幾種茶提取物對金黃色葡萄球菌生長的抑制作用

沈青山，張　婷，胡蘭蘭，胡梁斌（河南科技學院食品學院，河南新鄉　453003）

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幾種茶提取物對金黃色葡萄球菌生長的抑制作用

沈青山，張婷，胡蘭蘭，*胡梁斌
（河南科技學院食品學院，河南新鄉453003）

摘要：采用96孔板微量法，以氨芐青霉素作為陽性對照，研究幾種不同茶的水提物對金黃色葡萄球菌生長的影響。結果表明，茶提取物對金黃色葡萄球菌生長具有一定的抑制作用，其中發酵茶和非發酵茶質量濃度分別超過0.1 mg/mL和0.05 mg/mL時，隨著質量濃度的增大抑制作用顯著增強；而作為陽性對照的氨芐青霉素質量濃度達到30 μg/mL時，可以完全抑制金黃色葡萄球菌的生長。

關鍵詞：茶提取物；金黃色葡萄球菌；抑制作用

0　引言

食源性病原物金黃色葡萄球菌（Staphalococcus aureus）屬革蘭氏陽性球菌。自然界中金黃色葡萄球菌無處不在，空氣、水、灰塵及人和動物的排泄物中都可找到，是食品污染的常見微生物。每年食源性病原體導致數千萬人患病，且多數導致死亡[1]。金黃色葡萄球菌污染食品可以產生腸毒素；金黃色葡萄球菌是引起人類和動物化膿感染的重要致病菌，也是造成人類食物中毒的常見致病菌之一[2]。美國疾病控制中心報告指出，由金黃色葡萄球菌引起的感染占第2位，僅次于大腸桿菌；在我國金黃色葡萄球菌導致的疾病也時有發生。

近年來，抗生素的大量使用、菌株的耐藥性以及抗生素的殘留問題日趨嚴重。因此，采用天然抗菌物質來抑制金黃色葡萄球菌的生長具有污染小、無不良過敏反應的優點而備受青睞。茶葉作為中國一種傳統的飲品具有良好的抗衰老功能，含有很多對人體具有生理調節功能的成分，可以有效預防和治療多種疾病[3-4]。茶葉中含有豐富的必需氨基酸和非必需氨基酸，其中一些非蛋白氨基酸具有良好的保健功效，γ-氨基丁酸具有降血壓、抗焦慮、治療哮喘、治療癲癇、調節激素分泌等作用[5-6]。普洱熟茶等發酵茶經過渥堆、發酵、陳化及干燥等工藝加工而成，其中在渥堆微生物發酵的過程中會引起茶葉品質以及一些活性成分發生變化，也會產生一些抗菌類物質[7-8]。茶葉中的多酚類物質具有抗菌活性。研究表明，茶中沒食子酸槲皮素等多酚類物質能夠抑制黃曲霉毒素的產生[9-10]，并且槲皮素還可以阻止黃曲霉毒素B1向其環氧化物（具有致癌性）的轉化[11]。茶葉的水提物中茶多酚的含量較高，而且不同種類茶葉水提物的活性成分也不盡相同[12]。本文采用水浸提不同種類的茶葉，用茶葉浸提物研究了對金黃色葡萄球菌的抑制作用，該研究為茶葉的開發利用及其抗菌活性的研究提供參考依據。

1　材料與方法

1.1料與試劑

菌株金黃色葡萄球菌ATCC25923，購于中國工業微生物菌種管理保藏中心；96孔板。

試驗茶葉樣品產地見表1。

表1　試驗茶葉樣品產地

氨芐青霉素（北京索萊寶科技有限公司）、酵母提取物、蛋白胨、氯化鈉、平板計數瓊脂，試劑及試驗中所用到的其他試劑均為化學純。

1.2器與設備

多功能酶標儀，Thermol公司產品；FD-1A-50型冷凍干燥機、真空抽濾裝置、SHZ-A型水浴搖床、UV-7200型可見分光光度計，上海龍尼可公司產品；SHP-160型智能恒溫培養箱，上海滬循科學儀器公司產品；HZQ-F160型智能恒溫搖床，江蘇太倉華利達實驗設備有限公司產品；磁力攪拌器、粉碎機。

1.3驗方法

1.3.1 LB培養基及氨芐青霉素的配置

（1）LB培養基的制備。稱取酵母提取物5.0 g，蛋白胨10.0 g，氯化鈉5.0 g，瓊脂15.0 g，加水1 000 mL于磁力攪拌器上充分溶解，調節pH值為7.4～7.6，分裝三角瓶于121℃高壓滅菌20 min。（注：LB液體培養基不需要加平板計數瓊脂）。

（2）氨芐青霉素的配置。稱取適量的青霉素粉末于蒸餾水中溶解，必須要用無菌濾膜過濾且于-20℃條件下避光保存備用。

1.3.2茶提取物的制備

（1）粉碎浸提。將不同的茶葉于粉碎機中粉碎，取50 g粉碎的茶葉粉末于1 000 mL水中90～95℃條件下水浴振蕩提取1 h，用真空抽濾去掉浸提殘渣，收集濾液。

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（2）冷凍干燥。將收集到的濾液于冷凍干燥機中-40℃條件下冷凍干燥至粉末備用。

（3）茶葉提取物的配置。稱取適量的冷凍干燥粉末用無菌水溶解，無菌濾膜過濾，用于抑菌試驗。

1.3.3金黃色葡萄球菌的活化培養

將菌種劃線培養，挑取金黃色葡萄球菌單克隆于50 mL LB液體培養基中，以37℃，轉速150 r/min搖床培養過夜，再重新吸取培養液200 μL于50 mL培養基中繼續用搖床培養至OD578為0.8，用于后期試驗菌液。

1.3.4抑菌試驗

取適量制備好的金黃色葡萄球菌培養液，用液體LB培養基稀釋至OD578為0.02，置于96孔板中，每孔加入菌液200 μL，用不同的茶葉提取物處理，終質量濃度為0，0.01，0.05，0.10，0.50，1.00 mg/mL，37℃靜置避光培養24 h，用酶標儀測其OD578值，以吸光度的變化得出茶葉提取物對金黃色葡萄球菌的抑菌效果。

取適量制備好的金黃色葡萄球菌培養液，用液體LB培養基稀釋至OD578為0.02，置于96孔板中，每孔加入菌液200 μL，分別用氨芐青霉素處理，終質量濃度為0，10，15，20，25，30，35，40 μg/mL，每個處理做3個平行，于37℃下靜置避光培養24 h，用酶標儀測其OD578值，以吸光度的變化得出氨芐青霉素對金黃色葡萄球菌抑制效果。

2　結果與分析

2.1同發酵茶對金黃色葡萄球菌的抑制作用

不同發酵茶對金黃色葡萄球菌的抑制作用見圖1。

圖1　不同發酵茶對金黃色葡萄球菌的抑制作用

采用不同發酵茶（紅茶、普洱熟茶、布朗喬木熟茶）的提取物處理，金黃色葡萄球菌生長受到不同程度的抑制。當茶提取物質量濃度低于0.1 mg/mL時，隨著處理質量濃度的增加，對金黃色葡萄球菌生長起到了一定的促進作用；質量濃度大于0.1 mg/mL時，對金黃色葡萄球菌具有顯著的抑制效果，并且這種抑制效果呈現質量濃度依賴關系。

2.2同非發酵茶對金黃色葡萄球菌的抑制作用

不同非發酵茶對金黃色葡萄球菌的抑制作用見圖2。

采用不同非發酵茶（綠茶，普洱散茶、生茶，茉莉花茶）的提取物處理，金黃色葡萄球菌生長受到顯著的抑制。抑制效果呈現出質量濃度依賴效應，當茶提取物質量濃度大于0.05 mg/mL時，隨著茶提取質量濃度的增大，抑制效果增強；并且，相比之前茉莉花茶對金黃色葡萄球菌具有較強的抑制效果。

2.3照試驗

圖2　不同非發酵茶對金黃色葡萄球菌的抑制作用

氨芐青霉素對金黃色葡萄球菌的抑制作用見圖3。

圖3　氨芐青霉素對金黃色葡萄球菌的抑制作用

用氨芐青霉素處理金黃色葡萄球菌作為陽性對照。不同質量濃度的氨芐青霉素處理金黃色葡萄球菌，其生長受到顯著的抑制效果；當質量濃度達到20 μg/mL時，金黃色葡萄球菌基本上不再生長。

3　結論

本研究發現，高質量濃度的發酵茶（＞0.1 mg/mL）和非發酵茶（＞0.05 mg/mL）雖然對金黃色葡萄球菌都有顯著的抑制效果，但是低質量濃度條件的發酵茶卻促進微生物生長，這可能是由于在茶的發酵過程中產生了一些適合微生物生長發酵的物質；而未經過發酵的茶中多酚類物質更為豐富，因此表現出較好的抑菌效果。

參考文獻：

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The Inhibitory Effect of Different Tea Extracts on the Growth of Staphalococcus aureus

SHEN Qingshan，ZHANG Ting，HU Lanlan，*HU Liangbin
（Department of Food Science，He'nan Institute of Science and Technology，Xinxiang，He'nan 453003，China）

Abstract：The inhibitory effect of different tea extracts on Staphalococcus aureus is researched in this study.It is found that the growth of Staphalococcus aureus is inhibited in the 96-well plates with the treatment of different concentration tea extracts and the ampicillin as the positive control.The results suggest that the growth of Staphalococcus aureus is inhibited by the tea extracts.And this inhibitory effect of fermented and unfermented tea extracts is more significant with the treatment concentrations more than at 0.1 mg/mL and 0.05 mg/mL while the positive control can completely inhibit Staphalococcus aureus at 30 μg/mL.

Key words：tea extract；Staphalococcus aureus；inhibition

中圖分類號：TS201.3

文獻標志碼：A

doi：10.16693/j.cnki.1671-9646（X）.2016.02.041

文章編號：1671-9646（2016）02b-0046-03

收稿日期：2015-10-31

作者簡介：沈青山（1989—），男，碩士，研究方向為食源性微生物代謝與污染控制。*通訊作者：胡梁斌（1979—），男，博士，副教授，研究方向為食源性病原物控制。