黃絲菌多糖的單糖成分及抗氧化活性探析

趙大群 丁祥 劉露 錢葉 侯怡鈴

摘 要 實驗采用黃絲菌（Canthar-ellus cibarius Fr）子實體，經(jīng)熱水提取、乙醇沉淀、柱層析以及透析處理，得到黃絲菌多糖（CC-1），采用三氟乙酸水解黃絲菌多糖樣品形成單糖，結(jié)合高效液相色譜分析法（HPLC法）分析了其單糖成分；同時，研究了低濃度黃絲菌多糖的抗氧化活性。結(jié)果表明，黃絲菌多糖由甘露糖與木糖組成，比例為7∶1?？寡趸瘜嶒灡砻鳎S絲菌多糖對ABTS+自由基的清除能力在0.5～5.0 mg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)呈正相關(guān)，對DPPH-自由基也有一定清除作用。

關(guān)鍵詞 黃絲菌多糖；高效液相色譜法；單糖成分；抗氧化活性

中圖分類號：TS201.4 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B 文章編號：1673-890X（2016）12--02

黃絲菌（Canthar-elluscibarius Fr.）又稱雞油菌、杏菌，是四川、云南地區(qū)一種常見野生食用菌。其子實體肉質(zhì)，全菌杏黃色、蛋黃色或枇杷黃色，有濃郁的杏仁果香味[1，2]。本研究主要以黃絲菌菌體為原料純化得到黃絲菌多糖（CC-1），通過高效液相色譜分析法（HPLC法）對黃絲菌多糖（CC-1）的單糖結(jié)構(gòu)進(jìn)行了分析，同時對低濃度黃絲菌多糖的抗氧化活性進(jìn)行了初探，為黃絲菌多糖（CC-1）的開發(fā)利用提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要材料與儀器

1.1.1 實驗材料

黃絲菌采自四川省小金縣海拔3 500 m的高原地帶，由西華師范大學(xué)丁祥教授鑒定。

1.1.2 藥品試劑

DPPH試劑，Sephadex G-100 column，濃硫酸、苯酚、無水乙醇、氫氧化鈉、三氟乙酸；維生素C；ABTS試劑；其他化學(xué)試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.1.3 主要儀器

1260高效液相色譜分析儀，酶標(biāo)儀（配有Gen5儀器控制及數(shù)據(jù)分析軟件），離心機Centrifuge5418R；電熱恒溫水浴鍋（W-1300083）。

1.2 實驗方法

1.2.1 高效液相色譜法（HPLC）分析單糖成分

取多糖樣品5 mg，用5 mL濃度為2 mol/mL的三氟乙酸溶解，在100 ℃水解6 h，除去三氟乙酸。將水解后的單糖產(chǎn)物以75%的乙腈作為流動相利用高效液相色譜分析法進(jìn)行檢測。

1.2.2 ABTS和DPPH自由基清除實驗

參照相關(guān)文獻(xiàn)ABTS和DPPH自由基清除實驗[3]，實驗組吸光度為A1；空白對照組吸光度值為A0；陽性對照組吸光度值為A2。

清除率=[1-（A1-A2）/A0]×100%

2 結(jié)果與分析

2.1 黃絲菌多糖的單糖組分鑒定

黃絲菌樣品多糖經(jīng)過高效液相色譜法處理后出現(xiàn)兩個明顯峰，時間分別是在6.923 min以及8.086 min，其峰值時間與木糖6.833 min和甘露糖7.975min對應(yīng)單糖峰時間吻合，可知黃絲菌多糖的為木糖和甘露糖構(gòu)成。兩單糖對應(yīng)的峰面積分別3.5831%和25.7403%，可知其兩種單糖比例約為1∶7。

2.2 黃絲菌多糖清除ABTS自由基活性

在一定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)（0.5、1.0、2.0、2.5、3.0、4.0、5.0 mg/mL），ABTS的清除能力隨著黃絲菌多糖濃度的增加而增強。黃絲菌多糖濃度為5.0 mg/mL時，清除率達(dá)至52.37%。當(dāng)VC質(zhì)量濃度為6 mg/mL時，對ABTS的清除率可達(dá)98.02%。

2.3 黃絲菌多糖清除DPPH自由基活性

在一定的濃度范圍內(nèi)（0.1、0.3、0.6、0.9、1.5、2.1、2.4 mg/mL），對DPPH自由基的清除能力不隨著黃絲菌多糖濃度的增加而改變，清除率穩(wěn)定在23.81%～32.91%。當(dāng)黃絲菌多糖濃度為2.3 mg/mL時，DPPH自由基的清除率達(dá)32.91%，繼續(xù)增加樣品多糖濃度時，對DPPH自由基的清除能力沒有提升。與VC相比，其DPPH自由基清除能力較弱。

3 討論與結(jié)論

本實驗采用黃絲菌子實體，經(jīng)柱層析以及透析，得到黃絲菌多糖（CC-1），采用三氟乙酸全水解，結(jié)合高效液相色譜分析法（HPLC法）分析了其單糖成分[4，5]。結(jié)果表明，黃絲菌多糖由甘露糖與木糖組成，比例為7∶1。這是首次確定黃絲菌多糖（CC-1）的單糖類型和含量，為進(jìn)一步確定其精細(xì)結(jié)構(gòu)提供了很好的基礎(chǔ)。

在細(xì)胞或組織的正常生理代謝過程中可誘導(dǎo)活性氧（Reactive Oxygen Species，ROS）的產(chǎn)生，活性氧可以導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)脂、蛋白和DNA等的氧化損傷，誘發(fā)氧化應(yīng)激，從而導(dǎo)致各種腫瘤、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、糖尿病以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病等。本研究采用的ABTS+和DPPH- 檢測黃絲菌多糖（CC-1）的總抗氧化能力。實驗結(jié)果顯示，黃絲菌多糖對ABTS+自由基的清除能力與濃度呈正相關(guān)，對DPPH-自由基也有一定清除作用。黃絲菌多糖（CC-1）作為一種高分子化合物，在水溶液中呈現(xiàn)一定的膠體性質(zhì)，且多糖的羥基基團被水分子包裹，難于接近位于DPPH中3個苯環(huán)氮中心的自由基，這可能是導(dǎo)致黃絲菌多糖（CC-1）DPPH自由基的清除率低于對ABTS+自由基清除率。

綜上，黃絲菌多糖（CC-1）可以作為一種天然來源的抗氧化劑資源。但是關(guān)于黃絲菌多糖（CC-1）的精細(xì)結(jié)構(gòu)及抗氧化相關(guān)分子機制還有待于進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)

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（責(zé)任編輯：趙中正）