不同區域小油桐種質差異與ISSR分子標記分析

于詠

摘 要 隨著社會的進步和經濟的不斷發展，我國的技術方面發生了很大變化。因此對于小油桐的研究有了很大的進展，對于小油桐的種質差異進行了生物研究，與ISSR分子標記相結合，進而引出小油桐種質差異與地域的關系，研究小油桐種質差異是否與地域有關。就不同地域的小油桐進行了研究，觀察導致小油桐發生種質差異的原因，分別從不同的地區引進小油桐，結果顯示：小油桐的種質差異與地理位置沒有必然的聯系，

關鍵詞 小油桐；區域種質差異；ISSR分子標記

中圖分類號：S794.3 文獻標志碼：B 文章編號：1673-890X（2016）15--02

對于小油桐產生種質差異的原因有多種，其中認為地域是一方面的原因。小油桐原產地是在美洲，但在我國的云南、廣西、海南等地均有大面積的種植，當然在其他地區也有少數的種植[1，2]。小油桐種子的含油率是非常高的，且含有豐富的蛋白質，最重要的是生長速度快，發芽率高，這使小油桐的存活率很高。此外，小油桐是一種環保的植物，目前我國的原油是非常緊缺的，因此小油桐是理想的生產生物柴油的能源植物。

1 不同區域小油桐種質資源的收集

本文通過對不同地區的小油桐進行研究，并通過進行ISSR分子標記得出小油桐產生種質差異的原因。根據種植面積的不同，收集的小油桐種子主要來自我國的臺灣、云南、貴州農科院、江蘇沐陽、江西九江、湖北咸豐6個地區，見表1。此外，還有來自貴州、福建、重慶以及云南的小油桐樹苗，分別對這些小油桐種子和小油桐樹苗進行注冊，主要是用來進行ISSR分子標記，其中注冊見表2。

對于來自不同地區的小油桐種子及小油桐樹苗進行了收集，并進行了編號，其目的主要是收集小油桐基因資源，選取有代表性的地區，而且該地區種植大面積的小油桐，在收集的過程中，要減少其他方面帶來的影響，這樣才會使結果更加準確，減少誤差。要研究影響小油桐種質差異是否與地域有關，需要做到的是保證其他條件相同，只考慮不同地域的小油桐，通過比較小油桐的種子形態特征、顆粒質量以及含油率的測試，對小油桐種質資源進行ISSR分子標記等，從而更好地得出小油桐與地域的關系。通過研究得出適合小油桐生長的環境，為以后小油桐的開發利用奠下基礎，這樣既能培育出高品質的小油桐，又能為國家帶來能源物質，還對我們國家的環保有著重要貢獻。

2 小油桐種質資源的ISSR分子標記

2.1 小油桐種質的檢查與觀測

需要對于收集的小油桐種子進行一定的處理，看看種子是否出現發霉或發芽等情況，對于出現上述情況的種子將不能使用，應及時摒棄，否則會給實驗結果帶來影響，影響小油桐的最后測量結果，對于油桐的處理首先做的是利用天平進行各取小油桐百粒質量[3]，然后對小油桐進行去皮，根據種子的質量以及種仁的質量得出小油桐種子的出仁率，對于小油桐種子的含油率可以使用粗脂肪測定方法進行測定，最后得出小油桐種子的出油率，在對小油桐種子進行觀測時，要全面考慮各方面的原因，要及時處理可能會影響結果的問題。小油桐對于我國的發展有著非常重要的作用，利用它可以生產生物柴油，也可用來進行生物防治，當然還可以進行環保，可以使我國的資源產生非常大的效益，可以預測，在未來一段時間內，它將會得到更廣泛的應用，將會用在生活的方方面面，這對我們的生活是非常有利的。

2.2 小油桐種質資源的ISSR分子標記

利用ISSR分子對小油桐種質資源進行分子標記，進行標記的引物會出現不同的序列，當然擴增的條帶也不相同，對小油桐種質資源進行的ISSR分子標記主要分為DNA提取和ISSR的PCR擴增。首先需要做的就是提取小油桐的基因組總DNA，對得到的多條ISSR引物進行篩選，最后得到幾條帶清晰，并重復性非常好的引物，對于PCR技術需要使用酶、緩沖液、引物、模板和PCR反應程序等，最后需要用到的是電泳，對于生物電泳需要嚴格控制溫度，溫度或高或低都會給結果帶來很大的誤差，最后在凝膠成像儀上觀察照相，根據呈現出來的像進行分析，在電泳圖上每一條帶作為一個標記，代表一個結合反應的位點，按照同一個水平位置擴增條帶的出現與否進行統計，然后分別進行標記，在進行標記的過程中，會出現各種各樣的問題，因此需要及時處理在進行標記的過程中出現的各種問題，并減少誤差。但是在實驗的過程中會出現各種各樣的誤差，有些誤差是不可避免的，但是有些誤差是可以避免的，我們要盡量避免那些不必要的誤差，這樣才能保證結果的準確性，才能得到準確的結果。

3 對小油桐進行ISSR分子標記的結果與分析

3.1 小油桐種子形態以及百粒質量和出仁率分析

從不同的地區收集的小油桐種子在形態上差別不大，但是種子在大小上存在一定的差異。從外形上看，云南引進的小油桐種子較大，貴州引進的小油桐種子最小，其余的居中，對從不同地域收集的種子進行了縱橫徑測量，其中最長的是云南引進的種子，最小的是貴州引進的小油桐種子，其余的都比較相近，從橫測量結果看，類似于縱徑，從百粒質量方面來說云南的小油桐種子最重，同樣出油率也是最高的[4]，但是從臺灣引進的小油桐種子出油率最低，這與臺灣種保存時間有關。綜上所述，可以發現云南的小油桐種子不僅種子較大，而且出油率也是非常高的，貴州種種子比較小，臺灣種出油率比較低，除了與保存時間有關之外，還與溫度有關，可以看出小油桐的種質差異與地域存在一定的差異，但是不能判斷小油桐與不同地域有必然的聯系，當然在進行ISSR標記的過程中，會出現誤差，因此結果還會存在一定的誤差，不能完全判斷小油桐與地域之間一定存在某種聯系。所以，要正確分析出現的問題以及研究的結果。最后結果得出：從我們收集的6種小油桐種子外觀來看：形態差別不大，但是個體差別較大，云南收集的小油桐種子性狀最佳，可以在合適的地區進行推廣，可以進行大面積的種植，這樣有利于我國小油桐的生產和利用。

3.2 小油桐ISSR分子標記結果的分析

至今為止，ISSR分子標記技術已經應用于很多的方面，主要是對遺傳多樣性進行分析，并取得了很好的結果，用8條ISSR引物對收集的小油桐進行PCR擴增技術，在所用的引物中，其中有3條不能擴增出明顯的多態性條帶，其余的5條引物可以，可以從得到結果看：可以明顯鑒別出來自臺灣、貴州以及重慶的小油桐種子，其中來自貴州的種子有著明顯的不同，說明我國不同地域種植的小油桐種子可能出自相近的種源，與所在的地理位置之間沒有很大的聯系，從結果可以推測出云南小油桐可能來自不同的地區，也可能是云南小油桐來自國外。以后還需要更多的進行分析測試，同樣建立多個示范種植基地，這樣不僅可以相互參照，還有利于選出品種較好的小油桐，根據不同的需要進行不同的改良；同時，要多方面考慮可能會出現的問題，遇到問題時，要及時解決不可推脫。根據小油桐本身的特性，可以知道小油桐是極具潛質的能源物質，此外，小油桐還是經濟作物，小油桐可以用來生產生物柴油，這是非常重要的。

此外，小油桐也可以進行水土防治以及生物防治，有利于環保，除了這些，小油桐還有很多的優點，我們要利用這些優點，可以結合具有優良特性的小油桐進行改良，通過示范種植，達到改良小油桐性狀的目的，在示范種植期間，要定期關注小油桐的生長狀態，對于不同的小油桐種質資源進行不同的劃分，盡最大可能的培育出具有高油、高效的小油桐；同時，生產出具有不同用途的優良品種，

4 結語

在我國，小油桐的覆蓋面積非常大，因此形成了豐富的生物資源。小油桐是極具潛質的經濟作物和能源產物，小油桐的用處非常廣泛，利用小油桐可以生產生物柴油，這會增加我國緊缺的能源物質，此外，小油桐還可以藥物研制、生物防治、環保等。目前，小油桐已經應用于我國很多的領域，本文通過對不同地區采集的小油桐種質資源ISSR標記的分析，可以為以后的小油桐培育打下一定的基礎，改良出能夠進行生物防治及高級凈化等不同用途的優良品種。

參考文獻

[1]徐偉.油桐屬植物SSR分子標記的開發和種質遺傳多樣性的研究[D].揚州：揚州大學，2012.

[2]向青.川渝地區油桐種質資源評價和核心種質的初步構建[D].雅安：四川農業大學，2012.

[3]朱炳耀，楊志敏，莊志鴻，等.不同區域小油桐種質差異與ISSR分子標記研究[J].中南林業科技大學學報，2013，4（15）：68-69.

[4]賈寶光.油桐SSR分子標記的開發與遺傳多樣性的研究[D].長沙：中南林業科技大學，2015.

（責任編輯：劉昀）