貴州地區(qū)重型β-地中海貧血基因突變類型分析*

劉興梅， 蘇　莉， 李貴芳， 吳　嫻， 王茹蕾， 黃盛文

(貴州省人民醫(yī)院 檢驗科， 貴州 貴陽　550002)

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貴州地區(qū)重型β-地中海貧血基因突變類型分析*

劉興梅， 蘇莉， 李貴芳， 吳嫻， 王茹蕾， 黃盛文**

(貴州省人民醫(yī)院 檢驗科， 貴州 貴陽550002)

[摘要]目的： 了解貴州地區(qū)重型β-地中海貧血基因突變類型及分布情況。方法： 1 980例疑診的β-地中海貧血貴州籍患者，采用反向斑點雜交技術(shù)對中國人群中8種常見和9種少見β-地中海貧血基因突變類型進(jìn)行檢測，對檢出的突變基因型及其分布頻率進(jìn)行分析。結(jié)果： 共檢出128例重型β-地中海貧血，其中純合子62例，雙重雜合子66例；共檢出14種突變基因型，按分布頻率大小前4種依次為CD17/CD17(28.13%)、CD41-42/CD17(23.44%)、CD41-42/CD41-42(17.19%)、IVS-Ⅱ-654/CD17(7.81%)；共檢出等位基因突變類型8種，前4種依次為CD17 (46.09%)、CD41-42(35.16%)、IVS-Ⅱ-654(10.55%)和-28(5.08%)。結(jié)論： 貴州地區(qū)重型β-地中海貧血基因突變類型以CD17、CD41-42、IVS-Ⅱ-654最常見。

[關(guān)鍵詞]β-地中海貧血； 基因； 突變； 反向點雜交； 貴州

地中海貧血是由于常染色體遺傳性缺陷引起的珠蛋白肽鏈合成障礙性疾病，可使一種或幾種珠蛋白肽鏈合成不足或完全缺乏，引起嚴(yán)重的溶血性貧血。β-地中海貧血臨床上分為輕、中、重3種類型。重型β-地中海貧血嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量甚至生命，給家庭和社會帶來沉重的經(jīng)濟和精神負(fù)擔(dān)。廣東、海南等省重型β-地中海貧血分子流行病學(xué)特征已有較多報道[1-3]。近年來也有貴州部分地區(qū)的重型β-地中海貧血分子流行病學(xué)研究的報道[4]。但尚無較大樣本的重型β-地中海貧血基因突變類型分析。本研究對128例貴州籍重型β-地中海貧血患者基因型、頻率進(jìn)行調(diào)查，為貴州地區(qū)重型β-地中海貧血防治工作的開展及遺傳咨詢提供依據(jù)。

1對象與方法

1.1對象

2009年10月～2015年3月疑診地中海貧血貴州籍患者1 980例，0～22歲，男83例，女45例。納入標(biāo)準(zhǔn)：血常規(guī)檢測提示小細(xì)胞低色素貧血、平均紅細(xì)胞體積(MCV)<80 fl及平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量(MCH)<27 pg，同時血紅蛋白電泳HbA2>3.5%或HbF>30%。

1.2儀器與試劑

E-Cycler TM 96 PCR擴增儀，DNA提取試劑和β-地貧基因分型檢測試劑盒由深圳益生堂生物企業(yè)有限公司提供。

1.3方法

抽取受檢者EDTA-K2抗凝血2 mL，采用反向點雜交(reverse dot-blot, RDB) 技術(shù)檢測中國人群中8種常見和9種少見的β-地中海貧血基因突變類型，包括CD41-42(-CTTT)，IVS-Ⅱ-654(C→T)，CD 17(A→T)，-28(A→G)，CD71-72(+A)，βE(CD26 G→A)等，見表1。操作步驟按說明書進(jìn)行。

表1　中國人群17種β-地貧基因突變類型

2結(jié)果

2.1重型β-地中海貧血

疑診1 980例患者中，檢出重型β-地中海貧血患者128例，檢測率為12.93%，其中純合子62例(48.44%)，雙重雜合子66例(51.56%)。

2.2基因突變類型

128例重型β-地中海貧血患者，共檢出14種β-地中海貧血基因突變類型，前4種基因突變類型依次為CD17/CD17 、CD41-42/CD17、CD41-42/CD41-42 及IVS-Ⅱ-654/CD17，總構(gòu)成比76.57%，后10種基因突變類型較少見，總構(gòu)成比23.43%，見表2。檢出8種β-地中海貧血等位基因突變類型，前4種突變類型依次為CD17、CD41-42、IVS-Ⅱ-654和-28，總構(gòu)成比96.88%，后4種突變類型較少見，構(gòu)成比3.12%，見表3。

表2　128例重型β-地中海貧血基因突變類型分布

表3　128例重型β-地中海貧血等位

3討論

地中海貧血是最常見的遺傳病之一，全球約有1.5 %的人口是地中海貧血基因攜帶者，每年約有60萬重型地中海貧血患兒出生[5]。不同類型的基因缺陷導(dǎo)致患者不同的臨床表現(xiàn)，并影響其治療效果及預(yù)后[6-7]。重型β-地中海貧血是一類致死致殘性血液病，基因型為β0或β+的純合子或雙重雜合子狀態(tài)，使β鏈完全或幾乎完全不能合成，患者出現(xiàn)慢性進(jìn)行性溶血性貧血[8]。由于β珠蛋白肽鏈合成的減少或缺乏，導(dǎo)致紅細(xì)胞內(nèi)HbA、HbA2和HbF比例失調(diào)。重型β-地中海貧血患者自出生后3～6個月起出現(xiàn)貧血、肝脾腫大及顴骨隆起、眼距增寬、鼻梁低平等特殊“地中海貧血”面容，X線檢查可見外板骨小梁條紋清晰呈直立的毛發(fā)樣，發(fā)育滯后。

貴州是β-地中海貧血的高發(fā)地區(qū)，有調(diào)查顯示，貴州6個縣(市)少數(shù)民族β-地中海貧血發(fā)病率為5.4%[9]，而發(fā)生率最高的民族是貴州從江縣的侗族，高達(dá)7.85%[10]。本研究發(fā)現(xiàn)，目前貴州地區(qū)重型β-地中海貧血基因突變類型有14種，以CD17/CD17、CD41-42/CD17、CD41-42/CD41-42、IVS-Ⅱ-654/CD17這4種基因型的構(gòu)成比最高，共占76.57%，等位基因突變頻率以CD17發(fā)生率最高，與課題組前期的研究結(jié)果一致[11]。單可人等[4]對貴陽地區(qū)15例重癥β-地中海貧血患兒基因突變研究結(jié)果顯示前3種基因突變類型是依次為CD41-42、、IVS-Ⅱ-654、CD17，與本研究結(jié)果不完全一致，可能是病例數(shù)較少的原因。我國南方各省β-地中海貧血基因突變類型以CD41-42、IVS-Ⅱ-654、CD17和-28多見，但各突變類型所占的比例有所不同，福建、臺灣以IVS-Ⅱ-654最常見[12-13]，廣西、廣東、重慶和珠海以CD41-42 最常見[14-17]，四川[18]和貴州[19]又以CD17最常見，云南以βE(CD26)最常見[20]，可見β-地中海貧血基因突變類型存在明顯的異質(zhì)性。同一國家、不同地區(qū)、不同民族因遺傳背景的不同，地中海貧血基因突變的突變譜和頻率不完全相同。貴州地區(qū)重型β-地中海貧血突變類型以CD17、CD41-42、IVS-Ⅱ-654最常見，針對這些常見基因突變類型實施未婚青年群體篩查、加強孕期檢查以及產(chǎn)前基因診斷可以有效降低重型β-地中海貧血患兒的出生缺陷。

4參考文獻(xiàn)

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(2016-01-16收稿，2016-03-27修回)

中文編輯： 戚璐； 英文編輯： 劉華

Analysis of Gene Mutation Types of Severe β-thalassemia in Guizhou Province

LIU Xingmei， SU Li， LI Guifang， WU Xian， WANG Rulei， HUANG Shengwen

(DepartmentofClinicalLaboratory,GuizhouProvincialPeople'sHospital,Guiyang550002，Guizhou,China)

[Abstract]Objective: To investigate the types and distribution of gene mutations of severe β-thalassemia in Guizhou province. Methods: 1980 cases of patients of Guizhou suspected of beta thalassemia from November, 2009 to March, 2011 were recruited in this study. Reverse dot blot hybridization (RDB) was adopted to detect common types of β-thalassemia mutations in Chinese population and 128 cases of patients were diagnosed as severe β-thalassemia, whose mutant genotype and distribution frequency were analyzed. Results: In 128 β-thalassemia cases, there were 62 mutant homozygotes and 66 compound heterozygotes. A total of 14 β-thalassemia major genotypes mutations and 8 allelic gene mutations were detected. In term of distribution frequency, the first four high frequency of 14 mutations were CD17/CD17(28.13%), CD41-42/CD17(23.44%), CD41-42/CD41-42(17.19%), IVS-Ⅱ-654/CD17(7.81%), respectively. At the same time, the first four high frequency of 8 allelic gene mutations were CD17 (46.09%), CD41-42(35.16%), IVS-Ⅱ-654(10.55%) and -28(5.08%), respectively. Conclusion: In severe β-thalassemia of Guizhou province, the main genetic mutations are CD17, CD41-42 and IVS-Ⅱ-654.

[Key words]region; beta-thalassemia; gene; mutation; reverse dot blot； Guizhou

[中圖分類號]R556.61

[文獻(xiàn)標(biāo)識碼]A

[文章編號]1000-2707(2016)04-0407-03

*[基金項目]貴州省衛(wèi)生廳資助項目(gzwkj2013-1-148)； 貴州省貴陽市資助項目[筑科合同(20151001)社61號]

**通信作者 E-mail:hsw713@sina.com

網(wǎng)絡(luò)出版時間：2016-04-20網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20160420.1838.042.html