金標法在無償獻血者HBsAg 檢測中的應用

王淑芳

金標法在無償獻血者HBsAg 檢測中的應用

王淑芳

目的：了解金標法在無償獻血者HBsAg檢測中的應用情況及方法學的優缺點，查找和分析其原因，探討其對減少血液報廢及保障無償獻血者的身體健康和臨床用血安全的意義和價值。方法：對2009-2013年文山州無償獻血者血樣檢測HBsAg采用金標法試紙條做初篩，用兩種不廠家的酶聯免疫試劑進行批初、復檢，并將檢測結果進行統計學處理分析，比較強陽性標本（即酶聯免疫吸附法檢測結果OD值＞2.0的標本）與金標法檢測結果，評估金標法篩選HBsAg的效果。結果：5年間無償獻血96008人份血樣HBsAg不合格395份，占0.41%（395/96008）。其中酶聯免疫試劑強陽性（即S/OD值≥2.0）的有135份，其余部分為S/OD值＜2.0和單邊陽性標本。在135份酶聯免疫吸附試驗強陽性中金標法能夠檢測出陽性的有91份。檢出率為67.4%，且各年間金標法對OD值≥2.0的檢出率分別為：100.0%，94.4%，67.5%，54.5%，52.0%，陽性率逐年下降。結論：文山州無償獻血人群HBsAg陽性者占有較高的比例，金標法漏檢率增加，是導致血液淘汰增多的重要原因之一。應注意采用更敏感的方法不斷提高檢出能力，最大限度地控制輸血傳播，保證輸血安全。

無償獻血者；乙型肝炎肝表面抗原；金標法；酶聯免疫吸附試驗

乙型肝炎病毒是一種嚴重威脅人類健康的世界性流行病毒，在我國約有1億左右HBV感染者[1，2]，而HBsAg又是乙型肝炎病毒感染最主要的病原標志和直接證據之一[3]，故此我國獻血法將HBsAg列為獻血者健康檢查的必檢項目之一。目前國內各采供血機構檢測HBsAg的主要方法是酶聯免疫吸附試驗，而金標法因其簡單、快速、特異性高、試劑穩定等特點被作為獻血者采血前的初篩方法。為了解文山州無償獻血人群HBsAg檢測金標法的作用及效果，觀察與酶聯免疫吸附試驗的符合程度，探討其漏檢情況，為本地區無償獻血招募策略提供依據，對保障無償獻血者的身體健康和臨床用血安全也具有重要的意義。我們對文山州中心血站2009-2013年無償獻血因HBsAg陽性報廢的血液的檢測結果進行總結分析，現將結果報道如下。

1 材料與方法

（1）資料來源文山州2009年1月-2013年12月96008名無償獻血者HBsAg檢測的結果。

（2）試劑與儀器EVO全自動加樣儀EVO150-8由長沙泰肯生物技術有限公司提供、FAME全自動酶免分析儀FAME16/20；FAME24/20煙臺奧斯邦生物工程有限公司提供、SUNRISE溫控酶標儀由長沙泰肯生物技術有限公司提供、實驗室管理系統liswell-4.01海深威軟件有限公司提供；HBsAgELISA診斷試劑盒由北京萬泰生物技術有限公司提供，HBsAgELISA診斷試劑盒和膠體金試紙條均為廈門英科新創生物技術有限公司產品。所有試劑均在有效期內使用。

（3）檢測方法嚴格按照GB18467_2001《獻血者健康檢查要求》、《全國臨床檢驗操作規程》(第三版)[4]及試劑說明書進行操作。金標法取左手無名指指尖末梢血50μl，滴加至金標試紙條玻璃纖維上，待血樣滲透過濾膜后，加樣本稀釋液1滴，室溫反應30min內觀察結果。檢測線和質控線出現2條帶者為HBsAg陽性;只在質控線出現1條帶者為HBsAg陰性;檢測線和質控線均不出現反應者為試驗無效，應重新檢測。陰性者獻血后用兩種酶聯免疫試劑進行批初、復檢，2種均為陽性且S/OD值≥2的標本再次做金標法檢測。

2 結果

文山州無償獻血者2009-2013年HBsAg檢測結果見表1。

表1 文山州無償獻血者2009-2013年HBsAg檢測結果

3 討論

乙型病毒性肝炎是常見的傳染性疾病，由乙肝肝炎病毒（HBV）引起[5]。HBV流行在我國比較嚴重，輸血相關感染仍是輸血安全性的第一問題[6]。無償獻血者獻血前篩查HBsAg，可以減少HBsAg陽性血液的采集，降低血液報廢率，減少獻血者和工作人員醫源性感染的風險[7]。故在獻血前用金標法篩查HBsAg是目前國內較為常用的做法，已常規用于街頭獻血前篩查[8]，血液采集后用ELISA法進行初、復檢[9]。但金標法影響因素較多，常導致陽性結果漏檢，而出現HBsAg假陰性的結果。

從我們的結果來看，無償獻血96008人份血樣HBsAg不合格395份，占0.41%（395/96008）。其中酶聯免疫試劑強陽性（即S/OD值≥2.0）的有135份，其余部分為S/OD值＜2.0和單邊陽性標本。在135份酶聯免疫吸附試驗強陽性中金標法能夠檢測出陽性的有91份。檢出率為67.4%，且各年間金標法對OD值≥2.0的檢出率分別為：100.0%，94.4%，67.5%，54.5%，52.0%，金標法陽性率自2011年起明顯降低，因而使HBsAg陽性報廢的血液自2011年起也有所增多。

分析主要原因有以下方面：①我站自2011年3月按照國家食品藥品監督管理局新規定將乙肝表面抗原檢測由原來的一步法改為兩步法，兩步法在一定程度上降低了HOOK效應，同時也因其模式改為血清溫育1小時后不洗板直接加酶的方式，延長了抗原抗體反應時間和顯色時間，在降低HOOK效應的同時，也應提高了ELISA檢測的靈敏度[10]。但有文獻報道，新兩步法雖然較一步法更加敏感，但也增加了假陽性率[11]。②在我國的HBV感染人群中，有一部分血清HBsAg呈低水平狀態存在[12]，而且乙肝病毒常易發生基因突變也會影響到HBsAg的表達，這種變異使得常規試劑對HBsAg檢測能力降低，這些標本易造成漏檢給輸血安全帶來威脅，為切實保障血液安全，提高對這些HBsAg呈低水平狀態存在的標本的檢出率，我站一方面使用靈敏度較優的新兩步法試劑，另一方面將HBsAg檢測灰區值由原來的S/CO≥0.8降低至S/CO≥0.6。這也可能是致乙肝表面抗原陽性報廢的血液增多的因素之一。③從金標法對強陽性標本的檢出率看，自2011年后，金標法對強陽性標本檢出率明顯低于之前，而且僅能檢測出酶免OD≥3左右的標本，這說明酶聯免疫吸附檢測方法從一步法改為新兩步法，其檢測能力顯著提高，進一步減少了HBsAg漏檢的可能性，大大提高了血液安全性。

總之，我國是乙型肝炎高發區，HBsAg攜帶者達10%左右［12］，因輸血感染乙型肝炎的風險不言而喻。對無償獻血者獻血前進行HBsAg篩查在降低獻血者和工作人員醫源性感染的風險、減少血液報廢、保障臨床安全用血等方面意義重大。我們的任務主要是加強篩選和提高篩查技術，要建立標準操作規程，人人掌握并嚴格執行，避免人為因素造成漏檢。同時也建議相關部門促進提高金標試劑質量，在敏感性、特異性等方面進一步提高，適應無償獻血現場HBsAg初篩的要求，最大限度地減少血液報廢。還有就是采用更先進的檢測方法（如核酸檢測技術），提高乙型肝炎病毒檢出率，進一步保障血液安全[14，15，16]。

(作者單位：文山州中心血站)

[1]Liang TJ.Hepatitis B:the virus and disease.Hepatology,2009,49 (5suppl):S13-S21.

[2]Liang X,Bi S,Yang W,et al.Epidemiological serosurvey of hepatitis B in China—declining HBV prevalence due to hepatitis B vaccination.Vaccine,2009,27(6):6550-6557.

[3]Courouce AM,Drouet J,LeMarrec N,et al.Blood donors Positive for HBsAg and negative for anti-HBc antibody.Vox sang,1985,49(2):26-33.