

表4　EMT不同分期患者腹腔液MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2水平(μg/L，±s)Tab.4 The peritoneal fluid levels of MMP-2，MMP-9，TIMP-1 and TIMP-2 in EMT patients with different clinical staging

(1)與Ⅰ～Ⅱ期比較，P＜0.05

指標　　Ⅰ～Ⅱ期(n =25)Ⅲ～Ⅳ期(n =15) MMP-2　18.5±6.7　 27.1±5.0(1)MMP-9　19.3±5.7　 28.9±4.3(1)TIMP-1　 1 215.6±502.1　 870.3±267.9(1)TIMP-2　 1 115.3±375.8　 781.6±215.4(1)

3　討論

EMT被認為是類似癌性浸潤的一種良性疾病，月經期脫落的子宮內膜細胞隨經血逆流，經血管或淋巴管進入腹腔、肝、肺等器官，種植于器官表面并生長。異位內膜本身及其周圍組織血液供應的建立和維持是EMT的發病基礎，目前已發現許多肽類生長因子以自分泌或旁分泌形式促進血管內皮細胞增殖與分化。EMT患者全身及盆腔局部發生了免疫狀況改變，不能對異位的內膜清除，導致機體巨噬細胞數量增加，MMP由巨噬細胞、結締組織細胞、內皮細胞、粒細胞等合成及分泌，是具有高度同源性的內肽酶，可以加快血管內皮細胞新生血管的形成，與整合素相互活化增強細胞間黏附，在內膜細胞的異位種植生長中起促進作用［7－9］。TIMP是MMP的特異性抑制因子，MMP的活性可被TIMP和巨球蛋白所抑制，通過調節MMP的活性調控ECM的更新與破壞［10－11］。基底膜的完整性是判斷異位內膜浸潤與侵襲的重要標志，MMP-2、MMP-9及TIMP-1、TIMP-2在這一過程的調節中具有特殊意義［12］。MMP-2、MMP-9及TIMP-1、TIMP-2主要分布在EMT患者的血管內皮細胞和腺上皮細胞，在間質細胞表達相對較低，于EMT在位內膜和正常子宮內膜血管內皮細胞、腺上皮細胞及間質細胞中的表達率較低［13］。MMP-2、MMP-9的表達隨EMT臨床分期的升高而增強，提示與EMT患者異位內膜的侵襲呈正相關。由于MMP-2 和MMP-9在EMT患者早期就有表達，在異位組織中明顯增高，臨床可通過檢測MMP-2、MMP-9的水平來判斷愈后情況［14］。本研究表明，EMT患者MMP-2、MMP-9在血清和腹腔液中的表達水平顯著高于對照組，隨著臨床分期的增加MMP-2、MMP-9的表達水平也相應升高，本組Ⅲ～Ⅳ期MMP-2、MMP-9的表達水平明顯高于Ⅰ～Ⅱ期，說明MMP-2、MMP-9在異位內膜中的過度表達，使得異位內膜有很強大的水解能力，降解病變周圍的基底膜，使異位內膜在組織內種植生長并使病灶不斷擴大。TIMP通過調解MMP的活性調控著細胞外基質的合成與降解，MMP與TIMP間的平衡如果失調，會引起多種病理改變，這種現象在EMT的發生發展過程中起重要作用，TIMP-1和TIMP-2隨著EMT病情的發展和r-AFS分期的升高其表達水平逐漸降低，而MMP-2和MMP-9活性反而增強［15］。本研究顯示TIMP-1、TIMP-2在EMT的表達水平低于對照組，且隨臨床分期的增加TIMP-1、TIMP-2的表達水平也相應降低，本組Ⅲ～Ⅳ期的TIMP-1、TIMP-2表達水平明顯低于Ⅰ～Ⅱ期(P＜0.05)，使MMP-2/TIMP-2與MMP-9/TIMP-1間的比值增加，平衡出現失調，使異位內膜侵襲力增加，改變了ECM的合成與降解，與文獻［15］報道一致。研究認為MMP與TIMP平衡的失調，改變了ECM合成與降解過程，誘發并促進EMT的發生與發展［16］。

總之，MMP-2、MMP-9的高表達與TIMP-1、TIMP-2的低表達，可能參與EMT的發生與發展，臨床通過檢測其表達水平，對預測疾病的發生發展與轉歸具有重要意義。

4　參考文獻

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(2015－06－23收稿，2015－11－21修回)

中文編輯:戚璐;英文編輯:劉華

·護理學研究·

Expression of MMP and TIMP in the Endometriosis

FAN Yuxiang
(Zanhuang Hospital of Hebei Province，Zanhuang 051230，Hebei，China)

［Abstract］Objective: To explore the expressions of MMP-2，MMP-9，TIMP-1，and TIMP-2 in the serum and peritoneal fluid in patients with endometriosis (EMT) and their clinical significance.Methods: A total of 40 patients with EMT for laparoscopy and 40 patients with non-EMT for laparoscopy at the same period were enrolled in the study.The double-antibody sandwich ELISA was used to detect the expressions of MMP-2，MMP-9，TIMP-1，and TIMP-2 in the serum and peritoneal fluid.Meanwhile，the expressions of MMP-2，MMP-9，TIMP-1，and TIMP-2 in the serum and peritoneal fluid in patients with EMT at different stages were compared.Results: The expression levels of MMP-2 and MMP-9 in the serum and peritoneal fluid in EMT group were significantly higher than those in the non-EMT group (P＜0.05).The expression levels of TIMP-1 and TIMP-2 in EMT group were significantly lower than those in the non-EMT group (P＜0.05).With the increasing clinical staging of EMT，the expression levels of MMP-2 and MMP-9 were correspondingly elevated while the expression levels of TIMP-1 and TIMP-2 were reduced with the increasing clinical staging of EMT.Specifically，the expression levels of MMP-2 and MMP-9 at stageⅢ～Ⅳwere significantly higher than those at stageⅠ～Ⅱ(P＜0.05) while the expression levels of TIMP-1 and TIMP-2 at stageⅢ～Ⅳwere significantly lower than those at stageⅠ～Ⅱ(P＜0.05).Conclusion: The high expressions of MMP-2 and MMP-9 and low expressions of TIMP-1 and TIMP-2 are probably involved in the genesis and development of EMT.

［Key words］endometriosis; serum; body fluid，abdominal cavity; matrix metalloproteinaeses; tissue inhibitor

*［基金項目］河北省科技進步項目(20150261)

［中圖分類號］R711.2

［文獻標識碼］A

［文章編號］1000-2707(2016) 02-0238-04