LAMP技術在中藥材摻假檢測方面的應用

楊柳 陳宇飛 王磊 張一

摘要：針對日益嚴重的中藥材摻假事件，對環介導等溫擴增（loop-mediated isothermal amplification，LAMP）技術在中藥材摻假檢測方面的應用進行研究，旨在為中藥摻假檢測中LAMP技術更廣泛、更深入的應用提供一定的幫助。

關鍵詞：LAMP；中藥材；摻假；檢測；應用

中圖分類號： R282.5 文獻標識碼： A DOI編號： 10.14025/j.cnki.jlny.2016.09.053

“一物有謬，便性命及之”，藥材真偽不僅關乎治療效果，而且還關乎患者生命[1]。由于中藥材摻假事件頻發，藥材安全問題日益嚴重[2]，而傳統中藥材摻假檢測方法，如性狀鑒別、分光光度法、色譜法等，已無法滿足檢測的要求。近20年間，國內外學者一起致力于運用生物技術對中藥進行研究，尤其是分子標記技術在中藥鑒定中的應用是目前最令人鼓舞的進展之一[3]。本文針對LAMP技術在中藥材摻假檢測方面的應用進行研究，旨在為LAMP技術在中藥材摻假檢測中更好的應用提供一定的幫助。

1 LAMP技術介紹

LAMP技術是Notomi等在2000年建立的一種新的體外擴增特異DNA片段的分子生物學技術[4]，在65℃恒溫條件下幾十分鐘即可完成核酸擴增。

2 LAMP技術在中藥材摻假檢測方面的應用

2.1用于人參摻假檢測

人參在《神農本草經》中被列為上品，具有大補元氣、強心固脫、安神生津的功效，自古以來，價格較昂貴，因而出現了許多偽品[5]。明代李時珍對沙參、薺尼亂人參析之頗詳，足見人參偽品古亦有多種。

趙源等[6]以線粒體基因 nad1為靶基因設計特異性引物，建立了人參的LAMP檢測方法，能夠在1小時內完成檢測，靈敏度比常規PCR 高10倍，經驗證能夠區分人參及其近緣種，以及人參制品及其常見偽品。

2.2用于冬蟲夏草摻假檢測

冬蟲夏草一直被列為滋補品之首，并有“東方傳奇式珍寶”之美譽[7]。市場上常見的混淆品為有涼山蟲草、蛹草、分枝蟲草等。

李奎等[8]將包括冬蟲夏草在內的6種不同蟲草進行LAMP擴增，建立了冬蟲夏草的環介導等溫擴增快速檢測方法。

2.3用于金銀花摻假檢測

山銀花等與金銀花的原植物是近緣種，性狀特征與金銀花相似，當金銀花價格升高時，部分商家常以山銀花充當金銀花進行銷售，謀取利潤[9]。

蔣超[10] 建立了快速、簡便、現場化的金銀花分子鑒別方法，當溫度為65℃時，能鑒別金銀花與其同時偽品，解決了金銀花分子鑒別中操作復雜，檢測時間長的問題。

2.4 用于鉤吻摻假檢測

鉤吻是馬錢科植物葫蔓藤的全草，又名斷腸草、野葛、毒根、大茶藥等，由于有劇毒，民間一直以外用為主，忌內服，多為搗碎或研磨后調敷患處，也可以煎水洗或煙熏，具有祛風散寮、消腫止痛、攻毒殺蟲的功能[11]。

余淑琳[12]等采用改良CTAB法提取鉤吻、金銀花和山銀花的總DNA，利用PCR反應對psbA-trnH和trnL-trnF序列進行擴增，設計鉤吻LAMP引物，從而成功鑒別出鉤吻和金銀花類藥材及其水提液。

3 LAMP技術的優點

在中藥材摻假檢測方面， LAMP技術具有較強的特異性、較高的靈敏度和較快的檢測速度。趙源等[6]建立的人參的LAMP檢測方法，能夠在60分鐘內完成檢測。綜合各文獻數據，可得出結論：LAMP技術用于中藥材鑒定領域的基本反應可以在60～90 分鐘內完成，如果加入環引物，則能使反應時間縮短為30～45分鐘。李奎等[8]建立的冬蟲夏草的環介導等溫擴增快速檢測方法，LAMP最低檢出限達6 pg/mL。綜合各文獻數據，可得出結論：與PCR鑒定方法相比，LAMP鑒定靈敏度通常是常規PCR的10～100倍。LAMP檢測不需要復雜的儀器設備，檢測現場只需配一臺普通的水浴鍋，就可以完成中藥材的摻假檢測，對于農村、基層非常適用。

4 結語

LAMP檢測技術適用于進行中藥材摻假的實時定性檢測。相信隨著LAMP檢測技術的發展和研究的深入，在未來，它必將在中藥材摻假檢測方面有更好的應用，也必將推動中藥材摻假檢測技術朝著更便捷、更廉價、更準確的方向發展。

參考文獻

[1]蔣超，黃璐琦， 袁媛，等. 金銀花中幾種分子的真偽鑒別方法比較及其研究進展[J].世界科學技術—中醫藥現代化，2014，16（08）：1831-1837.

[2]瘳保生，宋經元，謝彩香，等.道地藥材產地溯源研究[J].中國中藥雜志，2014，39（20）：3881-3888.

[3]黃璐琦，袁媛，袁慶軍，等. 中藥分子鑒定發展中的若干問題探討[J].中國中藥雜志，2014，39（19）：3663-3667.

[4]何曉華，頓玉慧，盧力，等.環介導等溫擴增技術在腸桿菌科致病菌檢測中的研究進展[J].食品科學，2014，35（19）：312-317.

[5]尹青青.人參及其偽品鑒別[J].中國誤診學雜志，2007，7（13）：3044-3045.

[6]趙源，宋云，李明福，等.基于LAMP的人參物種鑒定技術的研究[J].植物檢疫，2015，29（05）：30-34.

[7]劉春泉，宋江峰，李大婧，等.北冬蟲夏草多糖組分的分離純化及結構研究進展[J].食品科學，2007，28（01）：370-373.

[8]李奎，李琦，袁媛，等.環介導等溫擴增法鑒定檢測冬蟲夏草[J].中草藥，2011，42（08）：1605-1608.

[9]汪楠楠，周建理， 楊青山，等.市售金銀花及其混偽品的微性狀鑒別[J].安徽醫藥，2014，18（03）： 450-452.

[10]蔣超.中藥現場快速鑒別方法的建立——以金銀花為例[D].北京：中國中醫科學院，2010.

[11]劉浩，俞昌喜.鉤吻的研究進展[J].福建醫科大學學報，2008，42（05）：469-472.

[12]余淑琳，蔣超，黃璐琦，等.基于環介導等溫擴增技術快速鑒別鉤吻[J].中藥材，2014，37（04）：598.