STAT3和Ki－67在非小細胞肺癌中的表達①

郭文博，鄒志田，朱曉峰

(佳木斯大學附屬第一醫院，黑龍江佳木斯154003)

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STAT3和Ki－67在非小細胞肺癌中的表達①

郭文博，鄒志田，朱曉峰

(佳木斯大學附屬第一醫院，黑龍江佳木斯154003)

摘要:目的:觀察STAT3和Ki－67在人非小細胞肺癌(NSCLC)組織及癌旁組織中的表達情況，分析兩者的表達水平及其與臨床病理因素的關系。方法:采用免疫組織化學的方法對NSCLC組織及癌旁組織中的STAT3和Ki－67表達水平進行檢測，本次研究共選擇73例NSCLC組織和30例癌旁組織，研究STAT3和Ki－67的表達與患者性別、年齡、組織學類型等臨床病理特征的關系。結果: STAT3在非小細胞肺癌組織中高表達(57.53%)，顯著高于其在癌旁組織中的表達(37.5%) (P＜0.01)。Ki－67在非小細胞肺癌組織中表達的陽性率為75.34%，而癌旁組織的表達率為36.7%。STAT3和Ki－67的表達水平均與性別、年齡和組織學類型無關(P＞0.05)，與淋巴結轉移有關(P＜0.05)。結論:①STAT3在非小細胞肺癌中高表達，尤其在有淋巴結轉移的患者中，提示STAT3在非小細胞肺癌的發生發展過程中積極參與，是肺癌發病機制中的一個重要因子。②Ki－67主要定位于細胞核，在NSCLC中高表達，與性別、年齡和組織學類型無關，但發現與有無淋巴結的轉移具有一定的相關性。

關鍵詞:非小細胞肺癌; STAT3; Ki－67

STAT3是一種雙功能蛋白，主要是通過與酪氨酸磷酸化信號通道相偶聯而發揮作用的，然而STAT3發生過度表達將引起細胞增殖、調亡之間發生平衡的失調。相關研究表明多種人體腫瘤中存在STAT3的過度表達［2］。Ki－67被視為增殖細胞核的相關性抗原，目前被國內外學者作為生物學標記而廣泛使用。惡性腫瘤發生發展的本質是異常細胞無限增殖和凋亡過程受阻，因而Ki－67可作為全細胞周期理想的標記物，目前大量研究表明Ki－67的表達水平上調與腫瘤預后不良具有相關性［3～5］。本課題采用免疫組織化學的方法對NSCLC組織及癌旁組織中的STAT3和Ki－67表達水平進行檢測，從而觀察STAT3和Ki－67在人非小細胞肺癌［1］(NSCLC)組織及癌旁組織中的表達情況，分析兩者的表達水平及其與臨床病理因素的關系，為NSCLC的早期診斷、臨床治療及預后判斷提供新的理論基礎。

1　材料與試劑

1.1材料

收集2013－01～2014－07我院手術切除的非小細胞肺癌存檔蠟塊，并進行系統分析和整理，從中挑選出各項資料齊整的80例，經過詳細的閱片分析最后得到73例有效的病例。本次研究根據WHO標準將73例有效病例進行分型，得到腺癌40例，鱗癌33例，此外還分出無淋巴結轉移的病例有24例，有淋巴結轉移的病例為49例;同時選取癌旁相對正常肺組織30例作為正常對照組(取自距癌組織邊緣＞5cm的肺組織，并經病理證實未查見癌細胞)。在73例非小細胞肺癌組織中，男45例，女28例，年齡34～82歲，平均62.4歲，其中＜60歲的患者有38例，≥60歲的患者有35例。所有患者術前均未進行任何的化療和放療。選取的所有標本用福爾馬林固定后進行石蠟包埋，連續性切片，且都分別行HE染色后重新復習病理。

1.2主要試劑

鼠STAT3單克隆抗體購自武漢博士德生物工程公司，鼠抗人單克隆Ki－67抗體、S－P試劑盒以及EDTA抗原修復液(pH 8.0)均為北京中杉金橋生物科技有限公司產品。DAB顯色試劑盒為武漢博士德生物工程公司產品。不同濃度梯度的酒精以及二甲苯等為中心實驗室提供。

2　方法

2.1實驗方法

免疫組織化學染色檢測［6］STAT3及Ki－67表達，組織經10%甲醛固定和石蠟包埋，5μm厚切片，常規脫蠟和脫水化后，加過氧化物酶阻斷內源性酶的活性，分別加入一抗、二抗進行孵育。DAB顯色，蘇木精復染，封片后鏡下觀察。

2.2結果判定

免疫組化染色結果的判定:陽性結果為NSCLC組織中的腫瘤細胞。STAT3陽性信號定位為腫瘤細胞的細胞質中出現黃色至棕褐色的顆粒，其具體評價標準有相關參考文獻的報道。Ki－67染色定位于細胞核。方法:將染好的組織切片放置于400倍光學顯微鏡下進行計數，觀察視野中的全部腫瘤細胞和免疫染色為陽性結果的細胞(癌旁組織則計數肺泡上皮細胞)，然后計算陽性表達的百分數。若鏡下觀察到STAT3陽性細胞的百分率＜5%則判定為陰性(－)，陽性細胞百分率為5%～25%時判定為弱陽性(+ )，陽性細胞百分率25%～50%判定為陽性()，陽性細胞百分率＞50%時判定為強陽性()［7］。鏡下觀察Ki－67陽性腫瘤細胞百分率＜30%時即可判定為陰性，≥30%時則判定為陽性。

2.3統計學方法

采用SPSS17.0統計學軟件進行結果的分析。所有測得的實驗數據用均數±標準差(±s)表示，檢測的結果采用方差分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

3　結果

3.1 STAT3在NSCLC中的表達

在所選取的73例非小細胞肺癌組織中，STAT3在腫瘤細胞中表達的陽性率為57.53% (42/73)，而癌旁組織的表達率為26.7%(8/30)，差異有統計學意義(P＜0.01)。鏡下觀察免疫組化結果中的陽性細胞表現為腫瘤細胞的胞漿和部分胞核出現棕黃色的顆粒，此結果與相關的文獻報道相一致［8～10］。見圖1。

圖1　STAT3在NSCLC以及癌旁組織中的表達情況

3.2 Ki－67在非小細胞肺癌中的表達

結果顯示Ki－67的表達情況主要定位在腫瘤細胞的胞核中，并且胞核中可見棕黃色的顆粒即為陽性。在所選取的73例非小細胞肺癌組織中，Ki－67在腫瘤細胞中表達的陽性率為75.34% (55/ 73)，而癌旁組織的表達率為36.7% (11/30)，差異有統計學意義(P＜0.01)。見圖2。

圖2　Ki－67在NSCLC以及癌旁組織中的表達

3.3 STAT3的表達水平與臨床病理特征的關系

在所有肺癌標本中，腺癌中的陽性表達率為67.5%(27/40)，在鱗癌中為54.5% (18/33)，差異無統計學意義(P＞0.05)，結果表明STAT3的表達與病理類型無關。此外STAT3的表達與性別、年齡無關(P＞0.05)，而與淋巴結的轉移有相關性(P＜0.05)。見表1。

表1　STAT3的表達與臨床病理特征的關系

3.4 Ki－67的表達水平與臨床病理特征之間的相關性

Ki－67在鱗癌中的表達相對于在腺癌中的表達較高，但無顯著差異性(P＞0.05) ;有淋巴結轉移組陽性表達率明顯高于無淋巴結轉移組，且差異有顯著性(P＜0.01) ; Ki－67的表達與性別、年齡無關(P＞0.05)。見表2。

表2　STAT3的表達與臨床病理特征的關系

4　討論

近年來，關于STAT3信號通路與非小細胞肺癌(non small cell lung cancer，NSCLC)關系的研究表明在NSCLC組織中STAT3的表達水平較在癌旁組織的表達明顯上調，且STAT3表達水平與分化程度具有負相關聯系，淋巴結轉移組比無淋巴結轉移組的表達顯著增加，由此可見STAT3與NSCLC的組織分化水平及淋巴結轉移具有緊密聯系。本次研究通過實驗表明，非小細胞肺癌中STAT3的表達顯著高于正常對照組(P＜0.05)，此結果與相關文獻報道的結果一致。此外，研究還發現了STAT3的表達與病理類型之間沒有特定的相關性，并且發現其在腺、鱗癌中的表達比較不存在統計學上的差異，這一研究結果可能與病例數的選擇以及病例資料的選擇有一定的關系，需要對其進行更深入的研究。Ki－67被視為增殖細胞核的相關性抗原，此次研究表明Ki －67在NSCLC中的表達明顯高于正常對照組，且兩者的差異有顯著性(P＜0.05)。有相關的文獻指出如果細胞的增殖過程越活躍，其染色質的復制增加，造成有絲分裂的活動也越活躍，則Ki－67的表達也就明顯升高。因此，腫瘤細胞的增殖過程發生失控，這一結果促進了腫瘤細胞的增殖高于正常組織，因此就表現為Ki－67的表達出現明顯增高［10］。結果還顯示Ki－67在鱗癌中的表達相對于在腺癌中的表達較高，但無顯著差異性(P＞0.05)，根據此結果可以推斷得出肺鱗癌細胞的增殖活躍程度要高于腺癌的增殖，推測這一結論可能與鱗癌的染色體倍增時間較短，且分裂速度較快有很大的相關性，由此也能夠充分說明Ki－67在反映腫瘤細胞的增殖及生長速度上具有意義，然而此理論的具體機理還有待于進一步的研究探索。STAT3和Ki－67在肺癌中均具有較高水平的表達，因此對于這兩個因子的探究將會進一步的揭示肺癌發生發展的相關機理，也將會成為肺癌診斷以及治療的新的研究靶向，進而為肺癌患者提供更為高效的治療手段，為提高患者的生存周期以及生存質量做出貢獻。

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(收稿日期:2015－04-07)

通訊作者:鄒志田(1963～)男，黑龍江佳木斯人，博士，教授，碩士研究生導師。E－mail: zouzhitian@163.com。

作者簡介:①郭文博(1988～)男，黑龍江佳木斯人，在讀碩士研究生。

中圖分類號:R586.2+4

文獻標識碼:B

文章編號:1008－0104(2016) 02－0111－03