地木耳護(hù)膚品的配制及性能檢驗和功效測試

劉淑芳　康苗苗　馮佳　呂俊平　劉琪　謝樹蓮

摘要：為探索天然植物資源在護(hù)膚美容方面的功效，以地木耳（Nostoc commune Vauch.）提取物為原料，配制了護(hù)膚霜、潤膚露、化妝水和面膜等護(hù)膚品，對其性能和功效進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，配制的護(hù)膚品外觀均勻、細(xì)膩，色澤自然，分散均一，易涂展，膚感清爽，且具有良好的穩(wěn)定性；外界溫度變化和振搖均不影響其狀態(tài)和功效；對金黃色葡萄球菌、枯草芽胞桿菌和大腸桿菌均有明顯的抑制作用，具有廣譜抗菌性；同時，涂敷后清爽滋潤，無不適，安全無毒無副作用。地木耳護(hù)膚品對自由基具有較強(qiáng)的清除作用，保濕性好，紫外吸收能力強(qiáng)，對酪氨酸酶的抑制率較大，具有抗皺抗衰、保濕、防曬、美白的多重功效。

關(guān)鍵詞：地木耳；護(hù)膚品；穩(wěn)定性；抑菌性；抗氧化性

中圖分類號：F326：Q949.22⁺5 文獻(xiàn)標(biāo)識號：A 文章編號：1001—4942（2016）03—0123—07

地木耳（Nostoc commune Vauch.）是一種陸生藍(lán)藻，屬藍(lán)藻門（Cyanophyta）念珠藻科（Nosto-caceae）念珠藻屬（Nostoc）。該種分布范圍很廣，資源豐富，一般在夏秋季雨后大量生長。地木耳具有很高的營養(yǎng)價值，是理想的藥食同用資源。由于地木耳含有海藻糖、鼠李糖、果膠多糖類、葡萄糖苷、胡蘿卜素、藻藍(lán)素以及胞外多糖等多種活性成分，因而還具有良好的抗氧化以及保濕、防曬等功效。

目前人們更多青睞的是以植物天然活性成分為原料，對人體安全無毒無副作用的護(hù)膚產(chǎn)品。雖然地木耳具有一定的護(hù)膚功效，也有文獻(xiàn)對其多糖提取工藝進(jìn)行過報道，但以地木耳活性成分為原料配制護(hù)膚產(chǎn)品的研究還未見報道。

護(hù)膚品可分為膏霜類、粉類以及液體類，適用于不同膚質(zhì)的人群。筆者以地木耳提取物為原料，配制了護(hù)膚霜、潤膚露、化妝水和面膜等護(hù)膚品，以期為該資源的深度開發(fā)利用提供理論基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1地木耳提取物的制備

地木耳干品采自山西神池。于40～50℃溫水中泡發(fā)后清洗干凈，并放置在干燥陰涼處晾干，用高速多功能粉碎儀（SL—500A型，浙江永康松青）粉碎，100目過篩，制得地木耳粉。稱取2 g地木耳粉，置于250 mL廣口瓶中，加入100 mL無水乙醇。在40℃下恒溫水浴浸提10 h，過濾，再將濾渣繼續(xù)用50 mL無水乙醇40℃恒溫浸提10min，過濾后將濾液合并，在58℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)（RE-52C型，上海隆拓）濃縮至5 mL左右，密封至4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

供試菌種金黃色葡萄球菌（Staphylococcus au-FelLs）、枯草芽胞桿菌（Bacillus subtilis）和大腸桿菌（Escherichia coli），由山西大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院微生物學(xué)實驗室提供。

所用試劑購自北京國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司和Sigma公司，均為分析純。去離子水配制。

1.2地木耳護(hù)膚品的制備

1.2.1地木耳護(hù)膚霜的制備 原料組分按重量份數(shù)計為地木耳提取物4.0～8.0，硬脂酸4.5～6.5，十六醇5.0～7.5，白油3.1～4.1，羊毛脂1.2～1.8，三乙醇胺0.5～0.8，甘油6.5～10.0，尼泊金丙酯0.10～0.15，無水乙醇2.1～2.5，去離子水70～80。將硬脂酸、十六醇、白油、羊毛脂和三乙醇胺置于電熱恒溫水浴鍋中攪拌加熱至80～90℃，完全熔化成均相，然后按比例加入甘油和去離子水并于45℃下保溫20 min。滅菌后過濾。降溫至60～70℃時加入地木耳提取物。攪拌降溫至45℃左右時加入適量尼泊金丙酯，繼續(xù)攪拌后冷卻靜置，得最終產(chǎn)品。

1.2.2地木耳化妝水的制備 原料組分按重量份數(shù)計為地木耳提取物5.0～9.0，十六醇8.5～12.0，羊毛脂0.12～0.23，三乙醇胺0.5～0.8，甘油13.3～15.0，無水乙醇2.1～2.5，尼泊金丙酯0.1～0.15，去離子水100～110。在80～90℃下將十六醇、羊毛脂、三乙醇胺攪拌加熱至完全熔化成均相，然后加入甘油和去離子水并于45℃下保溫20 min。滅菌后過濾。降溫至60～70℃時加入地木耳提取物。攪拌降溫至45℃時加入適量尼泊金丙酯，繼續(xù)攪拌后冷卻靜置，得最終產(chǎn)品。

1.2.3地木耳潤膚露的制備 原料組分按重量份數(shù)計為地木耳提取物4.0～8.0，硬脂酸1.7～3.5，十六醇6.5～9.0，白油0.4～1.0，羊毛脂0.5～1.0，三乙醇胺0.5～0.8，甘油8.9～12.0，尼泊金丙酯0.1～0.15，無水乙醇2.1～2.5，去離子水90～100。在電熱恒溫水浴鍋中將甘油和少量去離子水?dāng)嚢杓訜嶂?0～90℃，再加入硬脂酸、十六醇、白油、羊毛脂和三乙醇胺，攪拌加熱使其完全熔化成均相。滅菌后過濾。降溫至60～70℃時加入地木耳提取物，攪拌降溫至45℃時加入適量尼泊金丙酯，繼續(xù)攪拌后冷卻靜置，得最終產(chǎn)品。

1.2.4地木耳剝離型面膜的制備 原料組分按重量份數(shù)計為地木耳提取物7.0～9.0，聚乙烯醇10.0～13.0，甘油5.0～6.0，無水乙醇3.0～4.0，羊毛脂1.5～2.0，三乙醇胺0.5～0.6，尼泊金丙酯0.1～0.15，氧化鋅10.0～12.0，鈦白粉15.0～18.0，羧甲基纖維素鈉5.0～6.0，去離子水80～100。將無水乙醇、羊毛脂、三乙醇胺在電熱恒溫水浴鍋中攪拌加熱至70～80℃，待其完全熔化后靜置10 min，然后加入鈦白粉、氧化鋅、羧甲基纖維素鈉、甘油和去離子水，在（80±5）℃保溫20min。滅菌后過濾。降溫至60～70℃時加入地木耳提取物，攪拌降溫至45℃時加入適量尼泊金丙酯，繼續(xù)攪拌后冷卻靜置，得最終產(chǎn)品。

1.2.5地木耳面貼型面膜的制備 原料組分按重量份數(shù)計為地木耳提取物7.0～9.0，十六醇5.5～7.0，白油0.5～1.0，丙三醇6.0～7.0，無水乙醇2.0～3.0，羊毛脂2.5～3.0，三乙醇胺0.5～0.6，尼泊金丙酯0.1～0.15，去離子水100～110。在80～90℃下將十六醇、白油、羊毛脂和三乙醇胺攪拌加熱至完全熔化成均相，然后加入甘油和去離子水，在45℃下保溫20 min。滅菌后過濾。降溫至60℃時加入地木耳提取物，繼續(xù)攪拌加入無水乙醇和尼泊金丙酯，靜置冷卻至室溫，得到面貼液。將安全無毒、無副作用的市售無紡布裁剪成人面部性狀，并在人眼、鼻、唇部位留出相應(yīng)空隙，再將其浸潤于面貼液，放置20～30 min，得最終產(chǎn)品。

1.3地木耳護(hù)膚品的性能檢驗

1.3.1基礎(chǔ)理化指標(biāo)檢驗 參照國家標(biāo)準(zhǔn)，主要從感官方面對地木耳配制的護(hù)膚品色澤、氣味、粘稠度、涂展性、產(chǎn)品結(jié)構(gòu)、pH值進(jìn)行評價，確定是否符合標(biāo)準(zhǔn)。

1.3.2穩(wěn)定性檢驗 取3～5 g地木耳護(hù)膚霜、潤膚露和剝離型面膜、3～5 mL化妝水和面貼液進(jìn)行穩(wěn)定性測試。

（1）耐寒性試驗：于-20℃冰箱中冷凍儲存24 h后取出，置于室溫下放置20～30 min后，觀察是否有分層或浮油現(xiàn)象，色澤和狀態(tài)是否變化。

（2）耐熱性試驗：于40℃下恒溫水浴8 h后取出，觀察是否有油水分離現(xiàn)象，色澤是否變化。

（3）冷熱交替循環(huán)試驗：于40℃下恒溫水浴24 h，取出在室溫下放置24 h，再置于-20℃冰箱內(nèi)冷凍24 h。循環(huán)3次，觀察是否有分層或浮油，色澤是否變化。

（4）離心試驗：放入高速冷凍離心機(jī)（TGL-16G℃，上海安亭）中，室溫下4000 r/min離心30 min，觀察是否有結(jié)塊或顆粒狀化學(xué)成分析出的乳析現(xiàn)象。

1.3.3抑菌性檢驗 供試菌種為金黃色葡萄球菌、枯草芽胞桿菌和大腸桿菌。培養(yǎng)基為牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。通過平板稀釋涂布法，對菌落進(jìn)行計數(shù)。設(shè)定3個組，對照組只有液體培養(yǎng)基和菌種，試驗組1在對照組基礎(chǔ)上加入了除地木耳提取物之外的其它成分，試驗組2則是在對照組基礎(chǔ)上加入了地木耳護(hù)膚品的所有成分。每個處理重復(fù)3次。

1.3.4安全性檢驗 采用皮膚開放型斑貼試驗對配制的地木耳護(hù)膚品進(jìn)行安全性檢驗。選擇6名非高度敏感體質(zhì)的成年志愿者作為受試對象，在上肢大臂處選取面積約5×5 cm²的區(qū)域，清潔后將供試地木耳護(hù)膚品均勻涂敷，每天2次（面膜涂敷20 min后洗凈）。24 h后觀察皮膚反應(yīng)。連續(xù)試驗7 d。

1.4地木耳護(hù)膚品的功效測試

1.4.1樣品預(yù)處理 由于配制的地木耳護(hù)膚品中除活性成分外還添加了油性類基礎(chǔ)試劑，為使測試結(jié)果便于觀測，在測試前，要對配制得到的樣品進(jìn)行預(yù)處理。取一定量樣品于試管中，加入辛酸類消泡劑1.5～2.0 mL，再加入高氯酸-過氧化氫混合液20～30 mL，放置4 h，振搖3 min，靜置過夜后過濾。取濾液10～20 mL待測。

1.4.2功效測試 參照有關(guān)文獻(xiàn)對配制得到的地木耳護(hù)膚品的功效進(jìn)行檢驗，包括抗皺、保濕和防曬。

美白功效以酪氨酸酶抑制率表達(dá)。參照有關(guān)文獻(xiàn)，以磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液（PBS，pH=6.86）、酪氨酸酶溶液（200g/mL）、左旋多巴L-Dopa溶液（用PBS配制，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為O.03%）、地木耳樣品預(yù)處理液（用PBS配制）配制A、B、C、D四種測試液，在25℃恒溫條件下放置5 min，測量475 nm波長處的吸光度值。每組試驗重復(fù)3次，取平均值，計算酪氨酸酶抑制率：

2結(jié)果與分析

2.1基礎(chǔ)理化指標(biāo)

通過感官評價及pH測試，配制的各護(hù)膚品在基礎(chǔ)理化指標(biāo)方面結(jié)果一致（表1），符合國家化妝品標(biāo)準(zhǔn)。

2.2穩(wěn)定性

通過試驗觀察，配制的各護(hù)膚品在穩(wěn)定性方面結(jié)果一致，在溫度變化及振搖下，其性能均較穩(wěn)定（表2）。

2.3抑菌性

圖1顯示了配制的不同地木耳護(hù)膚品對3種供試菌的抑菌效果。可以看出，試驗組1和對照組間差異不明顯，試驗組2對金黃色葡萄球菌、枯草芽胞桿菌和大腸桿菌都有明顯抑制作用，效果顯著或極顯著優(yōu)于對照組和試驗組1，可能是由于試驗組2添加了地木耳提取物。

2.4安全性

6名受試志愿者連續(xù)7 d試驗中，均沒有出現(xiàn)紅斑、皮膚干燥、皺褶、水腫、大皰、糜爛、色素沉著或色素減退等皮膚過敏反應(yīng)現(xiàn)象，涂敷后也沒有感到任何刺激，涂敷部位有清爽滋潤的感覺。故此初步判斷，地木耳護(hù)膚品對人體皮膚安全無毒副作用。

2.5抗皺效果

抗皺機(jī)理是消除自由基或容易生成自由基的物質(zhì)，因為自由基對皮膚的損傷作用大，也是肌膚衰老的最大威脅。清除機(jī)體內(nèi)多余的自由基有助于緩解皮膚衰老。圖2顯示了配制的不同地木耳護(hù)膚品對羥自由基（·OH）的清除效果。可以看出，不同樣品相同體積下對羥自由基的清除效果差異不大。當(dāng)?shù)啬径A(yù)處理液的加入量達(dá)到0.7 mL時，清除率就可達(dá)50%，當(dāng)加入量達(dá)到1.1 mL時，清除率可達(dá)到75%以上，可見其對羥自由基的清除效果明顯。繼續(xù)增加地木耳預(yù)處理液體積，則清除率變化不大，趨于穩(wěn)定。

圖3顯示的是配制的不同地木耳護(hù)膚品對過氧化氫（H₂O₂）的清除效果。可以看出，不同樣品相同體積下對過氧化氫的清除效果差異不大。當(dāng)?shù)啬径A(yù)處理液的加入量達(dá)到0.7 mL時，清除率就可達(dá)50%，繼續(xù)增加地木耳預(yù)處理液體積，清除率緩慢上升，可達(dá)80%以上，可見其對過氧化氫清除效果明顯。

2.6保濕效果

失水率是衡量護(hù)膚品保濕性的重要指標(biāo)。如失水率過大，易造成有效成分的損失，則吸收效果欠佳。圖4顯示了配制的不同地木耳護(hù)膚品在一定時間內(nèi)的失水率及與去離子水和甘油水溶液的比較。可以看出，不同樣品在8 h內(nèi)，失水率明顯小于去離子水，與甘油水溶液差異不大，而甘油是已知保濕效果較好的護(hù)膚品常用添加劑，說明地木耳護(hù)膚品具有較好的保濕效果，特別是地木耳護(hù)膚霜和潤膚露效果更佳。

2.7防曬效果

防曬實際上就是防止紫外線輻射造成的皮膚損傷。紫外吸收率的大小可有效地反映相關(guān)產(chǎn)品的防曬效果。對紫外線吸收率在80%以上時，一般認(rèn)為具有防曬效果，吸收率90%時，則防曬效果顯著。

圖5是配制的不同地木耳護(hù)膚品不同波長范圍內(nèi)的平均紫外線吸收率。可以看出，在波長280～400 nm內(nèi)，不同樣品紫外吸收率均大于80%，說明地木耳護(hù)膚品對紫外線的吸收效果較好，具有防曬功效。不同樣品的防曬效果差異不顯著，地木耳護(hù)膚霜、潤膚露和剝離型面膜等膏體類樣品效果更佳。

2.8美白效果

酪氨酸酶是黑色素合成的關(guān)鍵酶。因此，適當(dāng)抑制酪氨酸酶的活性可對皮膚起到一定的美白作用。圖6是配制的不同地木耳護(hù)膚品對酪氨酸酶活性的抑制率。可以看出，不同樣品對酪氨酸酶的活性均有明顯的抑制作用，且隨著地木耳預(yù)處理液加入量的增加抑制率也上升，當(dāng)?shù)啬径A(yù)處理液加入量為0.5 mL時，抑制率可達(dá)70%左右，繼續(xù)增加地木耳預(yù)處理液則抑制率增加不明顯。不同樣品間差異不大，以護(hù)膚霜和潤膚露效果更佳。

3討論與結(jié)論

配置的地木耳護(hù)膚品基礎(chǔ)理化指標(biāo)符合國家行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，且具有良好的穩(wěn)定性，外界溫度變化和振搖均不影響其狀態(tài)和功效。對金黃色葡萄球菌、枯草芽胞桿菌和大腸桿菌均有明顯的抑制作用，具有廣譜抗菌性。同時，涂敷后清爽滋潤，沒有任何不適，可見其安全無毒無副作用。

羥自由基和過氧化氫能對皮膚產(chǎn)生明顯的損傷，導(dǎo)致衰老。從研究結(jié)果看，地木耳護(hù)膚品對這些物質(zhì)具有較強(qiáng)的清除作用，因而地木耳護(hù)膚品具有較強(qiáng)的抗氧化能力，也即對皮膚具有明顯的抗皺抗衰老作用。保濕作用是護(hù)膚品最重要的功效，在一定的時間內(nèi)，失水率越小，保濕性能越好。研究結(jié)果顯示地木耳護(hù)膚品在8 h內(nèi)失水率很低，與甘油相當(dāng)。同時，地木耳護(hù)膚品在280～400 nm波長范圍內(nèi)平均紫外線吸收率在80%以上，具有較好的防曬效果。此外，地木耳護(hù)膚品對酪氨酸酶的抑制率較大，兼具有一定的美白效果。可見，地木耳護(hù)膚品具有抗皺抗衰、保濕、防曬、美白的多重功效。特別是護(hù)膚霜、潤膚露等膏體類制品效果更優(yōu)。

目前，人們對植物源天然活性物質(zhì)的護(hù)膚品較為青睞。地木耳是一種營養(yǎng)豐富，藥食同用，且具有多重護(hù)膚功效的天然植物。在實際應(yīng)用中，其活性物質(zhì)提取工藝簡單，易于掌握，還可調(diào)整配方中各成分的比例，以適用于不同膚質(zhì)的人群，達(dá)到理想的護(hù)膚效果，因而將其應(yīng)用于護(hù)膚品生產(chǎn)具有良好的市場前景。

從環(huán)境保護(hù)和食品安全的角度來看，熱水處理因其簡便、無污染、無公害等優(yōu)點應(yīng)用前景廣闊，而且筆者發(fā)現(xiàn)適宜熱水處理后油桃的光澤度增加，色澤更加鮮艷，這在近幾年流行的鮮切油桃生產(chǎn)方面有著巨大潛力。然而，熱水處理對油桃果實生理的影響非常復(fù)雜，還需要在本試驗基礎(chǔ)上，從有機(jī)酸代謝、蛋白質(zhì)代謝、酶促反應(yīng)和采后果蔬衰老機(jī)制及細(xì)胞分子水平等多方面進(jìn)行深入系統(tǒng)研究，以揭示熱水處理對油桃果實影響的內(nèi)在機(jī)理。