Xpert MTB/RIF檢測在肺結核和非結核分歧桿菌肺病中的鑒別診斷價值

譚英征, 李遠, 龍云鑄, 李　丹, 傅京力, 周杜鵑, 傅金球

(1. 湖南省株洲市中心醫院, 感染內科, 湖南 株洲, 412007; 2. 湖南中醫藥高等專科學校, 湖南 株洲, 412012)

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Xpert MTB/RIF檢測在肺結核和非結核分歧桿菌肺病中的鑒別診斷價值

譚英征1, 李遠2, 龍云鑄1, 李丹1, 傅京力1, 周杜鵑1, 傅金球1

(1. 湖南省株洲市中心醫院, 感染內科, 湖南 株洲, 412007; 2. 湖南中醫藥高等專科學校, 湖南 株洲, 412012)

關鍵詞:結核分歧桿菌; 非結核分歧桿菌; 利福平耐藥實時熒光定量核酸擴增檢測技術

中國是全球結核病高負擔國家之一，結核患者數量居世界第2位[1]。隨著結核病患者增多，非結核分歧桿菌(NTM)肺病報道逐步增加。NTM肺病是由于感染了NTM引起肺部病變的疾病，表現為咳嗽、咳痰、咯血、發熱等，與肺結核的臨床癥狀和影像學表現極為相似，常被誤診為肺結核，但其治療方案及用藥療程與肺結核不同。本研究對124例結核分歧桿菌和36例NTM感染肺疾病患者進行Xpert MTB/RIF檢測，探討Xpert MTB/RIF在鑒別診斷肺結核和NTM肺病中的臨床意義。

1資料與方法

1.1一般資料

選擇2014年6—11月株洲市中心醫院結核門診初次就診為肺結核的患者。所有患者均進行痰抗酸染色、痰液培養、菌群鑒定，結合患者臨床表現、影像學資料等情況及中華醫學會結核病學分會制定的肺結核、NTM肺病診斷標準[2]，確診為肺結核患者124例，NTM肺病36例。

1.2材料

Xpert MTB/RIF 試劑盒、樣品試劑(SR)為美國Cepheid產品。分歧桿菌涂片鏡檢染色液、酸式羅氏培養基、對硝基苯甲酸(PNB)菌群鑒定培養基均購自珠海貝索公司。

1.3研究方法

所有患者痰液標本均進行痰抗酸染色、羅氏固體培養、菌群鑒定和Xpert MTB/RIF檢測。

1.3.1痰抗酸染色法：依據《中國結核病防治規劃實施工作指南(2008年版)》進行[3]。

1.3.2羅氏固體培養：痰培養采用4%氫氧化鈉處理并分離培養。吸取痰標本到前處理管中，加入4%氫氧化鈉前處理液充分混勻，靜置15 min后取吸管吸取前處理液均勻接種在培養基斜面上，觀察培養情況，記錄生長結果[4]。

1.3.3Xpert MTB/RIF檢測：取1 mL痰液標本與含氫氧化鈉及異丙醇的處理液，按1︰2比例混合，在渦旋震蕩器上震蕩15～30 s，室溫靜置15 min。取混合液2 mL轉移至一次性多室塑料反應盒中，然后將反應盒放置到檢測模塊，儀器進行自動化分析，約2 h后可讀取結果[5]。

1.3.4菌種鑒定：將菌株接種于對硝基苯甲酸菌群鑒定培養基中，不生長為結核分歧桿菌，生長為非結核分歧桿菌[6]。

1.4統計學分析

采用SPSS 13.0統計軟件對Xpert MTB/RIF檢測和固體培養結果進行一致性檢驗(Kappa檢驗)，Kappa≥0.75認為二者一致性較好。

2結果

2.1肺結核和NTM肺疾病患者一般資料比較

入選的124例肺結核患者中，男64例，女60例，年齡17～78歲，平均年齡(44.23±16.35)歲，其中合并慢性腎炎4例(3.23%)，合并糖尿病11例(8.87%)，合并艾滋病3例(2.42%)，合并肺外結核14例(11.29%)。36例NTM肺疾病患者中，男17例，女19例，平均年齡(46.12±15.53)歲，其中合并慢性腎炎1例(2.78%)，合并糖尿病3例(8.33%)，合并艾滋病1例(2.78%)。2組患者年齡、性別差異無統計學意義(P>0.05)。

2.2肺結核和NTM肺病患者Xpert MTB/RIF

檢測結果分析

124例肺結核患者Xpert MTB/RIF檢測陽性率為95.97%(119/124)，36例NTM肺疾病患者中，Xpert MTB/RIF檢測陽性率為8.33%(3/36)。Xpert MTB/RIF檢測鑒別診斷肺結核和NTM肺病的敏感度為95.97%(119/124)，特異度為91.67%(33/36)。Xpert MTB/RIF和固體培養進行Kappa檢驗，K=0.821，二者具有較好的一致性，見表1。

表1　124例肺結核和36例NTM肺病患者的

3討論

近年來結核患者不斷增多，已經成為中國結核病防治工作的一項重大挑戰，給社會帶來巨大的安全隱患，衛計委已將結核病列為全國重點控制的重大疾病之一。部分結核患者經正規抗結核治療效果不佳，痰菌持續陽性，抗結核藥敏試驗結果為原發性耐藥，后經菌種鑒別考慮非結核分歧桿菌感染。非結核分歧桿菌是指除結核分歧桿菌、牛分歧桿菌、非洲分歧桿菌和田鼠分歧桿菌等結核分歧桿菌復合群及麻風桿菌以外的分歧桿菌總稱[7]。非結核分歧桿菌多存在自然環境中，正常人可攜帶，為條件致病菌，其發病率在全球逐年提高。NTM肺病患者與肺結核患者均有肺部病變，臨床表現相似，鑒別困難[8]，且NTM相對少見，不為臨床醫師熟悉，臨床上常被誤診為肺結核。NTM肺病與肺結核二者治療方案和療程顯著不同，大部分NTM對一線抗結核藥物耐藥，如被誤診將極大地增加患者經濟負擔，加重藥物不良反應，引起耐藥甚至廣泛耐藥。因此，早期鑒別診斷結核分歧桿菌和NTM感染對NTM肺病的及時診斷治療、結核分歧桿菌感染的流行病學調查和減少藥物耐藥發生都有重要意義。

目前傳統鑒別結核分歧桿菌和NTM的方法主要是以細菌學為主，通過對患者痰液進行培養，獲得分歧桿菌后再通過生化鑒定或測序來進行菌種鑒定，對實驗室生物安全級別要求高，在資源匱乏的地區不能普及，且耗時長，培養周期為6～8周，不利于患者的早期合理治療，使患者治療處于盲目用藥狀態，所以迫切需要準確、簡便的用于鑒別結核分歧桿菌和NTM的檢測方法[9]。Xpert MTB/RIF檢測法是世界衛生組織為遏制結核病推薦的檢驗方法，是以半巢式實時定量PCR技術為基礎，以rpob基因為靶基因，自動提取DNA后擴增rpob基因的192 bp片段進行檢測，實現同時檢測結核分歧桿菌和利福平耐藥。該系統封閉性及自動化程度高，技術人員僅需將處理好樣本加入反應孔內，系統可自動完成標本純化、離心、DNA提取、DNA特異序列檢測、自動讀出結果，且敏感度、特異度高，為WHO推薦的結核分歧桿菌檢測方法[10]。本研究通過對124例肺結核患者行Xpert MTB/RIF檢測，檢測陽性率為95.97%(119/124)；在36例NTM肺疾病患者中，Xpert MTB/RIF檢測陽性率為8.33%(3/36)。Xpert MTB/RIF檢測鑒別診斷肺結核和NTM肺病的敏感度為95.97%(119/124)，特異度為91.67%(33/36)。Xpert MTB/RIF和固體培養進行Kappa檢驗，K=0.821，二者具有較好的一致性。上述結果表明，應用Xpert MTB/RIF檢測技術對鑒別診斷肺結核和NTM肺病有較高的準確性。在臨床實踐中，通過Xpert MTB/RIF檢測結合患者病史、臨床表現、痰抗酸染色可早期、快速、準確、有效地鑒別肺結核和NTM肺病，為臨床治療方案提供確切依據，進而指導臨床醫師合理用藥，減輕患者痛苦。

參考文獻

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[3]中華人民共和國衛生部疾病預防控制局, 中華人民共和國衛生部醫政司, 中國疾病預防控制中心. 中國結核病防治規劃實施工作指南(2008年版)[S]. 北京: 中國協和醫科大學出版社, 2009: 15.

[4]中國防癆協會基礎專業委員會. 結核病診斷實驗室檢驗規程[S]. 北京: 中國協和醫科大學出版社, 2006.

[5]張治國, 歐喜超, 孫倩, 等. 利福平耐藥實時熒光定量核酸擴增技術檢測痰標本中結核分枝桿菌及其耐藥性的研究[J]. 中國防癆雜志, 2013, 35(1): 31.

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[7]孫薇, 文仲光. 替加環素致重癥藥疹1例[J]. 臨床肺科雜志, 2015, 20(01): 187.

[8]宋艷華, 馬麗萍. 非結核分枝桿菌感染的分子生物學診斷技術研究進展[J]. 臨床肺科雜志, 2014, 19(03): 501.

[9]吳志偉, 王永珍, 楊英姿, 等. 微菌落觀察法鑒別分枝桿菌[J]. 臨床肺科雜志, 2012, 17(10): 1926.

[10]宋世森. 利福平耐藥實時熒光定量核酸擴增檢測技術檢測菌株和痰標本的結果分析[J]. 結核病與肺部健康雜志, 2014(2): 75.

中圖分類號:R 521

文獻標志碼:A

文章編號:1672-2353(2016)07-203-02

DOI:10.7619/jcmp.201607074

收稿日期:2015-11-25