貴州苗藥酢漿草水提物的抗炎鎮痛作用*

崔　珺， 楊雅欣， 鄭　林， 董　莉， 何　彬， 劉　亭， 李　靖， 穆　瓊*

(1.貴州醫科大學 全科醫學教研室， 貴州 貴陽　550004； 2.貴陽中醫學院 藥學院， 貴州 貴陽　550002； 3.貴州醫科大學 民族藥與中藥開發應用教育部工程研究中心， 貴州 貴陽　550004； 4.貴州醫科大學 貴州省藥物制劑重點實驗室， 貴州 貴陽　550004)

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貴州苗藥酢漿草水提物的抗炎鎮痛作用*

崔珺1， 楊雅欣2， 鄭林3， 董莉3， 何彬3， 劉亭4， 李靖4， 穆瓊1*

(1.貴州醫科大學 全科醫學教研室， 貴州 貴陽550004； 2.貴陽中醫學院 藥學院， 貴州 貴陽550002； 3.貴州醫科大學 民族藥與中藥開發應用教育部工程研究中心， 貴州 貴陽550004； 4.貴州醫科大學 貴州省藥物制劑重點實驗室， 貴州 貴陽550004)

[摘要]目的： 研究貴州苗藥酢漿草水提取物的抗炎鎮痛作用。方法： 60只清潔級昆明系小白鼠采用冰醋酸法復制小鼠腹腔毛細血管通透性增高模型，隨機分為空白組、模型組、陽性組以及酢醬草水提物低、中、高劑量組，每組10只；另取50只小鼠采用冰醋酸法復制小鼠扭體模型，隨機分為模型組、陽性組以及酢醬草水提物低、中、高劑量組，每組10只；空白組和模型組給予同體積生理鹽水灌胃，陽性組給予0.005 mg/g阿司匹林灌胃，酢醬草水提物低、中、高劑量組分別給予0.07 mg/g、0.14 mg/g、0.21 mg/g酢醬草水提物灌胃，均連續灌胃 3 d，小鼠腹腔毛細血管通透性增高模型末次灌胃 1 h后處死，用紫外分光光度計測定小鼠腹腔清洗液的吸光度值，以判定腹腔毛細血管通透性的變化；記錄小鼠扭體模型10 min內的扭體次數，并計算扭體抑制率；采用DPPH實驗初步考察酢醬草水提取物的自由基清除能力。結果： 酢漿草水提物中、高劑量組小鼠腹腔清洗液的吸光度值低于模型組，差異有統計學意義(P<0.01或P<0.001)；小鼠扭體模型10 min內扭體次數少于模型組，差異有統計學意義(P<0.001)；1～100 mg/L濃度的酢漿草水提物能夠發揮直接清除DPPH自由基的作用。結論： 酢漿草水提物具有抗炎鎮痛作用。

[關鍵詞]小鼠； 苗藥； 酢漿草； 植物提取物； 抗炎； 鎮痛； 貴州

酢漿草為酢漿草科植物酢漿草(OxaliscorniculataL.)的新鮮或干燥全草，始載于《本草綱目》，為貴州省苗族常用藥材。酢漿草含黃酮類物質、有機酸、酯類物質等成分，具有清熱解毒、消炎止痛、利濕消腫、涼血散瘀之功效[1-3]。臨床現有的制劑主要采用水提方法制備而得，但對其相關抗炎、鎮痛藥理作用研究仍然較少[4]。本實驗探討酢漿草水提取物的抗炎鎮痛作用，為酢漿草的臨床應用提供理論依據。

1材料與方法

1.1主要藥物與試劑

選用貴州本地秋季采收的干燥酢漿草全草作為研究對象(經貴州醫科大學龍慶德副教授鑒定為酢漿草OxaliscorniculataL.真品)；酢漿草提取物由本實驗室自制；阿司匹林維生素C泡騰片購于沈陽奧吉娜藥業有限公司(批號120203)，依文思藍購于國藥集團化學試劑有限公司(批號20120608)，冰醋酸(分析純，上海申博化工有限公司，批號1003102)，乙腈(色譜純，天津市科密歐化學試劑有限公司，批號20110816)，DPPH試劑(1,1-二苯基-2-苦基肼試劑，M=394.32，BR級)購于Sigma公司。

1.2主要儀器和動物

高速萬能粉碎機(林大機械有限公司，50～200目)、梅特勒電子天平(梅特勒托利多儀器上海有限公司，120 g/0.1 mg及500 g/0.1 g)、紫外分光光度計(島津UV2401)。選用清潔級昆明系小白鼠，18～22 g，雌雄各半，由貴陽醫學院實驗動物中心提供，合格證號SCXK(黔)2008-0005。

1.3方法

1.3.1腹腔毛細血管通透性的測定采用冰醋酸復制小鼠腹腔毛細血管通透性增高模型。取60 只小鼠，雌雄各半，隨機分為6組，每組10只，即空白組、模型組、陽性組以及酢漿草水提取物低 (0.07 mg/g)、中(0.14 mg/g)、高(0.21 mg/g)劑量組；空白組和模型組以0.01 mL/g給予同體積生理鹽水灌胃，陽性組以0.005 mg/g劑量給予阿司匹林灌胃，酢漿草水提物低、中、高劑量組以不同劑量灌胃。各組小鼠每日灌胃1 次，連續灌胃3 d。末次灌胃1 h后，小鼠尾靜脈注射0.6%依文思藍生理鹽水溶液0.01 mL/g，隨即腹腔注射0.8%冰醋酸生理鹽水溶液0.01 mL/g致炎。2 h后脫頸處死小鼠，腹腔注射6 mL生理鹽水，輕揉小鼠腹部，輕微振搖，于腹腔收集腹腔清洗液，4 000 r/min離心15 min，取上清液，用紫外分光光度計于590 nm波長處測定吸光度值[5]，以判定各組小鼠腹腔毛細血管通透性的變化。1.3.2扭體實驗采用冰醋酸復制小鼠扭體模型。取50只小鼠，雌雄各半，隨機分為5組，每組10只，即模型組、陽性組、酢漿草水提物低 (0.07 mg/g)、中(0.14 mg/g)及高(0.21 mg/g)劑量組。模型組以0.01 mL/g給予同體積生理鹽水灌胃，陽性組以0.005 mg/g劑量給予阿司匹林灌胃，酢漿草水提物以低 (0.07 mg/g)、中(0.14 mg/g)、高(0.21 mg/g)劑量予以不同劑量灌胃。各組小鼠每日灌胃1次，連續灌胃3 d。末次灌胃1 h后，予各組小鼠腹腔注射0.8%的冰醋酸生理鹽水溶液0.01 mL/g，穩定5 min后，記錄10 min之內小鼠發生扭體反應(腹部內凹、軀干和后腿伸張、臀部高起為1次扭體反應)的次數，并計算藥物對扭體反應的抑制率[5]。

抑制率(%)=生理鹽水組扭體均數-給藥組扭體均數/生理鹽水組扭體均數×100%

1.3.3自由基清除能力測定實驗時，配制濃度為1×10-4mol/L的DPPH 乙醇溶液(即自由基溶液)，閉光置于搖床上輕輕搖動10 min，備用。將酢漿草水提物配成10倍終濃度的水溶液(濃度分別為0 mg/L、1 mg/L、10 mg/L、100 mg/L)，吸取各濃度藥液300 μL，分別加入1×10-4mol/L的DPPH 醇溶液2 700 μL。搖勻后標記為待檢測樣品，室溫放置30 min后使用紫外分光光度計于517 nm波長處檢測各樣品的吸光度值，以判定不同濃度酢漿草水提物對自由基溶液的清除水平。每組3個復孔，重復3次實驗[6]。

1.4統計學方法

2結果

2.1小鼠腹腔毛細血管通透性

模型組小鼠腹腔清洗液的吸光度值與空白組比較明顯升高，差異有統計學意義(P<0.001)，說明冰醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性增高的炎癥模型建立成功。酢漿草水提物中、高劑量組小鼠腹腔清洗液的吸光度值與模型組比較明顯降低，差異有統計學意義(P<0.01，P<0.001)。見圖1。

(1)與空白組比較，P<0.001；(2)與模型組比較，P<0.01；(3)與模型組比較，P<0.001圖1　各組小鼠腹腔毛細血管通透性Fig.1　The celiac capillary permeability in each group

2.2小鼠扭體實驗

如表1所示，陽性組以及酢漿草水提物中、高劑量組的扭體次數與模型組比較明顯減少，差異有統計學意義(P<0.001)，酢漿草水提物中、高劑量組小鼠的扭體抑制率低于陽性組小鼠，提示中、高劑量組酢漿草水提物可抑制小鼠扭體。見表1。

2.3自由基清除能力

以酢漿草提取物濃度為0 mg/L組吸光度值為參照，1～100 mg/L濃度的酢漿草水提取物組能夠發揮直接清除DPPH自由基的作用。酢漿草水提取物濃度1、10及100 mg時共吸光度值分別為(87.24±0.15)、(85.13±0.16)及(64.21±0.11)，均低于未加酢漿草的吸光度值(100.00±0.15)，差異有統計學意義(P<0.01)。

表1　各組小鼠的扭體次數和

(1)與模型組比較，P<0.001

3討論

酢漿草是貴州省苗族習用藥材，收載于《貴州省中藥材、民族藥質量標準》2003年版[2-3]，以酢漿草為主藥開發的制劑品種在臨床上發揮了較好的治療作用，帶動當地制藥產業和經濟水平的發展。目前，水提取法是酢漿草等臨床制劑常用的提取方法，酢漿草藥理活性研究主要集中在體外抗菌方面，關于酢漿草提取物體內抗炎鎮痛藥效的報道仍然十分薄弱，極大限制了酢漿草的臨床應用[4,7-9]。

本文采用酢漿草水提取物，建立藥理學抗炎和鎮痛模型，以此考察酢漿草水提物在體內的抗炎和鎮痛藥效，并初步研究其抗炎作用方式。本研究中，實驗小鼠均沒有中毒死亡等現象，說明酢漿草安全性較高。在經典抗炎鎮痛藥理模型中[5]，冰醋酸使小鼠腹腔毛細血管通透性明顯增高，滲出液吸光度值顯著上升，表明小鼠腹腔毛細血管通透性增高模型建立成功。腹腔注射冰醋酸以后小鼠出現不同程度的扭體，表明小鼠扭體模型建立成功。實驗結果提示酢漿草水提物可明顯降低腹腔毛細血管通透性，抑制冰醋酸所致小鼠扭體反應，兩個經典實驗共同說明酢醬草水提物具有抗炎鎮痛作用。本研究結果顯示，酢漿草水提取物能夠在1～100 μg/mL濃度內發揮直接清除DPPH自由基的作用，推測酢漿草水提取物的抗炎活性可能與其能夠較好的直接清除機體內DPPH等自由基有關。目前對于酢漿草的最佳提取方法及其作用機制還有待于進一步研究。

4參考文獻

[1] 王海生，王隸書，范艷君,等.酢漿草提取物中總黃酮含量的分光光度法測定[J].時珍國醫國藥， 2011(3)：578-579.

[2] 貴州省食品藥品監督管理局編.貴州省中藥材、民族藥材質量標準[M].貴州：貴州科技出版社， 2003：366.

[3] 江毅，李朝斗，楊衛平，等.草藥彩色圖集[M]. 貴州：貴州科技出版社， 2001：324.

[4] 張萌，王俊麗.酢漿草研究進展[J].黑龍江農業科學， 2012(8)：150-155.

[5] 徐叔云，卞如濂，陳修.藥理研究方法學[M].3版.北京：人民衛生出版社， 2002：798-799.

[6] 裘璐，郝小燕，張一. 肖氏生物液抗氧化活性分析[J]. 貴陽醫學院學報, 2011(3): 251-254.

[7] 劉世旺，徐艷霞，石宏武.酢漿草乙醇提取物對細菌生長曲線的影響[J].北方同藝， 2007(3)：113-115.

[8] 王玉仙，丁良，申文增，等.酢漿草的抗炎作用[J].醫學研究與教育， 2010(5)：11-13.

[9] 丁良，李靜，楊慧.酢漿草提取物體外抗氧化活性研究[J].遼寧中醫雜志， 2011(10)：2055-2056.

(2016-01-06收稿，2016-03-23修回)

中文編輯： 文箐潁； 英文編輯： 劉華

Effect of Anti-Inflammatory and Analgesia Activities of Aqueous Extracts of Miao MedicineOxaliscorniculataL.

CUI Jun1, YANG Yaxin2, ZHENG Lin3, DONG Li3, HE Bin3, LIU Ting4, LI Jing4, MU Qiong1

(1.DepartmentofGeneralPractice,GuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004,Guizhou,China; 2.SchoolofPharmacy,GuiyangUniversityofTCM,Guiyang550002,Guizhou,China; 3.EngineeringResearchCenterofMinistryofEducationfortheDevelopmentandApplicationofEthnicMedicineandTCM,GuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004,Guizhou,China; 4.GuizhouProvincialKeyLaboratoryofPharmaceutics,GuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004,Guizhou,China)

[Abstract]Objective: To investigate anti-inflammatory and analgesia effects of aqueous extracts of Miao medicine Oxalis corniculata L(CJCS). Methods: Sixty Kunming mice of clean grade were randomly divided into control group, model group, positive control group and low-dose group, middle-dose group, high-dose group of CJCS, 10 mice per group. Among these groups, glacial acetic acid was adopted to induce and construct celiac capillary permeability model. Another fifty mice were randomly divided into model group, positive control group and low-dose group, middle-dose group, high-dose group of CJCS, 10 mice per group. Among these groups, glacial acetic acid was adopted to induce and construct writhing model. Control group and model group was orally administered with equal volume of physiological saline, and positive group was orally administered with 0.005 mg/g of aspirin. Low-dose group, middle-dose group and high-dose group was orally administered with 0.07 mg/g, 0.14 mg/g and 0.21 mg/g of CJCS, respectively. All groups received continuous oral administration of 3 d, and the mice were sacrificed 1 hour after the last intragastric administration of glacial acetic acid for celiac capillary permeability model. The absorbance value of celiac washing liquid of sacrificed mice was detected by UV spectrophotometer to determine changes in celiac capillary permeability. For the writhing model, the writhing times within 10 min were recorded and writhing inhibition rates were calculated. DPPH assay was adopted to preliminarily evaluate the free radical scavenging activities of aqueous extracts of CJCS. Results: The absorbance value of celiac washing liquid of middle-dose group and high-dose group were significantly lower than that of model group,(P<0.01 and P<0.001). The writhing times within 10 min of middle-dose group and high-dose group were significantly lower than that of model group (P<0.001). The results suggested that middle-dose group and high-dose group of CJCS could remarkable suppressed the increase of peritoneal capillary permeability induced by acetic acid. 1～100 mg/L concentration of CJCS could show strong free radical scavenging activity in vitro. Conclusion: CJCS aqueous extracts have anti-inflammatory and analgesia effects.

[Key words]mice; Miao medicine; Oxalis corniculata L.; plant extracts; anti-inflammatory; analgesia; Guizhou

[中圖分類號]R29； RZ273

[文獻標識碼]A

[文章編號]1000-2707(2016)04-0427-03

*通信作者E-mail:mu0731@126.com

網絡出版時間：2016-04-20網絡出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20160420.1823.030.html