CD147在先天性腎盂輸尿管連接部梗阻組織中的表達及意義

齊燦，胡巖，馬立新，郭付臣，趙學強，苑博，岳丹(河北省兒童醫院，石家莊05000；北京鐵路局石家莊鐵路疾病控制所；天津醫科大學)

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CD147在先天性腎盂輸尿管連接部梗阻組織中的表達及意義

齊燦1，胡巖1，馬立新2，郭付臣1，趙學強1，苑博3，岳丹3(1河北省兒童醫院，石家莊050030；2北京鐵路局石家莊鐵路疾病控制所；3天津醫科大學)

摘要：目的探討CD147在先天性腎盂輸尿管連接部梗阻(UPJO)發病中的作用。方法選擇50例單純UPJO患兒手術切除的腎盂輸尿管連接部狹窄處組織為觀察組，因腎實質腫瘤或腎外傷術中切除的腎盂輸尿管連接部正常組織12例為對照組。采用Western blot法檢測兩組CD147蛋白表達，采用qRT-PCR法檢測兩組CD147 mRNA表達。結果對照組、觀察組CD147蛋白表達量分別為0.10±0.03、0.38±0.04，觀察組CD147蛋白表達量高于對照組(P<0.05)。對照組、觀察組CD147 mRNA相對表達量分別為1.00±0.18、1.63±0.12，觀察組CD147 mRNA表達量高于對照組(P<0.01)。結論UPJO組織中CD147表達增高，CD147可能通過促進腎盂輸尿管連接部組織纖維化參與UPJO的發病過程。

關鍵詞：CD147基因；腎盂輸尿管連接部梗阻；先天性腎積水；纖維化

先天性腎積水是小兒泌尿外科的常見疾病，病因較多，其中先天性腎盂輸尿管連接部梗阻(UPJO)是常見原因[1,2]。研究發現，腎盂輸尿管連接部纖維化在UPJO的發病中具有重要作用，肌細胞間纖維化增生可阻斷肌細胞間的電活動傳導，影響輸尿管收縮舒張功能，導致梗阻[3]。CD147分子為細胞外基質金屬蛋白酶誘導因子，廣泛參與組織纖維化、炎癥反應、腫瘤發生、免疫等過程[4,5]。研究發現，CD147在肝和肺組織纖維化中均發揮重要作用[4～7]。但CD147在UPJO發病中的作用尚不明確。我們檢測了50例UPJO患兒UPJO組織中CD147蛋白及mRNA的表達，探討CD147在UPJO發生發展中的作用機制。

1資料與方法

1.1臨床資料選擇2014年1～12月在我院行離斷性腎盂成形術的50例單純UPJO患兒的腎盂輸尿管連接部狹窄處組織為觀察組，其中男42例、女8例，年齡(3.02±0.21)歲， 均經影像學及術后病理檢查確診。患兒術前均未接受任何相關治療。排除輸尿管息肉、輸尿管瓣膜等原因所致的腎積水及其他段狹窄所致的腎積水。選擇因腎實質腫瘤或腎外傷術中切除的腎盂輸尿管連接部正常組織12例為對照組，其中男9例、女3例，年齡(5.02±0.61)歲。兩組性別、年齡差異無統計學意義。

1.2CD147蛋白表達檢測采用Western blot法。將兩組標本組織超聲裂解，提取總蛋白。取等量蛋白樣品經SDS-PAGE電泳后轉印于PVDF膜上，用脫脂奶粉室溫下脫色，搖床上搖動封閉1 h，加入CD147一抗過夜。次日TBST洗膜后加二抗。將ECL發光液中A液和B液各取0.5 mL混合，立即將膜覆蓋在ECL發光液上，顯影、定影。應用Kodak檢測系統觀察并照相。經Quantity One軟件分析蛋白條帶灰度值，從而得出蛋白相對表達量，進一步進行統計學分析，以α-tubulin作為內參照。

1.3CD147 mRNA表達檢測采用qRT-PCR法。取兩組標本，采用TRIzol一步法抽提總RNA，合成cDNA。采用TaKaRa公司的SYBR Premix Ex TaqTM試劑盒進行PCR反應，總反應體系為20 μL，引物設計采用Primer 6.0軟件，由上海生工生物工程有限公司合成。CD147特異性引物序列：上游5′-ACTCCTCACCTGCTCCTTGA-3′，下游5′-GCCTCCA-TGTTCAGGTTCTC-3′；GAPDH內參照序列：上游5′-GCACCGTCAAGGCTGAGAAC-3′，下游5′-TGGTGA-AGACGCCAGTGGA-3′。CD147 mRNA相對表達量采用2-ΔΔCT的方法計算。

2結果

2.1兩組CD147蛋白表達比較對照組、觀察組CD147蛋白表達量分別為0.10±0.03、0.38±0.04，觀察組CD147蛋白表達量高于對照組(P<0.05)。見圖1。

圖1　兩組CD147蛋白表達情況(Western blot法)

2.2兩組CD147 mRNA表達比較對照組、觀察組CD147 mRNA相對表達量分別為1.00±0.18、1.63±0.12，觀察組CD147 mRNA相對表達量高于對照組(P<0.01)。

3討論

UPJO是導致先天性腎積水最重要的原因之一，發病率為0.13%～0.16%，男性多于女性。在新生兒中，約2/3的UPJO病變發生于左側，雙側病變的發病率為10%～40%[1,8]。目前對UPJO的發病機制尚不明確。研究發現，纖維結締組織增生可引起相應輸尿管組織的不正常收縮，從而導致狹窄性小兒腎積水[3,9]。UPJO部位肌細胞間大量膠原纖維沉積增生后，螺旋狀排列的肌細胞可被縱行排列的纖維組織和肌束取代，使肌細胞互相分離，不能傳遞來自起搏細胞的電活動傳導，影響了其正常收縮與舒張功能，導致輸尿管梗阻，引起腎積水，隨著積水逐漸加重，最終導致腎功能受損[3]。

CD147屬于免疫超家族成員之一，基因定位于19p13，其編碼區由269個氨基酸殘端組成，廣泛表達于多種組織與細胞中，參與組織纖維化、胚胎發育、生精過程、神經系統成熟、腫瘤侵襲、動脈粥樣硬化等多種生理、病理過程[10,11]。研究發現，CD147可通過TGF-β/Smads信號通路調控肝及肺組織纖維化。張大偉等[6]研究發現，轉染CD147基因使其在細胞中過表達后，肝纖維化相關分子轉化生長因子β1(TGF-β1) mRNA表達升高。耿杰杰等[7]研究發現，在小鼠肺間質纖維化中，CD147能促進M1型巨噬細胞誘導Th1細胞分化，進而產生多種細胞因子如TGF-β1等，參與肺組織纖維化過程。近年研究發現，TGF-β1信號通路在UPJO發生發展中發揮重要作用，UPJO組織中TGF-β1表達高于正常患兒[12,13]。因此，CD147可能通過導致腎盂輸尿管連接部組織纖維化參與UPJO的發病過程，其機制可能與TGF-β/Smads信號通路有關。本研究發現，觀察組CD147蛋白及mRNA表達量均高于對照組，提示CD147在UPJO組織中表達增高，可能在UPJO的發病過程中發揮重要作用，其機制可能與其促進腎盂輸尿管連接部組織纖維化有關。

綜上所述，UPJO組織中CD147表達增高，CD147可能通過促進腎盂輸尿管連接部組織纖維化參與UPJO的發病過程。

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(收稿日期：2015-09-24)

中圖分類號：R726.9；R364.3

文獻標志碼：B

文章編號：1002-266X(2016)14-0068-02

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.14.025

通信作者：胡巖(E-mail: docteryanhu@126.com)

基金項目：河北省醫學科學重點研究計劃項目(20150554)。