人工結香沉香質量評價體系的研究

劉肖林　蔡艷芳　何兆錦（廣東省佛山市第一人民醫院藥學部中藥房　佛山　528000）

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人工結香沉香質量評價體系的研究

劉肖林蔡艷芳何兆錦（廣東省佛山市第一人民醫院藥學部中藥房佛山528000）

摘要：目的：探討建立人工結香沉香的質量評價體系及結香作用機制的初探。方法：采用“小孔滴注法”真菌誘導結香的方式，選取不同產地白木香樹，按照2010年《中國藥典》中對沉香藥材性狀描述、顯微鑒別、薄層鑒別、醇溶性浸出物含量方法，建立切實可行的沉香質量評價標準。結果：芐基丙酮是沉香樣品中的化學成分，不同批次人工結香沉香藥材性狀、顯微特征、薄層色譜與對照藥材相同，醇溶性浸出物含量在12.07%～25.00%之間。結論：不同批次的人工結香沉香藥材質量符合藥典的規定，芐基丙酮成為結香的標志進行含量測定評價沉香藥材質量具有科學價值。

關鍵詞：沉香人工結香質量評價芐基丙酮薄層色譜

沉香為瑞香科（Thymelaeaceae）沉香屬（Aquilaria spp.）的部分種以及擬沉香屬（Gyrinops spp.）的部分種，沉香可以通過自然、微生物或者人工方式發生生物化學過程，從而形成具有香味的木材[1]。沉香的形成過程稱之為結香[2]。近幾年來，人們對沉香過度采伐，造成了白木香植物資源的匱乏，白木香植物已經列為國家二級保護野生植物[3]。因此，人們多采用人工結香的方式如砍傷法、鑿洞法、鉆孔灼燒法、接菌法等促進結香，滿足市場中對于藥材的用藥需求[4]。本文中采用了“小孔滴注法”真菌誘導結香的方式，建立人工結香沉香的質量評價體系及結香的作用機制初探。

1　儀器及試藥

1.1儀器：顯微鏡（尼康株式會社，型號：ECLIP80），顯微成像系統（尼康株式會社），紫外分析儀器（北京電泳設備股份有限公司，型號：JY025），電子分析天平（美國梅特勒，型號：MTL02），恒溫水浴鍋（北京化工科技有限公司，型號：HH-6）。

1.2試劑：沉香對照品（中國食品藥品檢定所，批號：20141223），薄層層析板（北京科技生物公司，批號：HX041725，10cm× 20cm），香草醛溶液（北京化工科技公司，生產批號：20131225），鹽酸溶液、乙醚溶液、三氯甲烷溶液，乙醇溶液（北京化工科技公司）均為分析純，水為三蒸水，95%乙醇溶液由乙醇溶液+三蒸水配制而成。分別取經“小孔滴注法”真菌誘導法結香的白木香樹，經專業人士鑒定為白木香，按照2010版《中國藥典》[5]的要求將沉香藥材剖取出，批次根據沉香結香的時間編號（20120212、20121202、20130526、20131112、20131212），樣品信息見表1。

表1　5批沉香藥材基本資料表

2　質量評價方法與結果

2.1顯微鑒別：根據《中國藥典》2010年版第一部中關于沉香藥材的顯微鑒別要求，對上述5批沉香藥材顯微特征通過顯微鏡進行鏡下觀察。各批次藥材觀察到射線、導管以及木間韌皮部等顯微結構[6]。其中導管圓多角形，有的含有棕色的樹脂。韌皮部均扁長橢圓狀或者是條帶狀，射線部分與之相交，細胞壁較薄，有棕色樹脂。

2.2醇溶性浸出物含量測定：按照《中國藥典》2010年第一部的測定方法，將樣品進行粉碎，電子分析天平精密稱取粉末4.0g，置于200mL錐形瓶中，加入95%乙醇溶液100mL后膠塞將錐形瓶口密封后稱重，靜置2h后將回流冷凝管連接，水浴鍋中加熱至沸騰狀態后保持沸騰1h。以室溫將錐形瓶取出，密塞后再進行重量的稱定，繼續采用95%乙醇溶液將損失后的重量進行補齊，搖勻后進行過濾，采用移液管精密吸取濾液50mL放置于干燥的蒸發皿中，水浴鍋上蒸干，置于100℃的恒溫保溫箱中恒溫干燥4h，取出后置于干燥器中冷卻1h，進行精密稱定。以干燥品計算供試品中乙醇浸出物中樣品的含量。

2.3顯色鑒別：取“2.2”項下的各個不同批次樣品的醇溶性浸出物適量置于蒸發皿中，蒸發皿上蓋一塊玻璃片后放置于三腳架上，采用酒精燈進行加熱，待蓋玻片上出現油狀物質后停止加熱，后加1滴鹽酸溶液及香草醛少量，后滴加2滴乙醇溶液，觀察記錄樣品溶液染色的變化情況。見表2。

表2　沉香醇溶性浸出物的成分含量和顯色反應

2.4薄層色譜鑒別：各個批次的沉香樣品經粉碎機粉碎后過26目篩，按照“2.1”項下的配制方式進行提取配制，取各個批次的浸出液20mL，置于蒸發皿中水浴上加熱蒸干后，用95%乙醇溶液將殘渣進行溶解后，采用移液管吸取2mL浸出物溶液移入5mL容量瓶中，乙醇溶液定容至刻度后搖勻，放置于-20℃冰箱中作為供試品溶液備用。另一方面取沉香對照藥材1.0g，按照同樣的配制方式制成對照品溶液。按照薄層色譜法實驗方法，吸取供試品溶液及對照品溶液各15μL，分別點于同一硅膠薄層色譜板上，以三氯甲烷：乙醚=9∶1作為展開劑進行薄層色譜分析，取出后將薄層板晾曬至干燥，置于紫外分析儀器中，于366nm處進行觀察，各個批次的樣品在與對照品藥材色譜相對的位置上均顯示相同顏色的熒光斑點。

3　小結

沉香藥材雖然與其他常用藥材比較相對名貴，文獻中對于沉香藥材質量的評價方面研究報道相對滯后，具有分散性缺乏系統的描述。隨著社會經濟的發展及人們生活水平的不斷提高，臨床上對于沉香的認識及藥用價值越來越受到重視，藥材的需求量逐年提高。人工結香沉香的技術主要通過真菌侵入性誘導有分泌出來，經過幾年的沉淀形成沉香，沉淀的時間越長沉香的品質越好，其經濟價值也越高，因此，采用先進的分析技術建立完善的沉香質量評價體系和標準至關重要。研究中在分析沉香樣品中發現芐基丙酮是沉香的化學成分，在健康的白木香組織中未發現芐基丙酮，因此選擇芐基丙酮并進行含量的測定是評價人工結香沉香藥材質量的評價標準[7]。

另一方面結香機制假說的發展為人工結香技術的發展提供了理論指導，目前對于沉香的結香作用機制通過文獻參考可以包括以下幾個方面：①病理學假說認為沉香的形成與感病狀況有一定的關聯性[8]，沉香經真菌感染白木香樹而得到，上個世紀三十年代國外開展大量接菌結香的研究，認為沉香的形成主要因樹干損傷后由真菌侵入寄生，作用于木薄壁細胞貯存的淀粉出現一系列變化經過常年的沉積得到；②“創傷性”假說表明沉香的形成主要是被開放性的傷口所引起，并不是因特殊的真菌所產生[9]，由一些生理性的阻礙作用，如創傷、昆蟲等聯合形成而沉積成沉香；③“非病理”假說認為物理、化學性的傷害是沉香形成的主要因素，對植物的木質部的傷害可以產生沉香類的物質，對于活細胞的傷害強度越大沉香形成的面積也越大[10]，但是這種原因仍然需要進一步研究調查證實；④防御反應誘導結香假說認為傷害或者真菌侵染均作為激發子誘導白木香產生防御的反應，從而產生了具有抑菌活性的防御性物質，抵御外界物理的、化學的傷害對白木香的深入性損傷[11]。但這些機制還需要在研究中提供更加充分的實驗數據對假說進行數據支持，從而為沉香結香的機制提供科學的參考數據。

參考文獻

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The preliminary study of artificial knot fragrant incense quality evaluation and edgeworthia mechanism

Abstract：Objective：To establish the system establishment of preliminary study of artificial knot fragrant incense quality evaluation and edgeworthia mechanism. Methods：Hole instillationfungus-induced ddgeworthia way was taken. Aquilaria trees of different places were chosen. Based on the 2010“Chinese Pharmacopoeia”the description of the medicinal properties of incense，microscopic identification，TLC，alcohol extract content method，practical incense quality evaluation criteria were created. Results：Benzyl acetone was the sample of the chemical composition of incense. Different batches of fragrant incense knot artificial medicinal properties，microscopic characteristics，TLC were the same with reference drug. The content of alcohol -soluble extract was between 12.07%～25.00% . Conclusion：The different batches of fragrant incenseknot artificial quality ingredients confirm the formulation of pharmacopoeia. Benzyl acetone knot become the symbol of edgeworthia，and it has scientific value for the determination of quality evaluation of medicinal incense.

Key words：Incense Artificial knot incense Quality evaluation Benzyl acetone TLC

中圖分類號：R284.1

文獻標識碼：B

文章編號：1672-8351（2016）04-0132-02