非洲淋巴細胞瘤病毒感染兒童體液免疫相關指標變化及意義

王宏立，倪金鳳

(1畢節市第一人民醫院，四川畢節551700；2唐山市婦幼保健院)

非洲淋巴細胞瘤病毒感染兒童體液免疫相關指標變化及意義

王宏立1，倪金鳳2

(1畢節市第一人民醫院，四川畢節551700；2唐山市婦幼保健院)

目的 探討非洲淋巴細胞瘤病毒(EBV)感染兒童體液免疫相關指標變化及意義。方法 選取EBV感染兒童428例(觀察組)，其中0～2歲92例、3～5歲281例、6～14歲55例；正常健康兒童428例(對照組)，其中0～2歲90例、3～5歲280例、6～14歲58例。兩組均留取外周血，檢測淋巴細胞總數、B淋巴細胞及其亞群百分比，B淋巴細胞活化因子(BAFF)及其受體(BR3)陽性表達細胞百分比，血清IgG、IgA、IgE及補體C3、C4水平。結果 觀察組各年齡段患兒外周血CD19+總B細胞、CD19+CD38+抗體分泌細胞百分比，BAFF、BR3陽性表達細胞百分比，血清IgG、IgA及補體C3水平均明顯低于對照組同年齡段者(P均<0.01)；其他指標組間比較差異均無統計學意義(P均>0.05)。結論 EBV感染患兒外周血B細胞、抗體分泌細胞、B淋巴細胞表面BAFF和BR3表達及血清IgG、IgA、補體C3水平均下降；體液免疫功能受損可能參與了EBV感染的發生。

非洲淋巴細胞瘤病毒；兒童；體液免疫；B淋巴細胞

非洲淋巴細胞瘤病毒(EBV)是一種皰疹病毒科γ亞科的DNA病毒。EBV感染可累及全身多個系統[1]，感染癥狀多樣，且多不典型，早期診斷困難。兒童對EBV的易感性高[2]，感染后可表現為傳染性單核細胞增多癥(IM)、X-連鎖淋巴組織增生性疾病(XLP)、慢性活動性EBV感染(CAEBV)、EBV感染相關噬血細胞淋巴組織細胞增多癥(EBV-HLH)等， IM是其典型表現[3,4]。EBV感染的發病機制復雜，目前認為主要與細胞免疫有關。本研究探討EBV感染兒童體液免疫相關指標變化及意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2011年3月～2014年6月畢節市第一人民醫院兒科收治的EBV感染患兒428例(觀察組)，均符合EBV診斷標準[5]；男221例，女207例；年齡8個月～14歲，其中0～2歲92例、3～5歲281例、6～14歲55例；臨床表現：IM 183例，XLP 135例，CAEBV 23例，EBV-HLH 87例。選取同期在本院體檢健康兒童428例作為對照組，男220例，女208例；年齡8個月～14歲，其中0～2歲90例、3～5歲280例、6～14歲58例。兩組性別、年齡具有可比性。

1.2 相關指標觀察 兩組均于清晨抽取空腹靜脈血10 mL(觀察組取血時均未接受腎上腺皮質激素及免疫抑制劑等治療)，分為兩份，一份加入乙二胺四乙酸二鈉抗凝，置于4 ℃冰箱保存，用于檢測B淋巴細胞；另一份于37 ℃溫箱放置1 h，置于4 ℃冰箱過夜，3 000 r/min離心10 min，收集上清置于4 ℃冰箱保存，用于免疫球蛋白及補體檢測。

1.2.1 外周血淋巴細胞總數、B淋巴細胞及亞群百分比 取抗凝血標本，采用全自動細胞計數儀計數全血淋巴細胞總數。100 μL抗凝血標本中分別加入CD19單克隆抗體、CD25單克隆抗體、ECD-CD19、PECD20、FITC-CD27、PE-CD38及同型陰性對照IgG-FITC和IgG-PE各20 μL，4 ℃靜置30 min，加紅細胞裂解液，1 000 r/min離心10 min，PBS重懸，采用流式細胞儀計數B淋巴細胞總數及亞群百分比。淋巴細胞標記物：B淋巴細胞為CD19+，初始B淋巴細胞為CD19+CD20+CD27-，記憶性B淋巴細胞為CD19+CD20+CD27+，抗體分泌細胞為CD19+CD38+。

1.2.2 B淋巴細胞活化因子(BAFF)及其受體(BR3)檢測 取抗凝血標本，分別加入B淋巴細胞活化因子FITC-BAFF及其受體PE-BR3、同型陰性對照，采用流式細胞儀計數BAFF、BR3陽性細胞百分比。具體步驟同1.2.1。

1.2.3 免疫球蛋白及補體檢測 取血清標本，采用速率散射比濁法檢測免疫球蛋白IgG、IgA、IgM、IgE，采用ELISA法檢測補體C3、C4。

2 結果

2.1 外周血淋巴細胞總數、B淋巴細胞及其亞群百分比 觀察組各年齡段患兒外周血CD19+總B細胞、CD19+CD38+抗體分泌細胞百分比均較對照組同年齡段者降低(P均<0.01)。見表1。

2.2 外周血BAFF、BR3陽性細胞百分比 觀察組各年齡段患兒外周血BAFF、BR3陽性細胞百分比均低于對照組同年齡段者(P均<0.01)。見表2。

表1 兩組外周血淋巴細胞總數、B淋巴細胞及其亞群百分比比較±s)

注：與對照組同年齡段者比較，*P<0.01。

2.3 血清IgG、IgA、IgE和補體C3、C4觀察組各年齡段患兒血清IgG、IgA、補體C3水平均較同年齡段對照組降低(P均<0.01)。見表3。

3 討論

EBV是一種人類普遍感染的雙鏈DNA皰疹病毒，人是EBV的惟一宿主，超過90%的人群感染過EBV，感染后可終身攜帶病毒造成潛伏感染[6]。

表2 兩組BAFF、BR3陽性細胞百分比比較±s)

注：與對照組同年齡段比較，*P<0.01。

表3 兩組血清IgG、IgA、IgE和補體C3、C4水平比較

注：與對照組同年齡段比較，*P<0.01。

EBV感染主要導致EBV侵襲性疾病和免疫性疾病，可涉及血液、腎臟、肝臟、呼吸道、淋巴結等器官系統[7]。此外，EBV感染還被認為與鼻咽癌、 淋巴瘤、 胃癌等多種腫瘤發生密切相關[8]。兒童對于EBV的易感性更高，流行病學調查顯示，我國3～5歲兒童EBV VCA-Ig抗體的陽性檢出率達90%以上。IM是兒童EBV感染典型表現，也是造成兒童EBV感染后長期發熱的主要因素之一[9]。EBV感染患兒年齡越小臨床表現越不典型，免疫力低者病死率較高。

EBV感染的發病機制復雜，目前認為主要與細胞免疫有關。EBV感染激發強烈的T淋巴細胞免疫反應，分泌炎性介質，導致T淋巴細胞分化異常，機體出現異常細胞免疫反應。因此認為，T細胞介導的免疫反應在EBV感染發生、發展過程中具有決定性作用[10]。成熟B細胞在EBV感染免疫中也具有不可忽視的作用。EBV首先感染口咽部的上皮細胞并在其內復制增殖，由于淋巴組織中B細胞具有EBV受體，因此受感染附近的B淋巴細胞是EBV侵襲的靶細胞，被感染的B細胞進入血液循環傳遞病毒抗原信息至全身其他部位，進而導致相應的全身性感染[11]。此外，EBV可終生潛伏在B細胞中無法被機體免疫系統完全清除，當機體免疫機能缺陷時，潛伏的EBV再次激活并大量復制，呈持續活動性狀態，導致EBV感染的癥狀和體征持續存在或退而復現。

由于新生兒、兒童與成人B淋巴細胞水平有所區別，故本研究將EBV感染患兒及健康兒童按0～2歲、3～5歲和6～14歲年齡段分組。結果表明，三個年齡組EBV感染患兒與相應年齡段健康兒童外周血淋巴細胞總量及初始B細胞、記憶性B細胞比例比較均無統計學差異，而淋巴細胞總量、抗體分泌細胞比例均較相應年齡段健康兒童下降。提示EBV感染患兒的體液免疫功能受損，抗體產生受抑，EBV主要感染B淋巴細胞。

BAFF是表達于多種免疫細胞的Ⅱ型跨膜蛋白，BAFF在B 淋巴細胞的成熟、增殖、活化和發揮免疫功能過程中發揮重要作用。而BR3是BAFF的受體之一，能與BAFF結合從而維持B淋巴細胞的穩態及體液免疫平衡[12]。BAFF及BR3表達增加可在一定程度上增強B細胞的成熟、存活、增殖和分化等，維持B細胞穩態及體液免疫平衡[13]。本研究中0～2歲、3～5歲和6～14歲EBV感染患兒的外周血BAFF、BR3陽性表達細胞百分比均低于同年齡段健康兒童，提示EBV感染患兒B細胞活化功能受損。

作為EBV感染人體后的主要宿主細胞，B淋巴細胞被激活并轉化為漿細胞，產生針對EBV特異性抗原分子的一系列抗體。一般情況下EBV感染后3天就可檢測到抗體，1周后抗體量快速增加，并在2～3周達到頂峰，持續約7周，其中IgM起峰快但持續時間不如IgG。EBV特異性抗體主要包括抗殼抗原抗體(EBV-CA)、抗早期抗原抗體(EBV-EA)和抗核心抗原抗體(EBV-NA16)[14]。EBV感染首先產生的是EBV-CA IgM抗體及隨后的EBV-CA IgG抗體，最后是EBV-EA抗體，而EBV-NA16抗體通常在EBV感染晚期產生。因此，檢測EBV感染患者血清抗體類型，根據EBV感染期間產生不同抗體的特點可初步判斷感染時期[15]。但機體的免疫反應復雜，相關抗原產生的抗體存在時間差異性，EBV感染存在持續性，故臨床僅以某一時期血清抗體類型及水平診斷原發性EBV感染存在一定缺陷。本研究結果顯示，觀察組各年齡段患兒血清IgG、IgA和補體C3水平均低于對照組同年齡段者，但血清IgM、IgE和補體C4水平組間比較差異均無統計學意義。IgM和IgE主要出現在疾病的早期，而IgG和IgA在疾病發生、發展過程中持續存在，可反映機體體液免疫狀況。進一步提示EBV感染患兒體液免疫受損。

綜上所述，EBV感染患兒體液免疫功能受損，這可能是其發病的主要原因。

[1] 魏永緯,王穎超.兒童EB病毒相關疾病的診療進展[J].醫學綜述,2013,19(19):3530-3533.

[2] 汪洋,許紅梅.EB病毒的流行病學研究進展[J].國際檢驗醫學雜志,2010,31(12):1405-1407.

[3] 申昆玲.加強兒童EB病毒感染疾病的相關研究[J].中國實用兒科雜志,2010,25(8):577-579.

[4] Lorenzetti MA, Altcheh J, Moroni S, et al. EBNA1 sequences in Argentinean pediatric acute and latent Epstein-Barr virus infection reflect circulation of novel South American variants[J]. J Med Virol, 2010,82(10):1730-1738.

[5] 張慧,李雙杰,袁遠宏,等.兒童EB病毒感染不同臨床疾病類型免疫功能研究[J].中國實用兒科雜志,2013,28(6):464-466.

[6] Ali AS, Al-Shraim M, Al-Hakami AM, et al. Epstein-Barr virus: clinical and epidemiological revisits and genetic basis of oncogenesis[J]. Open Virol J, 2015(9):7-28.

[7] 汪洋,許紅梅.住院患兒EB病毒感染血清流行病學調查分析[J].中國實用兒科雜志,2011,26(12):924-927.

[8] 李嵬,羅湘建,胡哲煜,等.EBV裂解復制周期調控機制研究新進展[J].病毒學報,2011,27(6):619-623.

[9] 陶佳,陳福雄,陳德輝,等.兒童EB病毒感染及傳染性單核細胞增多癥臨床特點和實驗室檢查分析[J].中國實用兒科雜志,2013,28(3):200-203.

[10] Wang RC, Chang ST, Hsieh YC, et al. Spectrum of Epstein-Barr virus-associated T-cell lymphoproliferative disorder in adolescents and young adults in Taiwan [J]. Int J Clin Exp Pathol, 2014,7(5):2430-2437.

[11] 趙欣,李春艷,宋麗君,等.兒童EB病毒感染相關性疾病特征及分析[J].中國婦幼保健,2013,28(1):5320-5321.

[12] Daniel S, Anikó H, Judit P. Cooperation between signalling pathways leading to survival, proliferation or death of B cells [J]. Ann Rheum Dis, 2011,70(10):A15.

[13] 吳洪坤,周琳,張玲珍,等.直性脊柱炎患者外周血中B淋巴細胞亞群、B細胞活化因子及其受體的表達研究[J].檢驗醫學,2011,26(12):818-822.

[14] 周艷,艾芳.EB病毒抗體檢測在兒童EB病毒感染相關疾病臨床診斷中的應用價值[J].陜西醫學雜志,2010,39(5):544-546.

[15] 劉勇,陳琴,薛紅漫,等.EB病毒抗體檢測在兒童EBV感染相關疾病診斷中的應用價值[J]. 中國小兒血液與腫瘤雜志,2006,11(2):66-68.

倪金鳳 (E-mail: 464941664@qq.com )

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.20.027

R373

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1002-266X(2016)20-0070-03

2015-11-19)