降粘膠囊對(duì)大鼠腸系膜微循環(huán)障礙的改善作用分析

趙 勇 錢海兵 楊玉琴 張前飛 龔新全 趙成元 茍正雷

1.遵義市紅花崗區(qū)人民醫(yī)院 貴州遵義 563000；2.貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)中心 貴州貴陽(yáng) 550002

降粘膠囊對(duì)大鼠腸系膜微循環(huán)障礙的改善作用分析

趙 勇1錢海兵1楊玉琴1張前飛1龔新全2趙成元2茍正雷2

1.遵義市紅花崗區(qū)人民醫(yī)院 貴州遵義 563000；2.貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)中心 貴州貴陽(yáng) 550002

目的研究降粘膠囊（JNJN）對(duì)大鼠腸系膜微循環(huán)的影響。方法以大鼠腸系膜微血管血液流態(tài)、血流速度、血管口徑為指標(biāo),觀察不同劑量(0.93、0.47、0.23g/kg)JNJN對(duì)正常大鼠腸系膜及滴注腎上腺素前后腸系膜微血管上述指標(biāo)的影響。結(jié)果JNJN可明顯改善腎上腺素致大鼠微循環(huán)障礙的腸系膜微血液流態(tài)、血流速度、血管口徑,具有劑量依賴性,中、高劑量的JNJN與陽(yáng)性對(duì)照藥物尼莫地平作用相近。結(jié)論JNJN具有改善微循環(huán)的作用。

降粘膠囊；腸系膜；微循環(huán)；大鼠

微循環(huán)與人的健康、疾病的發(fā)生發(fā)展有著密切的關(guān)系，多年來(lái)的研究已經(jīng)表明，微循環(huán)檢測(cè)對(duì)了解身體的健康狀態(tài)，對(duì)疾病的預(yù)防、診斷、治療有較好的指導(dǎo)作用[1]。降粘膠囊的配方由遵義市紅花崗區(qū)人民醫(yī)院提供，它由丹參、黃芪、葛根、三七、水蛭等多味中藥組成，具有補(bǔ)氣，活血化瘀、降粘降脂、祛風(fēng)通絡(luò)、平肝熄風(fēng)之功效，臨床用于心腦血管疾病的預(yù)防及治療[2]。本研究利用局部滴加腎上腺素造成大鼠腸系膜微循環(huán)障礙模型,觀察腎上腺素滴注前后JNJN對(duì)大鼠腸系膜微循環(huán)改變的影響分析，為降粘膠囊的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為微循環(huán)的研究提供更全面的分析方法。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 儀器與材料

BI-2000 型微循環(huán)觀測(cè)系統(tǒng)（成都泰盟科技有限公司）；E200型顯微鏡（日本尼康公司）；手術(shù)器械、注射器、各種玻璃儀器等。

1.2 試劑與藥品

降粘膠囊（貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)中學(xué)自制，批號(hào)：20130821，規(guī)格：0.37g/粒）；尼莫地平（山東魯抗醫(yī)藥集團(tuán)賽特有限責(zé)任公司，批號(hào)：130801，規(guī)格：20mg/片）；鹽酸腎上腺素注射液（上海禾豐制藥有限公司，批號(hào)20131006，規(guī)格1mg/mL)。

1.3 動(dòng)物

SD大白鼠，雌雄各半，180～200g，（第三軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：SC.XU(渝2014-0008)，基礎(chǔ)飼料：購(gòu)于騰鑫生物技術(shù)有限公司。

2 統(tǒng)計(jì)方法

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理以SPSS Statistics V19.0統(tǒng)計(jì)軟件包作為統(tǒng)計(jì)工具，各項(xiàng)指標(biāo)結(jié)果采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示。組間數(shù)據(jù)比較：若符合正態(tài)分布，采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)資料單因素方差分析兩兩樣本比較，其中方差齊性者采用 LSD 法檢驗(yàn)，方差不齊者采用Dunnett's 法檢驗(yàn)。

3 方法與結(jié)果

3.1 實(shí)驗(yàn)方法

大鼠60只，雌雄各半，隨機(jī)分為5組，即空白組（等體積生理鹽水）、尼莫地平組（20mg/kg）、降粘膠囊高劑量組（0.93g/kg）、降粘膠囊中劑量（0.47g/kg）、降粘膠囊低劑量（0.23g/kg）。按給藥劑量，分別配制藥液1mL/100g體重，根據(jù)每日體重作出相應(yīng)調(diào)整。連續(xù)給藥14天，實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水12h，于末次給藥1h后，腹腔注射10%水合氯醛0.3mL/100g麻醉后，固定四肢，仰臥位，腹部去毛，開腹，輕輕拉出一段腸袢，暴露腸系膜，選取一段腸系膜平鋪于充滿Kreb-Hense-Leit 緩沖液的恒溫儀上(37℃) ，放大5×10倍，利用圖象分析系統(tǒng)觀察記錄正常腸系膜循環(huán)情況，作為組內(nèi)對(duì)比，然后于選定區(qū)域滴加濃度為50ug/mL的鹽酸腎上腺素溶液0.5mL，觀察滴加NA后1、5、10、20min各組大鼠腸系膜微血管管徑、血液流速及血液流態(tài)分級(jí)[3]。

3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.2.1 一般體征觀察

生理鹽水組、尼莫地平組及降粘膠囊各劑量組大鼠，在給藥及復(fù)制模型期間基本活動(dòng)正常，皮毛、眼、耳、口、鼻分泌物及糞便性狀未見(jiàn)異常變化，其中死亡3只，經(jīng)解剖氣管部分有不同程度的損傷，其他組織均正常，原因可能是由于灌胃不當(dāng)對(duì)動(dòng)物造成的死亡，體重與空白組比較差異不明顯。

3.2.2 降粘膠囊對(duì)大鼠腸系膜微循環(huán)血液流態(tài)的影響

將血液流態(tài)分為0級(jí)（線流型）、I級(jí)（線粒流）、II級(jí)（粒線流）、IV級(jí)（粒流）[4]。通過(guò)對(duì)血液流態(tài)的記錄統(tǒng)計(jì)分析，R為統(tǒng)計(jì)結(jié)果，見(jiàn)表1，結(jié)果表明：各組大鼠滴加NA前血液流態(tài)與滴加NA1min后血液流態(tài)比較，差異顯著(P＜0.05或P＜0.01)，表明注射鹽酸異丙腎上腺素復(fù)制微循環(huán)障礙成功。5min后各組血液流態(tài)與滴加NA前比較差異顯著，表明血液流態(tài)均為恢復(fù)到NA前水平，但各給藥組與生理鹽水組比較差異顯著，表明給藥組能不同程度的改善大鼠微循環(huán)的作用。10min后，各組均基本恢復(fù)到滴加NA前的水平，各組差異不顯著。

表1 降粘膠囊對(duì)大鼠腸系膜血液流態(tài)的影響

3.2.3 降粘膠囊對(duì)大鼠腸系膜微循環(huán)血管管徑的的影響

滴加NA1min后，各組大鼠腸系膜微血管管徑顯著收縮，與滴加前比較差異明顯，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明微循環(huán)障礙模型復(fù)制成功。高、中劑量組和尼莫地平組血管收縮程度較小，與生理鹽水組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；滴加 NA10min后，高、中劑量組和尼莫地平組血管口徑已基本恢復(fù)；滴加NA 20min后各組已基本完全恢復(fù)，差異不顯著，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 降粘膠囊對(duì)大鼠微循環(huán)血管管徑的影響

圖1 滴加AD前

圖2 滴加AD后

圖2 恢復(fù)期

3.2.4 降粘膠囊對(duì)大鼠腸系膜血液流速的影響

滴加AD1min后，各組大鼠腸系膜微血管管徑顯著收縮，與滴加前比較差異明顯，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；高、中劑量組和尼莫地平組血管收血流速度減慢程度較小，與生理鹽水組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01)；滴加 AD5min、10min時(shí)，高、中劑量組尼莫地平組血管口徑已基本完全恢復(fù)，但明顯低于滴加AD前，與生理鹽水組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，與AD前比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；滴加20min后，除空白組外基本恢復(fù)滴加AD前的水平，結(jié)果表明：降粘膠囊各劑量組均能的對(duì)鹽水異丙腎上腺素所致微循環(huán)障礙血流有不同程度恢復(fù)作用。

表3 降粘膠囊對(duì)大鼠微循環(huán)血管流速的影響

4 討論

微循環(huán)障礙是血液理化性質(zhì)的改變，使管腔狹窄，血液流速或減慢或血栓形成，使局部組織缺血缺氧甚至壞死，引起一系列臨床癥狀。微循環(huán)暢通百病不生，微循環(huán)障礙是百病之源，健全的微循環(huán)功能是保證體內(nèi)重要臟器執(zhí)行正常功能的首要前提。醫(yī)學(xué)研究證明[5-6]：人體的衰老，腫瘤的發(fā)生，高血壓、糖尿病及許多心腦血管等疾病、主要是微循環(huán)障礙所致，因此微循環(huán)正常與否，是人體是否健康的重要標(biāo)志。

在本研究中，通過(guò)滴加腎上腺素造成局部微循環(huán)障礙模型，其表現(xiàn)為血管收縮、血流緩慢或淤滯等。實(shí)驗(yàn)中采用活體腸系膜微循環(huán)觀察法，研究降粘膠囊對(duì)微循環(huán)障礙模型微血管血液流態(tài)、血流速度、血管管徑的影響分析。結(jié)果表明，降粘膠囊高、中、低劑量組對(duì)微血管管徑均有不同程度的擴(kuò)張作用，對(duì)微血管流速和流態(tài)有不同程度的緩解作用，呈一定的量效關(guān)系。此結(jié)果不僅驗(yàn)證了降粘膠囊復(fù)方制劑的活血化瘀作用，且通過(guò)對(duì)降粘膠囊的研究實(shí)驗(yàn)，直觀分析了微循環(huán)障礙的形成機(jī)理及預(yù)防、治療方法，為進(jìn)一步對(duì)降粘膠囊的研究提供了可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

[1]劉育英.微循環(huán)究技術(shù)的進(jìn)展[J].微循環(huán)學(xué)雜志，2014，24(2) ：1-4

[2]劉金環(huán)，楊玉琴，張強(qiáng)，等.降黏膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中醫(yī)學(xué)報(bào)，2013,28(10)：1525.

[3]張孝龍，李偉，彭欣，等.基于顯微圖像的血虛證大鼠腸系膜微循環(huán)變化研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18（5）：156-158

[4]李偉，彭欣，郎慶龍，等.血虛大鼠腸系膜微循環(huán)改變與四物湯干預(yù)作用研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2010，21（3）：625-627

Jiangnian Capsule on Rat Mesentery Microcirculation Improvement Analysis

ZHAO Yong,QIAN Hai-bing,YANG Yu-qin,ZHANG Qian-fei,GONG Xin-quan,ZHAO Cheng-yuan, ,GOU Zheng-lei (1.Honghuagang District People`s Hospital of Zunyi City of Guizhou Province 563000) (2 .Guiyang College of Traditional Chinese Medicine,Guiyang 550002)

objective：：To study the viscosity capsule (JNJN) the influence of the mesenteric microcirculation of rat. Methods： the rat mesentery microvascular blood flow, blood flow, blood vessel diameter as an index, observe different doses (0.93, 0.47, 0.23 g/kg) JNJN on normal rats mesenteric and drip the adrenaline of mesentery microvascular before and after the above index. Results： JNJN can obviously improve the adrenaline to mesenteric microcirculation of rats micro blood flow, blood flow, blood vessel diameter, has a dose dependent, medium and high dose of JNJN similar to the role of positive control drug nim horizon. Conclusion： JNJN have the effect that improve microcirculation.

reducing viscosity capsule; mesenteric; microcirculation; rat

R285.5

A

1672-5018（2016）07-308-02

貴州省中藥現(xiàn)代化科技產(chǎn)業(yè)研究開發(fā)專項(xiàng)(ZY[2012]3008號(hào)

趙勇（1968-），男（漢族）從事神經(jīng)內(nèi)科；

錢海兵（1977-），男（漢族），博士，碩士生導(dǎo)師，從事藥理學(xué)研究；