胃癌組織中Vav1蛋白表達與胃癌臨床生物學行為及預后的關系

范立僑，譚明，李勇，檀碧波，王冬，劉慶偉

(河北醫科大學第四醫院 外三科，河北 石家莊 050011)

·論 著·

胃癌組織中Vav1蛋白表達與胃癌臨床生物學行為及預后的關系

范立僑，譚明，李勇，檀碧波，王冬，劉慶偉

(河北醫科大學第四醫院 外三科，河北 石家莊 050011)

目的：探討胃癌組織中Vav1蛋白表達與腫瘤臨床生物學行為及預后的關系，并對Vav1蛋白與轉移相關蛋白MMP-2、TIMP-1的關系進行分析。方法：采用免疫組織化學方法檢測Vav1、MMP-2、TIMP-1蛋白在胃癌及癌旁組織中的表達，收集患者的臨床資料并進行隨訪。結果：Vav1、MMP-2蛋白在胃癌組織中的陽性表達率高于癌旁組織(均P<0.01)，TIMP-1蛋白在胃癌組織中表達低于癌旁組織(P<0.01)。Vav1蛋白與腫瘤分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移、TNM分期相關(P<0.05)。Vav1陽性表達患者5年生存率為26.26%，明顯低于陰性表達患者(50.82%)(均P<0.05)。Cox比例風險回歸顯示，Vav1陽性表達是影響患者預后的獨立危險因素(P<0.05)。Vav1與MMP-2存在正相關關系(P<0.05)。結論：Vav1與胃癌的侵襲轉移有關，Vav1陽性表達是胃癌預后差的標志。

胃癌；Vav1蛋白；侵襲；轉移；預后

研究發現，Vav家族中的Vav1基因在各種生物和細胞信號轉導中扮演重要的角色[1]。Vav1對T和B淋巴細胞的發育、功能及其受體誘導的鈣離子通道具有極其重要的作用[2]。Vav1蛋白可以促進細胞惡性轉化[3]。目前有關Vav1侵襲轉移機制不明，研究證實，Vav1具有原癌基因特征，然而與胃癌關系尚不明確。本研究應用免疫組化方法，分析Vav1與胃癌臨床生物學行為及預后的關系，探討檢測胃癌組織中Vav1蛋白的意義。為初步了解Vav1蛋白的作用機制，我們還檢測了與腫瘤轉移關系密切的MMP-2、TIMP-1蛋白，分析Vav1與它們的關系。

1 資料與方法

1.1 病例來源

本研究收集2009年1月至2010年7月在我院經手術、病理學確診為胃癌的患者160例，其中男123例，女37例，年齡為33～82歲，中位年齡為59歲。均有完整的臨床資料及隨訪，隨訪截止日期為2015年8月。胃癌組為石蠟包埋的癌組織；癌旁組為石蠟包埋的距癌灶邊緣5cm以上的胃組織，病理學證實無癌存在。

1.2 主要實驗試劑

Vav1兔抗人多克隆抗體、MMP-2兔抗人多克隆抗體、TIMP-1兔抗人多克隆抗體均購自武漢云克隆科技股份有限公司。免疫組化試劑盒、濃縮型DAB試劑盒購自北京中杉金橋生物技術有限公司。

1.3 免疫組化染色檢測Vav1、MMP-2以及TIMP-1蛋白表達

用免疫組化二步法檢測Vav1、MMP-2以及TIMP-1蛋白的表達，以PBS緩沖液代替一抗作為陰性對照，以試劑盒提供的組織作為陽性對照。Vav1、MMP-2以及TIMP-1以胞漿出現黃色染色顆粒為陽性。隨機選取5個高倍鏡視野，根據陽性細胞所占比例及染色強弱度計分，表達強度為(-)或(+)記為陰性表達，(++)或(+++)記為陽性表達。

1.4 統計學處理

數據采用SPSS 13.0統計軟件進行處理，采用χ2檢驗、Spearman相關性分析、Kaplan-Meier法生存分析、Cox比例風險回歸模型對結果進行分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 胃癌組織中Vav1、MMP-2以及TIMP-1的表達與腫瘤生物學的關系

Vav1陽性表達率在胃癌組織中高于癌旁組織(χ2=12.818，P<0.001)(表1)。TIMP-1陽性表達率在胃癌組織中明顯低于癌旁組織(χ2=19.031，P<0.001)(圖1)。Vav1陽性表達率與腫瘤分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移以及TNM分期相關(分別χ2=4.264，P=0.039；χ2=7.385，P=0.007；χ2=4.251，P=0.039；χ2=5.464，P=0.019)(表2)。MMP-2陽性表達率在胃癌組織中顯著高于癌旁組織(χ2=76.098，P<0.001)。

表1 Vav1、MMP-2以及TIMP-1的表達情況

組 別Vav1MMP-2TIMP-1陽性/例陽性率/%陽性/例陽性率/%陽性/例陽性率/%癌旁組6741.884326.8810263.75胃癌組9961.8812175.636339.38χ2值12.81876.09819.031P值<0.001<0.001<0.001

A.Vav1在胃癌組織中的陽性表達；B.Vav1在癌旁組織中的陰性表達

圖1 Vav1在胃癌組織及癌旁組織中的表達 Elivision×400

2.2 胃癌組織中Vav1的表達與預后的關系

Vav1陽性表達患者5年生存率為26.26%，陰性表達患者5年生存率為50.82%(χ2=4.550，P=0.033)。Kaplan-Meier生存分析顯示，Vav1陽性表達患者的生存率低于陰性表達的患者(圖2)。Cox比例風險回歸顯示，Vav1的陽性表達是胃癌預后的獨立危險因素(表3)。

表2 胃癌組織中Vav1的表達與胃癌臨床生物學行為的關系

臨床生物學特征nVav1蛋白 陽性/例 陽性率/% χ2值P值性別1.8220.177 男性1238367.48 女性371643.24年齡0.0260.871 <60845363.10 ≥60764660.53部位0.3810.826 賁門胃底694260.87 胃體/竇684058.82 全胃231878.26大小1.4590.227 ≤5cm723758.33 >5cm886264.77大體類型(Borrmann)0.8120.846 Ⅰ型4250.00 Ⅱ型482552.08 Ⅲ型855665.88 Ⅳ型231669.57分化程度4.2640.039 高/中分化894247.19 低/未分化715780.28浸潤深度7.3850.007 T1、T2541833.33 T3、T41068176.42脈管瘤栓0.0570.812 無1298162.79 有311858.06淋巴結轉移4.2510.039 無622641.94 有987374.49遠處轉移0.5830.445 無1529663.16 有8337.50TNM分期5.4640.019 Ⅰ、Ⅱ823643.90 Ⅲ、Ⅳ786380.77

圖2 胃癌中Vav1表達與預后關系的K-M曲線

表3 Vav1的表達與預后的多因素分析

因 素B值SE值Wald值df值SigExp(B)Vav12.1350.34338.65210.0008.458TNM分期1.1460.27517.41710.0003.145脈管瘤栓1.2890.26922.94510.0003.630

2.3 胃癌組織中Vav1、MMP-2及TIMP-1表達之間的相關分析

結果顯示，Vav1與MMP-2呈正相關，差異有統計學意義(P<0.001，r=0.454)。Vav1與TIMP-1以及MMP-2與TIMP-1無明顯相關性(P=0.746，r=-0.026；P=0.810，r=-0.019)。

3 討 論

胃癌具有較強的侵襲轉移力，這是胃癌預后差的重要原因[4-5]。Vavl蛋白在不同的信號傳導通路激活自然殺傷細胞，觸發自然殺傷作用[1-2，6]。Sebban等[7]報道，乳腺癌組織中Vav1的表達顯著高于癌旁正常組織。Fernandez-Zapico[8]發現，胰腺導管癌組織中Vav1的表達顯著高于癌旁正常組織。齊瑤等[9]發現，抑制非小細胞肺癌中Vav1蛋白的表達，腫瘤分化程度降低，以上結果均說明Vav1與惡性腫瘤關系密切。

本研究結果顯示：Vav1蛋白的陽性表達率在胃癌組織中為61.88%，高于癌旁組織；Vav1的表達與腫瘤分化程度、腫瘤浸潤深度、淋巴結轉移以及TNM分期相關，提示Vav1可能參與了胃癌侵襲轉移。5年生存率Vav1陽性表達患者低于陰性者，多因素分析提示，Vav1的陽性表達是影響胃癌預后的獨立危險因素，提示Vav1蛋白可能是胃癌預后差的標志物。

為了解Vav1與胃癌侵襲轉移的關系，本研究還檢測MMP-2、TIMP-1在胃癌中的表達，MMP-2的陽性表達率在胃癌組織中顯著高于癌旁組織；TIMP-1的陽性表達率在胃癌組織中明顯低于癌旁組織。相關性分析顯示，Vav1與MMP-2呈正相關，說明Vav1與MMP-2在胃癌的侵襲轉移中可能起協同作用，對此還需進一步研究。

[1] BUSTELO X R.Vav family exchange factors：an integrated regulatory and functional view[J].Small Gtpases，2014，5(2):1-12.

[2] MANES T D，POBER J S.TCR-driven transendothelial migration of human effector memory CD4 T cells involves Vav，Rac，and myosin ⅡA[J].J Immunol，2013，190(7):3079-3088.

[3] LAZER G，KATZAV S.Guanine nucleotide exchange factors for Rho Gtpases：good therapeutic targets for cancer therapy?[J].Cell Signal，2011，23(6):969-979.

[4] 聶魯愚，朱海濤，謝敏.胃癌患者外周血骨髓干細胞水平變化的初步研究[J].東南大學學報：醫學版，2016，35(2)：226-228.

[5] 姚遠，李艷，趙鴻梅.MTA1在胃癌細胞系和胃癌組織中的表達定位以及臨床意義[J].東南大學學報：醫學版，2012，31(2)：158-161.

[6] KATZAV S.Flesh and blood：The story of Vav1，a gene that signals in hematopoietic cells but can be transforming in human malignancies[J].Cancer Lett，2007,255(2):241-254.

[7] SEBBAN S，FARAGO M，GASHAI D，et al.Vav1 fine tunes p53 control of apoptosis versus proliferation in breast cancer [J].PLos One，2013，8(1):e54321.

[8] FERNANDEZ-ZAPICO M E，GONZALEZ-PAZ N C，WEISS E，et al.Ectopic expression of Vav1 reveals an unexpected role in pancreatic cancer tumorigenesis[J].Cancer Cell，2005，7(1):39-49.

[9] 齊瑤，李潤美，于津浦，等.Vav1蛋白在非小細胞肺癌浸潤T淋巴細胞中的表達及意義[J].中國免疫學雜志，2013，29(3):279-282.

Expression of Vav1 protein in gastric cancer and it′s relationship with clinical biological behaviors and prognosis of gastric cancer

FAN Li-qiao，TAN Ming，LI Yong，TAN Bi-bo，WANG Dong，LIU Qing-wei

(TheThirdDepartmentofSurgery，theFourthHospital，HebeiMedicalUniversity，Shijiazhuang050011，China)

Objective: To explore the relationship between the expression of Vav1 protein and clinical biological behavior，prognosis of gastric cancer，and to analysize of the relationship among Vav1 protein MMP-2 and TIMP-1 of the metastasis associated protein.Methods:Expressions of Vav1，MMP-2，TIMP-1 proteins in gastric cancer and paracancerous tissues were tested by immunohistochemistry.Data of clinicopathological characteristics and follow-up were also collected.Results: The expressions of Vav1，MMP-2 in gastric cancer were higher than in paracancerous tissue(allP<0.01)，whereas expression of TIMP-1 was lower in gastric cancer than in paracancerous tissues(P<0.01).The expression of Vav1 in gastric cancer was correlated with the tumor differentiation，tumor infiltration depth，lymph node metastasis and TNM stage(allP<0.05).Five years survival rate in patients with Vav1 positive was 26.26%，and the negative was 50.82%(P<0.05).Cox proportional hazard regression showed that the positive expression of Vav1 was an independent risk factor affecting the prognosis of patients(P<0.05).The expression of Vav1 was positive correlated with MMP-2(P<0.05).Conclusion:Vav1 is involved in the invasion，metastasis of gastric cancer，and positive expression of Vav1 may be an independent risk factor for the prognosis of patients with gastric cancer.

gastric cancer；Vav1 protein；invasion；metastasis；prognosis

2016-06-03

2016-08-25

國家自然科學基金資助項目(81372580)；河北省自然科學基金資助項目(H2016206173)；河北省科技項目(14277779D)

范立僑(1963-)，男，山東淄博人，主任醫師，教授。E-mail：drflq@sina.com

李勇 E-mail：li_yong_hbth@126.com

范立僑，譚明，李勇，等.胃癌組織中Vav1蛋白表達與胃癌臨床生物學行為及預后的關系[J].東南大學學報:醫學版，2017，36(1)：4-8.

R735.2

A

1671-6264(2017)01-0004-05

10.3969/j.issn.1671-6264.2017.01.002