胃癌組織Klf4表達變化及其臨床意義

于偉勇，何敬東，陳小飛，喻曉娟

(淮安市第一人民醫院，江蘇淮安223300)

胃癌組織Klf4表達變化及其臨床意義

于偉勇，何敬東，陳小飛，喻曉娟

(淮安市第一人民醫院，江蘇淮安223300)

目的 探討Krüppel樣因子4(Klf4)在胃癌發生、發展過程中的作用。方法 取54例胃癌患者的癌組織及其配對癌旁正常組織標本，采用RT-PCR技術檢測Klf4 mRNA的相對表達量，采用免疫組化法檢測Klf4蛋白的陽性表達率；分析Klf4蛋白的陽性表達與胃癌患者臨床病理參數的關系。結果 胃癌組織及癌旁正常組織Klf4 mRNA的相對表達量分別為0.12±0.04、0.25±0.06； Klf4蛋白的陽性表達率分別為46.3%(25/54)、77.8%(42/54)；兩組比較P均<0.05。Klf4蛋白的陽性表達與胃癌患者腫瘤臨床分期、組織分化程度、淋巴結轉移有關(P均<0.05)，與患者性別、年齡無關(P均>0.05)。結論 Klf4低表達可能促進胃癌的發生、發展。

胃癌；Krüppel樣因子4；臨床病理參數

據統計，胃癌的發病率在各類惡性腫瘤中居首位[1]。研究發現，胃癌的發生、發展及生物學行為受多個分子信號通路的影響，其中轉錄因子是調控這些分子信號通路的重要因素[2]。Krüppel樣因子4(Klf4)是一種含有鋅指結構的轉錄因子，又稱胃腸富集KLF，在人體多種組織中廣泛存在；可參與調控細胞增殖、分化、凋亡等多種細胞的生物學行為，在不同組織中可與不同的靶基因相互作用，發揮抑癌或促癌作用[3,4]。本研究探討Klf4在胃癌發生、發展中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料 選擇2008年3月～2011年1月在我院行手術治療的54例胃癌患者[男34例、女20例，年齡25～85(53.2±10.4)歲，其中年齡<60歲24例、≥60歲30例]癌組織及其配對癌旁正常組織(距癌組織邊緣>5 cm)標本，均經組織病理檢查明確診斷。組織分化程度：高分化13例，中分化20例，低分化21例；TNM分期：Ⅰ期19例，Ⅱ期13例，Ⅲ期15例，Ⅳ期7例；有淋巴結轉移者31例，無淋巴結轉移者23例。

1.2 胃癌組織及癌旁正常組織Klf4表達檢測 Klf4 mRNA檢測：采用RT-PCR法。取胃癌組織及其癌旁正常組織，采用RNA微量提取試劑盒提取總RNA。總RNA經DNAse Ⅰ處理，使用M-MLV逆轉錄試劑盒逆轉錄合成cDNA；采用ABI prismTM7700型熒光定量PCR儀進行熒光定量PCR反應。Klf4引物設計：上游引物5′-GCCACGTCTCCACACATCAG-3′，下游引物5′-TCTTGGCAGCAGGATAGTCCTT-3′。PCR反應體系為20 μL。反應條件：95 ℃預變性30 s，95 ℃變性5 s，55 ℃退火20 s，共40個循環。采用2-ΔΔCT法計算Klf4 mRNA的相對表達量，以GAPDH基因作為內參。Klf4蛋白檢測： 采用免疫組化S-ABC法[5]。取胃癌組織及其癌旁正常組織，4%甲醛固定，石蠟包埋，4 μm厚切片，0.01 mol/L檸檬酸鹽緩沖液抗原修復，3%過氧化氫阻斷，加入Klf4兔抗人多克隆抗體(1∶1 000)4 ℃過夜，加入二抗室溫孵育30 min，DAB顯色，蘇木素復染，脫水，封片，倒置顯微鏡下觀察結果。以細胞核或細胞質出現棕黃色顆粒為陽性。陽性結果根據染色強度及陽性細胞比例綜合判定。染色強度：無色記0分，淡黃色記1分，黃色記2分，棕褐色記3分；陽性細胞比例：<10%記0分，≥10%～<25%記1分，≥25%～<50%記2分，≥50%～<75%記3分，≥75%記4分。兩項之和≤1分為陰性，≥2分為陽性。分析Klf4蛋白的陽性表達與胃癌患者臨床病理參數的關系。

2 結果

胃癌組織及其癌旁正常組織Klf4 mRNA的相對表達量分別為0.12±0.04、0.25±0.06； Klf4蛋白的陽性表達率分別為46.3%(25/54)、77.8%(42/54)；兩組比較P均<0.05。Klf4蛋白的陽性表達與胃癌患者臨床病理參數的關系見表1。

3 討論

Klf4屬于Klf蛋白家族成員之一，主要在消化道黏膜及上皮細胞中表達[6,7]。研究發現，Klf4可參與細胞增殖、分化及胚胎發育等生命過程的調控。因細胞過度增殖和異常分化是腫瘤的主要生物學特征，故推測Klf4可能與腫瘤的發生、發展密切相關。孫雪萍等[8]研究發現，Klf4在腫瘤中的作用是雙重的，既可作為抑癌基因又可作為致癌基因。在結腸癌的發生、發展過程中，Klf4是一個潛在的抑制基因，人結腸癌細胞中Klf4轉錄水平的甲基化修飾或某些位點的缺失，可導致癌細胞的侵襲性增強[9]；在子宮內膜癌組織中Klf4表達上調，其作為致癌基因發揮促進腫瘤發生的作用[10,11]。

表1 Klf4蛋白的陽性表達與胃癌患者臨床病理參數的關系

胃癌的發生、發展是多種癌基因、抑癌基因共同作用的結果，但其發生機制尚不明確。Hu等[12]研究發現，胃潰瘍組織與正常胃組織Klf4表達比較無統計學差異，而胃癌組織中Klf4表達明顯低于癌旁正常組織。Fang等[13]研究發現，Klf4基因在胃癌組織中的表達低于正常胃組織，且Klf4基因的表達水平與腫瘤組織分級相關，發生淋巴結轉移的胃癌組織中其表達低于未發生淋巴結轉移的胃癌組織。胃癌組織中Klf4表達下調可引起APC表達缺失或下調，通過Wnt/APC/β-catenin信號通路介導胃癌的發生、發展[13]。

本研究結果顯示，胃癌組織Klf4 mRNA的相對表達量及Klf4蛋白的陽性表達率均明顯低于癌旁正常組織，與以往文獻[14，15]報道基本一致。提示Klf4低表達可能參與了胃癌的發生。本研究還發現，胃癌組織Klf4蛋白的陽性表達與腫瘤的臨床分期、組織分化程度及淋巴結轉移有關，提示Klf4表達缺失可能導致胃黏膜屏障破壞，促進癌細胞轉移，其低表達可能提示胃癌患者預后不良。有報道稱，Klf4是控制胃癌細胞周期G1期向S期進展的關鍵介導因子；當Klf4表達缺失或下調時，細胞增殖失去控制，進而促進胃癌的發生、發展[6,7]。但關于Klf4低表達促進胃癌發生、發展的確切機制尚需進一步研究。

綜上所述，胃癌組織中Klf4表達降低，其低表達可能與胃癌的發生、發展有關。

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