10種殺菌劑對(duì)橡膠樹白根病菌的毒力測(cè)定

賀春萍 李銳 吳偉懷 吳海理 鄭肖蘭 梁艷瓊 鄭金龍 易克賢 習(xí)金根

摘 要 為了篩選有效防治藥劑，在室內(nèi)采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定了10種殺菌劑原藥對(duì)橡膠樹白根病菌的室內(nèi)毒力。結(jié)果表明：戊唑醇、腈菌唑、丙環(huán)唑、抑霉唑、三唑酮、咪鮮胺、嘧菌酯、十三嗎啉8種藥劑對(duì)橡膠樹白根病菌均具有較高的敏感性，抑菌效果較好，其EC50在0.017 7～6.013 6 μg/mL，其中戊唑醇的毒力最強(qiáng)，EC50為0.017 7 μg/mL；腈菌唑、丙環(huán)唑、抑霉唑的抑制作用較強(qiáng)，其EC50分別為0.027 8、0.045 6和0.077 3 μg/mL。甲基托布津抑菌效果最差，EC50為41.299 0 μg/mL。

關(guān)鍵詞 橡膠樹 ；白根病菌 ；殺菌劑 ；毒力測(cè)定

分類號(hào) S482.2 Doi：10.12008/j.issn.1009-2196.2016.02.014

Evaluation of Ten Fungicides for Suppression of Rigidoporus lignosus

HE Chunping1） LI Rui1） WU Weihuai1） WU Haili2）

ZHENG Xiaolan1） LIANG Yanqiong1） ZHENG Jinlong1） YI Kexian1） XI Jingen1）

（1 Environment and Plant Protection Institute / Ministry of Agriculture Key Laboratory

of Integrated Pest Management on Tropical Crops / Hainan Key Laboratory for Monitoring

and Control of Tropical Agricultural Pests， CATAS， Haikou， Hainan 571101， China

2 College of Environment and Plant Protection，Hainan University， Haikou， Hainan 570228， China）

Abstract White root disease caused by Rigidoporus lignosus is a major killer of young replanted rubber in foreign countries， and is the entry plant quarantine disease in China. In order to better realize this disease and to control it， toxicity test of 10 fungicides to Rigidoporus lignosus were tested in vitro. The results showed that the toxicity of tebuconazole， mycolbutanil， propiconazole， imazalil， triadimefon， prochloraz， azoxystrobin and tridemorph were effective in reducing the mycelia growth， with EC50 in the range of 0.0177～6.0136 μg/mL； that for tebuconazole was most effective， EC50 was 0.0177 μg/mL； followed by mycolbutanil， propiconazole and imazalil. EC50 was 0.0278 μg/mL， 0.0456 μg/mL and 0.0773 μg/mL respectively. And that for thiophanate-methyl was the worst， with EC50 was 41.2990 μg/mL.

Keywords rubber tree ； Rigidoporus lignosus ； fungicide ； toxicity

橡膠樹白根病[Rigidoporus lignosus（Klotzsch） Imaz.]是一種世界性病害，該病于1904年在新加坡首先發(fā)現(xiàn)，后在馬來西亞、印尼（爪哇、蘇門答臘）、泰國(guó)、印度、斯里蘭卡、柬埔寨、緬甸、科特迪瓦、尼日利亞、剛果、加蓬等地發(fā)生[1]。橡膠樹白根病主要為害幼齡期橡膠樹[2]。在植膠前、后未進(jìn)行預(yù)防處理的幼樹區(qū)，其發(fā)病率可達(dá)60%[3]。橡膠樹白根病是我國(guó)的進(jìn)境植物檢疫性病害，在東南亞橡膠植膠區(qū)曾造成過嚴(yán)重?fù)p失[4-5]。1983年11月，我國(guó)在海南東太農(nóng)場(chǎng)橡膠林段中首次發(fā)現(xiàn)白根病，發(fā)病面積達(dá)26 hm2，因發(fā)現(xiàn)及時(shí)已鏟除[6]，直至1992年我國(guó)才有該病危害橡膠的報(bào)道[4]。白根病菌不僅侵害橡膠樹，還可侵染熱帶地區(qū)的許多林木、果樹等作物，如柑桔、茶、椰子、胡椒、咖啡、可可、檳榔、菠蘿蜜、油棕、樟樹、木薯、魚藤、竹、豆科遮蔭樹及覆蓋作物等，至今仍是植膠國(guó)的一個(gè)極嚴(yán)重的問題[7]。防治橡膠樹白根病一直以來主要是采取化學(xué)藥劑灌根處理。國(guó)外60年代始，珀里斯[8]、馬來亞橡膠研究所[9]、Tran Van Canh[10]、Gustav Hiepko[11]等對(duì)橡膠樹白根病進(jìn)行了防治技術(shù)方面的研究。珀里斯研究報(bào)道，化學(xué)藥劑Tillex不能完全抑制橡膠樹白根病菌，清除橡膠樹白根病病源營(yíng)養(yǎng)基地是處理病樹的主要措施；馬來亞橡膠研究所研究表明Formaac 2和Fomicide藥劑可作為防治白根病的根頸保護(hù)劑；Tran和Gustav Hiepko研究表明，十三嗎啉對(duì)橡膠樹白根病有良好的防效。國(guó)內(nèi)有關(guān)橡膠樹白根病菌的室內(nèi)藥劑毒力測(cè)定報(bào)導(dǎo)甚少，僅陳照等[2]2007年測(cè)定了12種市售內(nèi)吸性殺菌劑對(duì)橡膠樹白根病菌的敏感性，研究結(jié)果表明，以烯效唑?yàn)橹鞯娜蝾悮⒕鷦?duì)橡膠樹白根病菌有較好的抑制作用。本研究為了能夠?qū)ふ业礁咝А踩⒌统杀镜南鹉z樹白根病防治藥劑，測(cè)定了10種殺菌劑原藥對(duì)橡膠樹白根病菌的室內(nèi)毒力，了解不同殺菌劑對(duì)白根病菌的敏感性，分析不同藥劑濃度對(duì)菌株菌落生長(zhǎng)速度的影響，以便為生產(chǎn)上更好的預(yù)防、防治該病害提供科學(xué)的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株來源

橡膠樹白根病菌菌株RL-001采自云南省河口縣螞蝗堡作業(yè)區(qū)那梭隊(duì)，由中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院環(huán)境與植物保護(hù)研究所特色熱作病害課題組分離、鑒定與保存。

1.1.2 供試培養(yǎng)基

PDA培養(yǎng)基。

1.1.3 供試藥劑

采用菌絲生長(zhǎng)速率法先進(jìn)行供試濃度的初步篩選，在進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，確定各供試藥劑最低的抑制質(zhì)量濃度，配制6個(gè)質(zhì)量濃度梯度含毒的PDA培養(yǎng)基平板。供試的殺菌劑種類、生產(chǎn)廠家及試驗(yàn)濃度范圍見表1。

1.2 方法

1.2.1 殺菌劑抑菌效果測(cè)定

在無菌操作臺(tái)上，將各供試藥劑用無菌水配制成有效成分為5 000 μg/mL的母液，然后用無菌水稀釋配置成6個(gè)不同濃度梯度的供試藥液。用移液槍分別吸取2 mL藥液與98 mL 融化的PDA培養(yǎng)基（溫度50℃左右）混勻，后制成系列含藥平板；加入等體積無菌水為空白對(duì)照。

將在PDA平板上培養(yǎng)3 d的參試菌株，用滅菌的打孔器在菌落邊緣打取直徑7 mm的菌餅，接種于含藥的PDA平板中央，28℃培養(yǎng)。每處理5次重復(fù)。培養(yǎng)72 h后，待空白對(duì)照組菌落的直徑長(zhǎng)至培養(yǎng)皿直徑2/3時(shí)，采用十字交叉法進(jìn)行測(cè)量，計(jì)算菌落直徑平均值和菌絲生長(zhǎng)的抑制率。

生長(zhǎng)抑制率（%）=[（對(duì)照菌落直徑-處理菌落直徑）/（對(duì)照菌落直徑-0.7）]×100。

將抑制率換算為機(jī)率值，藥劑的濃度換算成濃度對(duì)數(shù)，以設(shè)定的藥劑濃度對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，抑制機(jī)率值為縱坐標(biāo)，利用Excel 軟件求出各單劑EC50、EC95、毒力回歸方程、相關(guān)系數(shù)以及斜率值。

2 結(jié)果與分析

2.1 殺菌劑對(duì)橡膠樹白根病菌EC50值的分析

供試的殺菌劑對(duì)橡膠樹白根病菌菌絲生長(zhǎng)的強(qiáng)弱與藥劑濃度均呈正向相關(guān)。由表2可看出，戊唑醇、腈菌唑、丙環(huán)唑、抑霉唑、三唑酮、咪鮮胺、嘧菌酯和十三嗎啉對(duì)供試橡膠樹白根病菌菌株RL-001的菌絲生長(zhǎng)具有顯著抑制作用，EC50值較小，分別為0.017 7 、0.027 8、0.045 6、0.077 3、0.338 8、1.140 0、2.292 0和6.013 6 μg/mL，表現(xiàn)較敏感。相對(duì)而言，異菌脲和甲基托布津2種藥劑對(duì)菌株RL-001的菌絲生長(zhǎng)抑制稍弱，其EC50值為13.194 8和41.299 0 μg/mL。從表中可看出，10種供試的殺菌劑對(duì)橡膠樹白根病菌的毒力均存在差異，其中戊唑醇的抑菌效果最好，其次為腈菌唑。

從10種殺菌劑對(duì)橡膠樹白根病菌的EC50值來看， 10種供試藥劑可分為3個(gè)類群，其中以戊唑醇、腈菌唑、丙環(huán)唑、抑霉唑和三唑酮5種殺菌劑EC50值最小，都小于1 μg/mL，抑菌效果最好；咪鮮胺、嘧菌酯和十三嗎啉為第二類，其EC50值均介于1～10 μg/mL，抑菌效果較好；而異菌脲和甲基托布津，其EC50值較大，介于10～50 μg/mL，抑菌效果比第一、二類弱，歸為第三類。

2.2 殺菌劑對(duì)橡膠樹白根病菌EC95值的分析

由表2可知，戊唑醇的EC95值最小，僅為1.172 1 μg/mL；其次是腈菌唑和丙環(huán)唑，EC95值分別為1.552 8和4.007 2 μg/mL，二者的EC95值均小于10 μg/mL；抑霉唑、三唑酮、異菌脲、咪鮮胺的EC95值均小于100 μg/mL，EC95值分別為13.154 8、27.636 8、48.739 8和56.127 7 μg/mL；甲基托布津、嘧菌酯和十三嗎啉的EC95值均高于300 μg/mL。從EC95值來看，異菌脲的抑菌作用強(qiáng)于咪鮮胺、嘧菌酯、十三嗎啉，其抑菌結(jié)果排序與EC95值不一致，這主要是因?yàn)楦魉巹┗貧w曲線斜率不同而導(dǎo)致。

2.3 橡膠樹白根病菌對(duì)殺菌劑的敏感性

由表2可知，供試的10種藥劑毒力回歸曲線的斜率值均不同。回歸曲線的斜率與病菌對(duì)殺菌劑的敏感性成正比。10種殺菌劑對(duì)橡膠樹白根病菌菌株RL-001的斜率大小依次為：異菌脲>甲基托布津>咪鮮胺>腈菌唑>戊唑醇>丙環(huán)唑>三唑酮>抑霉唑>十三嗎啉>嘧菌酯。對(duì)該菌敏感性較大的藥效是異菌脲和甲基托布津，斜率值均大于1，其中異菌脲最高，為2.898 6，表明在供試的殺菌劑中，橡膠樹白根病菌對(duì)這兩種藥劑最敏感；其次為咪鮮胺、腈菌唑和戊唑醇；敏感性較小的藥劑為嘧菌酯和十三嗎啉。10種藥劑斜率值的最大差異（最高斜率值/最低斜率值）為5.37倍，表明橡膠樹白根病菌對(duì)10種藥劑的敏感性亦存在較大差異。

3 討論

室內(nèi)毒力測(cè)定中殺菌劑EC50值和EC95值越小、斜率越大，表明病菌對(duì)藥劑的靈敏度越高，即隨著供試藥劑質(zhì)量濃度的增加，抑制率會(huì)明顯增大[13]。目前橡膠樹根病的防治主要是采取挖溝隔離和化學(xué)防治的手段，其中藥劑防治仍然是綜合防治中的重要環(huán)節(jié)。目前國(guó)外學(xué)者主要是利用石灰、硫磺粉和十三嗎啉等藥劑來防治橡膠樹白根病，同時(shí)結(jié)合挖溝隔離、農(nóng)業(yè)栽培、高溫暴曬土壤等防治措施。國(guó)內(nèi)從60年代始生產(chǎn)上一直使用十三嗎啉來防治根病，但該藥劑昂貴，長(zhǎng)期單一使用防效有所下降。本研究通過對(duì)橡膠樹白根病菌的毒力測(cè)定，綜合分析了10種殺菌劑對(duì)白根病菌的EC50值以及毒力回歸方程斜率發(fā)現(xiàn)，戊唑醇、腈菌唑、丙環(huán)唑、抑霉唑、三唑酮、咪鮮胺、嘧菌酯和十三嗎啉雖然斜率不如異菌脲、甲基托布津大，但它們的EC50值較小；其中戊唑醇、腈菌唑、丙環(huán)唑、抑霉唑和三唑酮的EC50值均小于1 μg/mL，咪鮮胺、嘧菌酯和十三嗎啉的EC50值較小，也都具有較高的活性。三唑類殺菌劑、十三嗎啉以及咪鮮胺均可抑制真菌細(xì)胞膜甾醇的生物合成，嘧菌酯則可抑制真菌線粒體呼吸而發(fā)揮抑菌作用。與此同時(shí)，異菌脲和甲基托布津雖然斜率較高，但EC50值較大，抑菌活性較小。導(dǎo)致以上研究結(jié)果可能與藥劑的不同作用機(jī)理有關(guān)。

本研究采用農(nóng)藥原藥來進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定，研究結(jié)果相對(duì)客觀、準(zhǔn)確。通過室內(nèi)10種殺菌劑對(duì)橡膠樹白根病菌的毒力測(cè)定，初步篩選出了戊唑醇、腈菌唑、丙環(huán)唑、抑霉唑、三唑酮等三唑類殺菌劑對(duì)橡膠樹白根病菌有很強(qiáng)的抑菌效果，這與陳照[2]、LAM[14]、HOONG[15]等研究結(jié)果相吻合，且三唑類農(nóng)藥價(jià)格較低，有望作為十三嗎啉的替代藥劑應(yīng)用于橡膠樹白根病的防治。

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