胎盤生長因子抗體對大鼠子宮內膜異位癥模型的治療作用

曾昭智，張錦紅，陸少君

(廣東藥科大學 實驗動物中心，廣東 廣州 510006)

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胎盤生長因子抗體對大鼠子宮內膜異位癥模型的治療作用

曾昭智，張錦紅，陸少君

(廣東藥科大學 實驗動物中心，廣東 廣州 510006)

摘要:目的 探討胎盤生長因子抗體(anti-PLGF)對大鼠子宮內膜異位癥模型的治療作用。方法 自體移植法建立大鼠子宮內膜異位癥模型，分別觀察anti-PLGF對大鼠子宮內膜異位癥模型異位子宮內膜形態結構、腹腔液血管內皮生長因子和白細胞介素-8的影響。結果 anti-PLGF 1 mg/kg劑量組能明顯抑制模型大鼠腹腔液中血管內皮生長因子水平，并能顯著減小大鼠子宮內膜異位組織的體積，與模型組比較差異有統計學意義(P<0.05)，而腹腔液中白細胞介素-8水平無明顯變化。結論 anti-PLGF通過抑制異位內膜的血管形成，從而有效抑制異位內膜的生長。

關鍵詞:胎盤生長因子抗體； 子宮內膜異位癥； 血管內皮生長因子； 白細胞介素-8

子宮內膜異位癥(endometriosis，EMs)是育齡婦女的常見疾病。臨床主要表現有痛經、盆腔包塊或觸痛的結節、不孕、月經不調等，具有侵襲性、廣泛種植、易復發的特性，有類似于惡性腫瘤的遠處轉移和種植生長的能力，其發病機制尚未完全闡明。有研究發現子宮內膜異位癥患者腹腔液及子宮內膜等局部組織中胎盤生長因子(placental growth factor，PLGF)水平明顯升高[1-3]，PLGF是血管內皮生長因子(vascular epithelial growth factor，VEGF)家族成員，PLGF與受體結合后發揮生物學作用，可增加VEGF活性及誘導血管生成。白細胞介素-8(IL-8)細胞因子同樣具有強生血管活性，能促進新生血管的形成，使異位內膜基底部毛細血管的數量和面積均顯著增多[4]。2007年Fischer等[5]的研究證明，胎盤生長因子抗體(anti-PLGF)可以抑制腫瘤組織的血管生成，而對正常的血管沒有影響。本實驗從抑制血管生成的角度探討anti-PLGF對大鼠子宮內膜異位癥模型的治療作用及其機制。

1材料

1.1藥物與試劑

anti-PLGF(上海瑞齊生物技術有限公司)；白細胞介素和血管內皮生長因子ELISA檢測試劑盒(上海哈靈生物科技有限公司)；沙利度胺(上海阿拉丁生化科技股份有限公司)；磷酸鹽緩沖液(武漢博士德生物工程有限公司)。

1.2主要儀器

FA2004B電子天平(上海精科天美)；BA310顯微鏡(麥克奧迪實業集團有限公司)；3K15冷凍離心機(德國SIGMA)；Infinite 200 pro酶標儀(瑞士Tecan)。

1.3實驗動物

SPF級SD大鼠，雌性，體質量180～220 g，南方醫科大學實驗動物中心提供，生產許可證號SCXK(粵)2011-0015。

2方法

2.1大鼠子宮內膜異位癥模型建立

參照文獻[6]，取雌性SD大鼠，體質量180～220 g，各鼠以40 mg/kg戊巴比妥腹腔注射麻醉，在大鼠下腹部正中靠左上方做一個1.5 cm切口，挑出左側子宮角，結扎子宮系膜血管，再結扎需切除的子宮段的兩端，切取一段1.5 cm長的子宮。在無菌的戴克隆氏液中分離子宮內膜，然后切取5 mm×5 mm的內膜組織片段，將上皮層對著腹壁，縫合于腹壁上。建模后3周，擇動情期大鼠，開腹見移植子宮內膜體積增大，形成內有液體積聚并有血管形成的透明小囊泡，以體積≥20 mm3，內膜囊泡可見透明積液為造模成功標準。

2.2分組及給藥

取建模成功40只大鼠，按異位內膜體積大小隨機分為4組，即模型組、沙利度胺陽性藥物組、anti-PLGF高、低劑量組，另取同批正常10只大鼠作為正常對照，各組每天腹腔注射1次，陽性藥物組注射沙利度胺50 mg/kg，anti-PLGF高、低劑量組分別注射anti-PLGF 1 mg/kg、0.5 mg/kg，正常組和模型組注射等體積的生理鹽水，連續2周。

2.3觀察指標

2.3.1大鼠異位內膜體積測量除正常對照組外，其余各組動物用游標卡尺測量異位子宮內膜病灶的長、寬和高，并計算體積(V)，V=長mm×寬mm×高mm。

2.3.2腹腔液中VEGF和IL-8細胞因子的含量測定末次注射24 h后，乙醚麻醉大鼠，腹腔注射磷酸鹽緩沖液(PBS)5 mL，輕揉腹部，打開腹腔，沿腹壁吸取約5 mL 腹腔液，4 ℃，2 000 r/min離心15 min，取上清液-80 ℃保存備用，腹腔液中VEGF和IL-8細胞因子含量的測定按照ELISA試劑盒說明書操作。

2.4統計學處理

3結果

3.1anti-PLGF對大鼠子宮內膜移植物體積和大致形態的影響

肉眼觀察除正常對照組外，各組大鼠均在右側腹壁見有異位病灶。模型組大鼠異位內膜生長良好，體積明顯增大，呈隆起透亮的小囊狀，內部充滿積液，表面血管清晰可見，而給藥組體積明顯較模型組縮小，周圍血管形成沒有模型組豐富。從表1可以看出，與模型組比較，沙利度胺組、anti-PLGF高劑量組動物的內膜移植物體積明顯變小，差異有統計學意義(P<0.05)，提示anti-PLGF有抑制子宮內膜異位癥大鼠移植物體積的作用。

表1anti-PLGF對大鼠子宮內膜移植物體積的影響

組別劑量/(mg·kg-1)給藥前體積/mm3給藥后體積/mm3模型組-88.47±11.4389.86±10.87沙利度胺組5089.51±10.8841.59±3.63*anti-PLGF 高劑量組192.83±9.6652.47±6.52* 低劑量組0.591.12±11.2884.19±7.85

與模型組比較：*P<0.05。

3.2anti-PLGF對子宮內膜異位癥大鼠腹腔液中VEGF和IL-8細胞因子含量的影響

模型組大鼠腹腔液中VEGF和IL-8細胞因子水平明顯高于正常對照組，而anti-PLGF和沙利度胺治療14 d 后，腹腔液中VEGF水平明顯下降，差異有統計學意義，anti-PLGF對IL-8細胞因子水平無明顯影響，結果見表2。

表2anti-PLGF對子宮內膜異位癥大鼠腹腔液中VEGF和IL-8細胞因子含量的影響

組別劑量/(mg·kg-1)w(VEGF)/(ng·kg-1)ρ(IL-8)/(ng·L-1)正常對照組-3.27±0.76*14.22±2.46*模型組18.58±3.2144.00±8.85沙利度胺組507.15±1.24*20.23±5.87*anti-PLGF 高劑量組114.15±1.10*40.39±6.53 低劑量組0.517.25±2.3040.68±7.00

與模型組比較：*P<0.05。

4討論

在子宮內膜異位癥的發生發展過程中，新生血管可以為異位病灶提供充足的氧氣和營養物質，因此血管生成是異位病灶種植和增殖的必要條件[7]，相關研究已證實，子宮內膜異位癥異位病灶及腹腔液中存在多種血管生長因子且水平較正常明顯升高，其中包括VEGF和IL-8細胞因子，其均能促進血管生成。PLGF是VEGF家族成員之一，PLGF與受體結合后可增加VEGF的活性，促進血管生成，PLGF在子宮內膜異位癥發病過程中有一定作用，anti-PLGF或其受體抗體制劑等抑制血管生成的藥物治療可能會為子宮內膜異位癥的治療開辟一條新的途徑[8]。本實驗用anti-PLGF作為藥物觀察其對子宮內膜異位癥大鼠的治療作用，結果顯示：anti-PLGF和沙利度胺能有效縮小大鼠內膜移植物體積，減少異位病灶周圍血管形成，模型組中大鼠腹腔液中VEGF和IL-8細胞因子水平明顯高于正常對照組，anti-PLGF和沙利度胺治療后能降低子宮內膜異位癥大鼠腹腔液中VEGF水平，使異位內膜的增殖速度降低，從而減少血管生成，降低血供，抑制異位內膜組織的生長。但anti-PLGF對腹腔液中IL-8細胞因子水平無明顯影響。因此，anti-PLGF通過調節VEGF生成，抑制異位內膜組織的生長發育，達到治療子宮內膜異位癥的作用，但其對子宮內膜異位癥大鼠組織及血液中VEGF和IL-8細胞因子水平的影響還不清楚，尚需進一步探討。

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(責任編輯：幸建華)

Effect of anti-placenta growth factor antibody on endometriosis in rats

ZENG Zhaozhi,ZHANG Jinhong,LU Shaojun

(DepartmentofLaboratoryAnimalCenter,GuangdongPharmaceuticalUniversity,Guangzhou510006,China)

Abstract:Objective To explore the effect of anti-placenta growth factor (PLGF) antibody on endometriosis in rats. Methods The endometriosis model was established by autologous transplantation of endometrial tissue in rats. The effect of anti-PLGF antibody on the production of peritoneal VEGF and IL-8 and endometrium morphosis in endometriosis rats were detected. Results Compared with the model group,treatment with anti-PLGF antibody (1 mg/kg) reduced the level of VEGF and the volume of endometriosis tissue in rats (P<0.05). But the level of IL-8 did not show a significant difference in both groups. Conclusion Treatment with anti-PLGF antibody can inhibit the vasifaction and growth of ectopic endometrium in rats.

Key words:anti-placenta growth factor (PLGF) antibody; endometriosis; VEGF; IL-8

DOI:10.16809/j.cnki.1006-8783.2016030201

中圖分類號:R965

文獻標志碼:A

文章編號:1006-8783(2016)02-0228-03

作者簡介：曾昭智(1980—)，男，碩士，高級實驗師，主要從事實驗動物學研究，Email: 2000zzz@163.com。

基金項目：廣東省醫學科研基金(B2013191)

收稿日期：2016-03-02

網絡出版時間：2016-03-28 15:52網絡出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/44.1413.R.20160328.1552.001.html