落葉松-楊柵銹菌MKK基因的克隆與生物信息學(xué)分析1)

李瑞茜　于丹　余仲東　曹支敏

(西北農(nóng)林科技大學(xué)，楊凌，712100)

?

落葉松-楊柵銹菌MKK基因的克隆與生物信息學(xué)分析1)

李瑞茜于丹余仲東曹支敏

(西北農(nóng)林科技大學(xué)，楊凌，712100)

摘要利用同源克隆技術(shù)，從落葉松-楊柵銹菌(Melampsora larici-populina Kleb.)菌株Wh03中克隆得到釀酒酵母MKK1和MKK2的同源基因，命名為MlpMKK1/2-WH。測序結(jié)果顯示，MlpMKK1/2-WH基因的開放閱讀框長度為1 218 bp，編碼405個氨基酸。MlpMKK1/2-WH蛋白具有保守的PKc_Pek1_like和Pkinase結(jié)構(gòu)域。系統(tǒng)進化樹分析表明,MlpMKK1/2-WH與柄銹菌屬3種銹菌中的同源蛋白親緣關(guān)系最近。

關(guān)鍵詞落葉松-楊柵銹菌；MKK基因；同源克隆；生物信息

分類號S718.81；S763.11

Cloning and Bioinformatical Analysis of MKK Gene fromMelampsoralarici-populina//

Li Ruixi, Yu Dan, Yu Zhongdong, Cao Zhimin

(Northwest A & F University, Yangling 712100, P. R. China)//Journal of Northeast Forestry University，2016,44(5)：84-87.

By using homology-based cloning method, the geneMlpMKK1/2-WH was cloned and sequenced fromMelampsoralarici-populina(Mlp) Chinese strain Wh03. The full-length ORF ofMlpMKK1/2-WH was 1 218 bp, encoding 405 amino acid residues. The deducedMlpMKK1/2-WH protein contains conserved PKc_Pek1_like and Pkinase domains. By phylogenetic analysis, MlpMKK1/2-WH had the closest relationship with the othologs from three rust fungi belonging to the genusPuccinia.

KeywordsMelampsora larici-populina； MKK gene； Homology cloning； Bioinformatical analysis

絲裂原活化蛋白激酶(MAPKs)級聯(lián)反應(yīng)途徑在適應(yīng)環(huán)境脅迫和形態(tài)調(diào)節(jié)方面具有重要的作用[1]。在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)方面具有關(guān)鍵作用的MAPK級聯(lián)反應(yīng)途徑在真核生物中普遍存在，一般包括依次被磷酸化而激活的3個相互關(guān)聯(lián)的蛋白激酶[2-3]，分別為絲裂原活化蛋白激酶激酶激酶(MAPKKK或MEKK)、絲裂原活化蛋白激酶激酶(MAPKK或MEK)和絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)。模式物種釀酒酵母中MAPK信號途徑研究的較為深入和全面，主要包含Kss1/Fus3類、Kss1類、Slt2類、Hog1類和Smk1類5種MAPK途徑[4]。其中，Bck1-MKK1/MKK2-Slt2類MAPK途徑調(diào)控釀酒酵母細胞壁完整性并促進其細胞壁的生物合成[5]。在釀酒酵母中，任何一個MKK基因的缺失都沒有產(chǎn)生明顯的表型缺陷，而MKK1和MKK2基因同時缺失卻引起一種對溫度敏感但可被滲透壓穩(wěn)定劑抑制的細胞裂解缺陷[6]。研究表明，玉米黑粉病菌MKK1基因比較保守，參與了該物種細胞壁完整性的調(diào)控[7]。人類病原新型隱球菌MKK1基因是溫度敏感型相關(guān)基因，也在維持細胞壁完整性方面具有重要作用，同時該基因的缺失會導(dǎo)致病原菌黑色素產(chǎn)量的下降[8]。……